Expression of CD151 in Gastric Cancer Tissues and Its Clinical Significance

Objective:To explore the expression of CD151 in gastric cancer tissues and its clinical significance.Methods:Immunohistochemistry was employed to detect the expression of CD151 in gastric cancer tissues and adjacent normal tissues.The relationship between CD151 expression and the clinicopathological characteristics of gastric cancer was analyzed.Results:The expression of CD151 in gastric cancer tissues was significantly higher than in adjacent normal tissues(P<0.05).It was associated with the degree of differentiation,depth of invasion,lymph node metastasis,and TNM staging of gastric cancer.The survival time of patients with high CD151 expression was significantly shorter than that of those with low expression(P<0.05).Conclusion:High expression of CD151 in gastric cancer tissues is correlated with the malignant biological behavior of gastric cancer and can serve as an indicator for evaluating the prognosis of gastric cancer.

miR-199a-3p靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响

目的探究miR-199a-3p过表达靶向CD151对甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、凋亡、侵袭和上皮间质转化的影响。方法通过双荧光素酶报告基因实验验证miR-199a-3p和CD151的靶向关系。构建CD151pcDNA载体过表达CD151,将miR-199a-3p mimic与pcDNA-CD151单独或联合转染至B-CPAP细胞,将细胞随机分为4组:Control组、miR-199a-3p mimic组、pcDNA-CD151组和miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组。BrdU染色检测细胞增殖水平;流式细胞术检测细胞凋亡率;流式分选检测细胞周期分布;Transwell检测细胞侵袭能力;Western blot检测MMP-2、Ki-67、Cyclin D1、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达。结果CD151与miR-199a-3p存在靶向作用关系。与Control组比较,miR-199a-3p mimic组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低;pcDNA-CD151组BrdU阳性细胞数升高,细胞凋亡率降低,G2/M、G1期比例升高,S期比例降低,侵袭细胞数升高,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达升高,E-cadherin蛋白表达降低,N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高。与pcDNACD151组比较,miR-199a-3p mimic+pcDNA-CD151组BrdU阳性细胞数降低,细胞凋亡率升高,G2/M、G1期比例降低,S期比例升高,侵袭细胞数降低,MMP-2、Ki-67、Cyclin D1蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高,N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(均P<0.01)。结论miR-199a-3p过表达靶向CD151抑制甲状腺癌B-CPAP细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并诱导细胞凋亡。

整合素α3、α6在CD151促进HepG2细胞增殖、侵袭中的作用

目的观察CD151转染HepG2细胞后对细胞增殖,侵袭的影响及其与整合素的关系。方法用脂质体转染试剂,将质粒CD151及其突变体CD151-AAA转染HepG2细胞,观察转染后细胞增殖,侵袭的变化;免疫共沉淀法检测整合素的表达情况。结果 CD151-AAA突变体较CD151促细胞增殖力低,其侵袭力未见增强,且其免疫共沉淀未能检测到整合素的表达。结论 CD151促进HepG2细胞增殖,侵袭有赖于CD151-整合素α3/α6复合体的形成。

CD151促进人脐静脉内皮细胞管样结构生成依赖于CD151-整合素α3/α6复合体的形成

目的观察CD151转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC)促细胞管样结构形成,及其与整合素的相关性。方法用脂质体转染试剂,将质粒pAAV-CD151及其突变体pAAV-CD151-AAA194-196转染HUVEC,观察转染后细胞在Matrigel胶上管样结构形成情况;免疫共沉淀法检测整合素的表达情况。结果 pAAV-CD151转染组能显著促进HU-VEC管样结构形成,免疫共沉淀能检测到整合素α3、α6的表达;而CD151突变体pAAV-CD151-AAA194-196转染组促HUVEC管样结构形成能力下降,且其免疫共沉淀未能检测到整合素α3、α6的表达。结论 CD151促进HUVEC管样结构形成依赖于CD151-整合素α3/α6复合体的形成。

