CD4+CD154+T细胞亚群在中老年侵袭性真菌感染患者诊断中的应用价值

探讨CD4+CD154+T细胞亚群在中老年侵袭性真菌感染患者诊断中的应用价值。方法 选择2020年1月至2022年1月在秦皇岛市第一医院就诊的中老年侵袭性真菌感染患者50例作为研究对象,同时随机选取该时间段内健康体检结果正常的50例中老年人作为本次研究的对照组,对两组研究对象进行流式细胞术检测,检测外周血中CD4+CD154+T细胞亚群比例,并进行比较分析。结果 中老年侵袭性真菌感染患者CD4+CD154+T细胞亚群比例结果显示有统计学意义(P<0.05)。通过ROC曲线下的面积计算,显示出其诊断效能较高,面积为0.89。此外,CD4+CD154+T细胞亚群比例与中老年侵袭性真菌感染的严重程度呈负相关。这意味着CD4+CD154+T细胞亚群比例越低,患者的感染程度越严重。结论 CD4+CD154+T细胞亚群比例可以作为中老年侵袭性真菌感染的辅助诊断指标,可提高诊断准确性和敏感性。在临床实践中,可以根据CD4+CD154+T细胞亚群比例进行感染的监测和疗效的评估。

CD154胞外区基因局部修饰对大鼠移植肾存活的影响

目的 观察CD15 4胞外区基因局部修饰大鼠供肾对延长移植肾存活的效能。方法 以CD15 4基因重组腺病毒为载体 ,将CD15 4胞外区基因转入BN大鼠供肾 ,以Lewis大鼠为受体 ,行同种肾移植为转染组 ,并以未转染BN供肾移植给Lewis受体为对照组 ;观察移植肾存活时间和术后肾功能变化。结果 转染组移植肾存活 ( 2 8± 7.3 )d ,较对照组移植肾存活时间 ( 8.6± 1.2 )d明显延长 ;移植组术后血清肌酐较同期对照组明显为低。结论 CD15

阻断B7/CD28及CD40/CD154共刺激信号对致敏小鼠免疫功能的影响

本研究旨在通过阻断致敏小鼠的B7/CD28及CD40/CD154共刺激信号途径,探讨其免疫功能的变化,为应用于异基因骨髓移植的免疫耐受提供实验依据。将致敏的BALB/c小鼠分成4组:①CTLA4Ig+anti-CD154鼠源性同型对照抗体;②anti-CD154单克隆抗体+CTLA4Ig鼠源性同型对照抗体;③CTLA4Ig+anti-CD154单克隆抗体;④CTLA4Ig及anti-CD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体。正常BALB/c小鼠应用CTLA4Ig及antiCD154单克隆抗体的鼠源性同型对照抗体。给予每只小鼠CTLA4 Ig和anti-CD154单克隆抗体或相对应的同型对照抗体各500μg,于移植前7天尾静脉输注,每组小鼠各5只。移植当天处死各组小鼠,应用流式细胞仪检测脾细胞中CD19+CD69+B细胞数量、CD44high/CD62Lhigh及CD44high/CD62Llow/-T细胞数量。用流式细胞仪或ELISA法检测血清中抗体及细胞因子的变化。结果表明:小鼠致敏后CD19+CD69+B细胞数量与正常小鼠相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.01),阻断B7/CD28或/和CD40/CD154共刺激信号通路后可见抑制效应(P<0.01),两者同时阻断具有协同作用(P<0.01)。小鼠致敏后记忆性T细胞CD44high/CD62Lhigh及效应性T细胞CD44high/CD62Llow/-与正常相比亦明显增多(P<0.01)。阻断共刺激信号通路后可使其明显抑制,CTLA4 Ig和anti-CD154单克隆抗体联合应用具有协同效应(P<0.01)。各组小鼠细胞因子及IgG、IgM抗体均无明显差异(P>0.05),但血清中致敏抗体检测显示致敏后特异性抗体升高,阻断共刺激信号通路后其明显被抑制(P<0.01)。结论:阻断B7/CD28或CD40/CD154共刺激信号途径均能抑制致敏小鼠的细胞免疫功能及体液免疫功能;同时阻断有协同作用。

抗人CD154单克隆抗体抑制免疫应答的实验研究

目的 :探讨抗人CD1 54单克隆抗体对免疫应答的抑制作用。方法 :①在体外进行混合淋巴细胞反应 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体对淋巴细胞增殖反应的影响 ;②在严重免疫联合缺陷 (SCID)鼠体内重建人的免疫功能后 ,研究抗人CD1 54单克隆抗体在SCID小鼠体内对T细胞增殖的影响和对B细胞功能的影响。结果 :①双向混合淋巴细胞反应结果显示 ,抗体的 5个剂量组的 [3H] -TdR的掺入率均显著低于对照组 (均P <0 .0 1 ) ;②在输注人外周血单个核细胞第 6d、第 1 2d、第 2 1d ,实验组SCID鼠体内人T细胞占SCID鼠淋巴细胞的百分率均明显低于对照组(均P <0 .0 5) ;在输注人外周血单个核细胞后的第 1 2d、第 2 1d、第 31d ,实验组SCID鼠体内人IgG的含量明显低于对照组 (均P <