质粒pAAV-HRE-CD151的构建和鉴定

目的为了增加CD151基因转染大鼠缺血心肌的效率和靶向特异性。方法以质粒pAAV-CD151为模板,采用克隆技术,构建一个含缺氧反应元件(hypoxia response element,HRE)和CD151基因序列的腺相关病毒载体,通过HRE促进CD151在大鼠缺血心肌的表达。结果经过测序鉴定成功构建了含缺氧反应元件的质粒pAAV-HRE-CD151。结论成功构建了pAAV-HRE-CD151质粒,为CD151治疗缺血性心血管病的靶向研究奠定了基础。

rAAV-CD151-AAA^194-196表达对大鼠缺血后肢血管新生的影响

目的观察CD151及其突变体在大鼠后肢缺血模型中的表达以及对血管新生的影响,进一步研究CD151促血管新生的分子机制。方法将实验大鼠随机分组,分别给予生理盐水,rAAV-GFP,rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196(整合素α3/α6结合缺陷突变体),分点注射至大鼠左后肢肌肉组织内,基因转染1周后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型,假手术组不切除股动脉。建模5周后测定后肢皮肤温度,检测缺血肌肉组织毛细血管密度,Westernblot检测各组大鼠缺血肢体局部CD151的表达。结果术后5周,rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196组的CD151蛋白及AAA194-196突变体蛋白表达水平明显高于其余各组(均P<0.05),rAAV-CD151和rAAV-CD151-AAA194-196两组间蛋白水平无明显差别,但rAAV-CD151-AAA194-196组大鼠缺血后肢平均皮肤温度和毛细血管密度明显低于rAAV-CD151组(均P<0.05)。结论研究证实CD151促血管新生是通过生成CD151-整合素α3/α6复合体而实现的,CD151-整合素α3/α6复合体的形成是CD151促血管新生的始动机制。

CD151对人舌鳞癌细胞Tca8113迁移作用的影响

背景与目的:CD151在肿瘤组织中的高表达与肿瘤的转移和预后密切相关,但其具体机制尚不清楚。本研究旨在探讨携带全长正义和反义CD151基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-antiCD151)对人舌鳞癌细胞Tca8113细胞迁移的影响。方法:利用含酶切位点的PCR引物克隆CD151基因,分别呈正向和反向插入包装质粒pAAV,并包装成rAAV-CD151,rAAV-antiCD151,斑点杂交测定病毒滴度;rAAV-CD151与rAAV-antiCD151分别转染Tca8113细胞2周后,Westernblot检测CD151表达,通过Boyden趋化小室研究其对Tca8113细胞迁移的影响。结果:斑点杂交结果显示rAAV-CD151和rAAV-antiCD151病毒滴度分别为2.0×1011pfu/ml,1.0×1011pfu/ml;转染rAAV-CD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组增加了108%,细胞迁移数(93.6±11.6)显著高于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(53.0±6.6和46.0±7.0,P<0.05);转染rAAV-antiCD151后,Tca8113细胞CD151的表达较未转染组减少了79%,细胞迁移数(24.0±4.4)显著低于未转染组和转染rAAV-GFP对照组(P<0.05)。结论:CD151在肿瘤细胞的迁移中起重要的作用,是肿瘤转移的重要分子基础。携带反义CD151基因的重组腺相关病毒作为一种新的治疗工具,可以特异性阻断肿瘤细胞CD151表达,抑制肿瘤细胞的迁移。

CD151和c-Met在大肠癌中的表达及临床意义

目的探讨CD151和c-Met在大肠腺癌组织中的表达及其与临床各个病理因素之间的关系。方法应用双重免疫荧光标记法对正常大肠黏膜和大肠腺癌组织各120例进行CD151和c-Met检测,及进行Kaplan-Meier生存分析。采用Spearman等级相关分析CD151和c-Met之间的相关性。结果 CD151大肠正常黏膜和腺癌组织的阳性率分别为21.7%(26/120)、72%(86/120),两者比较具有统计学意义(P<0.001)。c-Met大肠正常黏膜和腺癌组织的阳性率分别为17.5%(21/120)、60%(72/120),腺癌组织与正常黏膜比较具有统计学意义(P<0.001)。在大肠腺癌中,CD151和c-Met的表达与患者年龄、性别和肿瘤的部位、大小无相关性,与肿瘤的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及Duke分期有关(P<0.05)。CD151和c-Met在大肠正常黏膜和腺癌组织中的表达经双变量相关分析,Spearman系数r=0.970,表达呈正相关(P<0.001)。CD151+、α3β1+、CD151+α3β1+与大肠癌患者5年生存期密切相关,是影响大肠癌预后的因素(P<0.01、P<0.05、P<0.0001)。结论 CD151和c-Met在大肠癌的表达密切相关。CD151与c-Met联合表达是大肠癌临床预后判断的可靠指标。

甲状腺乳头状癌CD151和CK19mRNA表达及意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中CD151和CK19mRNA表达及其意义。方法采用RT-PCR方法检测54例甲状腺的良恶性病变组织中CD151和CK19mRNA的表达,并与临床及病理资料进行分析比较。结果CD151和CK19mRNA在甲状腺乳头状癌组中的表达与滤泡性腺瘤组、结节性甲状腺肿组以及正常甲状腺组比较均差异具有显著性(P<0.01);CK19 mRNA表达与甲状腺癌淋巴结转移有关(P<0.05);在甲状腺乳头状癌中,CD151和CK19基因 mRNA的表达呈正相关(P<0.01)。结论CD151和CK19基因共同参与甲状腺癌的发生、发展,并对淋巴结转移的判断有意义。

胃癌组织中Livin及CD151的表达及意义

目的:探讨胃癌组织中凋亡抑制基因Livin及CD151的表达与临床病理因素的关系。方法:收集胃癌组织、胃溃疡、胃炎组织共90例标本,每组均行病理诊断,RT-PCR检测胃癌组织中livin及CD151基因的表达。结果:胃癌组织中livin表达阳性率为54%,而在胃溃疡及胃炎组织未检出阳性结果;CD151基因在3组中都有表达,胃癌组织中表达显著高于胃溃疡及胃炎组(P<0.01)。Livin及CD151基因在组织分化差或淋巴结转移的样本中表达量较高,差异有显著性(P<0.01)。结论:livin及CD151是与胃癌变相关的重要基因之一。livin及CD151基因与胃癌的组织分化及淋巴结转移显著相关,可作为胃癌的分子标志物,是胃癌诊断和治疗新的潜在分子靶点,可为评估肿瘤的恶性进展、转移潜能、判断患者预后提供依据。

CD151和整合素α3β1在乳腺癌中的表达及其意义

目的探讨CD151和整合素α3β1蛋白在乳腺癌发生发展和浸润转移中的作用。方法构建包含40例正常乳腺和130例乳腺癌组织的组织芯片,免疫组织化学SP法检测CD151和整合素α3β1的蛋白表达,对临床病理资料进行比较,并分析两者的相关性。结果 CD151和整合素α3β1在正常乳腺组织中的阳性表达率分别为0(0/39)和7.7%(3/39);在原位癌组织中的阳性表达率分别为33.3%(10/30)和30.0%(9/30),在浸润性乳腺癌组织中的阳性表达率分别为59.0%(59/100)和70.0%(70/100),两种蛋白的阳性表达率在三组间比较差异有统计学意义(χ2=41.28和χ2=48.62)。二者的表达与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小和组织学类型无相关性(P>0.05);但与淋巴结转移,肿瘤分化程度和临床分期密切相关(P<0.05),此外,CD151与ER、PR的表达有关(P<0.05)。CD151和α3β1蛋白在乳腺癌组织中的表达呈正相关(r=0.565;P<0.01)。结论 CD151和整合素α3β1在乳腺癌组织中存在异常高表达,并与乳腺癌发生发展、浸润转移密切相关。联合检测可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。

猪CD151重组抗原表达及其免疫血清的PRRSV感染抑制作用

用RT-PCR从猪巨噬细胞中扩增CD151胞外区编码序列,将其插入含细胞毒性T细胞相关抗原4胞外区序列的表达载体,重组载体转化大肠杆菌,SDS-PAGE检测重组蛋白表达;用包涵体纯化和尿素变性与复性法获得可溶性蛋白,纯化蛋白免疫小鼠,ELISA测定免疫血清抗体效价,Western-blot验证免疫血清特异性;以处理细胞或处理病毒方式,用免疫血清进行猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染抑制试验。结果表明:重组菌表达预期的32ku重组蛋白,获得的可溶性重组蛋白纯度较高;免疫血清抗体效价达1∶170 000,在猪巨噬细胞中能检测到预期的29ku蛋白,能抑制PRRSV感染MARC-145细胞,但有毒株差异性,处理病毒的感染抑制作用较强。结果提示猪CD151免疫血清能以结合细胞和结合病毒方式抑制PRRSV感染。

CD151及整合素α3 β1与甲状腺乳头状癌发生的关系及临床意义

目的:探讨CD 151和整合素α3、β1在甲状腺乳头状癌中的表达及临床意义方法:收集甲状腺乳头状癌标本64例、滤泡性腺瘤12例及瘤旁2cm以远正常甲状腺组织10例,采用免疫组织化学Envision^(TM)二步法检测CD 151及整合素α3、β1,并分析它们的相关性。结果:甲状腺乳头状癌、滤泡性腺瘤及正常甲状腺组织中CD151表达的阳性率分别为87.5% (56/64)、41.7%(5/12)及0(0/10),癌的表达显著高于其余两组,腺瘤的表达亦高于正常组织,三者间的比较均有统计学差异(P<0.01 );整合素α3表达的阳性率分别为78.1%(50/64)、33.3%(4/12)及0(0/10),癌的表达明显高于其余两组(P<0.01 );整合素β1表达的阳性率分别为71.9%(46/64)、25%(3/12)及()(0/10),甲状腺乳头状癌组亦显著高于其余两组、差异有统计学意义(P<0.01)它们的表达均与甲状腺乳头状癌患者的年龄、性别、肿瘤大小及淋巴结转移无相关性(P>0.05);CD151与整合素α3、β1蛋白在甲状腺乳头状癌、滤泡性腺瘤及正常甲状腺组织中的表达经双变量相关分析呈正相关结论:CD151和整合素α3、β1的高表达与甲状腺乳头状癌的发生相关,三者在甲状腺乳头状癌、滤泡性腺瘤及正常甲状腺组织中的表达成正相关。

AAV介导的CD151基因促大鼠缺血后肢血管再生和血运重建的实验研究

目的研究肌肉转染腺相关病毒(AAV)介导的CD151基因在大鼠后肢缺血模型中促血管再生和血运重建的作用。方法分别包装携带有CD151基因和GFP基因的重组腺相关病毒(rAAV-CD151,rAAV-GFP)。将12只Wistar大鼠随机分为实验组和对照组,每组各6只。实验组大鼠左下肢肌肉注射局部转染rAAV-CD151,对照组注射rAAV-GFP(1×1010pfu/只)。基因转染2周后行股动脉切除术建立大鼠后肢缺血模型。通过后肢皮肤温度测定、后肢血管造影和缺血肌肉组织毛细血管密度检测,观察缺血肢体血管再生和评价血运重建情况。Western blot检测两组大鼠缺血肢体局部CD151的表达。结果股动脉切除术4周(基因转染6周)后,实验组大鼠缺血后肢平均皮肤温度为(32.92±0.63)℃,对照组为(31.22±0.87)℃;后肢血管造影结果显示实验组缺血侧血管评分平均为(2.56±0.37),对照组平均为(1.57±0.39);实验组缺血后肢肌肉组织毛细血管密度为(609.00±83.89)/mm2,对照组为(517.00±70.65)/mm2;两组比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。Western blot检测结果显示实验组大鼠缺血侧肌肉组织CD151表达为对照组的2.96倍。结论局部高表达CD151基因能够提高缺血组织的血管再生能力,促进缺血器官的血运重建和功能恢复。CD151将为缺血性疾病的血管再生治疗提供新的靶点。

CD151通过上皮间质转化及干性相关通路调控非小细胞肺癌脑转移的机制研究

目的探讨四跨膜蛋白CD151在肺癌脑转移中的预测作用及相关分子通路机制。方法收集2010年12月至2015年6月本中心160例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者临床资料,其中脑转移患者88例,无脑转移患者72例,采用免疫组织化学方法检测CD151在肺癌组织的表达,并运用Spearman分析CD151表达与脑转移相关性。再选择人NSCLC细胞株HCC827,应用siRNA干扰、Western blot、划痕和Transwell实验检测敲低CD151表达对细胞增殖、迁移状况以及上皮间质转化(EMT)、干性通路相关蛋白表达的影响。结果相对于无脑转移患者,NSCLC脑转移患者肺癌组织CD151表达显著增加(P=0.012),Spearman分析表明CD151高表达与脑转移呈正相关(r=0.478,P=0.004)。通过siRNA敲低CD151可上调Ecadherin表达,并下调Vimentin、SOX2、CD44和CD133表达,同时降低HCC827细胞增殖(P=0.026)与迁移能力(P=0.032)。结论 CD151可能通过调控EMT、干性通路相关蛋白表达影响NSCLC细胞的增殖、迁移,CD151可能是NSCLC脑转移的潜在预测因子。

CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖反应的影响

目的:探讨CD151对人宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:利用脂质体分别将pcDNA3.1-CD151、pcD-NA3.1-antiCD151和pcDNA3.1-GFP重组质粒转染Hela细胞。Westernblot分析细胞CD151及核增殖抗原(PCNA)的表达;MTT法检测细胞增殖反应;流式细胞仪分析细胞周期变化。结果:转染pcDNA3.1-CD151与未转染组及转染pcDNA3.1-GFP对照组比较,Hela细胞CD151表达显著上调(P<0.01);细胞增殖反应显著提高(P<0.01);增殖期S+G2/M细胞比例增高(P<0.05);PCNA表达亦明显增强(P<0.01)。而转染pcDNA3.1-antiCD151后,Hela细胞CD151表达明显下调(P<0.01);细胞增殖反应及PCNA表达明显下降(P<0.01);S+G2/M细胞比例降低(P<0.05)。结论:CD151的表达对肿瘤细胞的增殖反应起重要作用,通过反义CD151基因干预,可下调细胞中CD151的表达,抑制肿瘤细胞增殖。

CD151及整合素α3β1在胃癌中的表达及意义

目的研究胃癌组织中CD151及整合素α3β1的表达,探讨它们在胃癌发生、发展及转移中的作用。方法采用免疫组化SP法检测23例正常胃组织、46例胃癌原发灶及21例淋巴结转移灶中CD151及整合素α3β1的表达,分析比较不同分化程度、原发灶与转移灶分组中表达差异。结果胃癌原发灶中CD151及整合素α3β1表达阳性率分别为65.2%和52.2%,均高于正常胃组织(P<0.05);在淋巴结转移灶中的阳性率为81.0%和71.4%;CD151与整合素α3β1在胃癌原发灶及淋巴结转移灶中表达强度呈正相关关系。结论 CD151和整合素α3β1在胃癌组织中存在异常高表达,检测CD151及整合素α3β1的表达可能为胃癌的诊断、预后判断及治疗提供参考依据。

突变型pAAV-CD151真核表达载体的构建与鉴定

目的构建CD151两种突变体,为研究CD151的功能及CD151-整合素复合体的功能奠定基础。方法以pAAV-CD151质粒为模板,采用定点突变技术,构建整合素α3β1/α6β1结合缺陷QRD突变体(pAAV-CD151-QRD-AAA194-196突变体)和CD151囊泡运输基序缺陷的ARSA突变体(pAAV-CD151-YRSL-ARSA245-248突变体),并包装两种突变体的重组腺相关病毒。结果经过测序鉴定成功构建了CD151的QRD和ARSA突变体,亦成功包装了重组腺相关病毒,病毒滴度符合本实验要求。结论成功构建CD151两种突变体并包装成重组腺相关病毒,为进一步研究CD151的功能和作用机制奠定了基础。

结直肠癌组织中CD151表达及其临床意义

目的探讨结直肠癌组织中CD151的表达及其与结直肠癌发生、发展和转移的关系。方法采用实时荧光定量PCR技术检测22例肠癌组织及癌旁组织中CD151mRNA的表达,采用免疫组化SP法检测此22例及另67例石蜡包埋肠癌组织及癌旁组织中CD151蛋白的表达,并分析其与肠癌临床病理因素之间的关系。结果CD151mRNA和蛋白在结直肠癌中的表达明显高于癌旁组织,其蛋白的表达与结直肠癌浸润深度、淋巴结转移和TNM分期密切相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论CD151可望成为与结直肠癌浸润、转移有关并提示预后不良的指标。

CD151促进Rac/cdc42信号通路激活并维持体外血管生成的稳定性

目的探讨CD151及其QRD突变体对Rac/cdc42信号通路和体外血管生成的稳定性影响及机制。方法脂质体介导质粒(pAAV-CD151、pAAV-CD151-QRD、pAAV-anti-CD151)转染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),将HUVECs细胞分为对照组、CD151组、CD151-QRD组,anti-CD151 4组,分别取各个不同时间点评价Matrigel上的各组管腔血管形成能力及新生血管的稳定性。Western blot法检测各组CD151蛋白表达,以及Rac和cdc 42信号通路蛋白表达。结果 CD151组内皮细胞CD151表达(1.86±0.15)明显高于对照组(0.90±0.06),差异有统计学意义(P<0.01);CD151-QRD组(1.75±0.16)与CD151组相比CD151蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05),但anti-CD151组蛋白表达(0.51±0.06)明显下降。在12hMatrigel上CD151及其他各组之间血管生成比较差异无统计学意义(P>0.05)。36h时,各组血管生成有区别。72h,CD151组Matrigel上血管生成明显高于其他各组,其他各组生成的血管不能维持。CD151高表达促进cdc 42,Rac蛋白表达增加,CD151-QRD组、anti-CD151组蛋白表达则较CD151组下降。结论 CD151促进Rac和cdc 42信号通路激活,促进体外血管生成并可维持生成血管的稳定性。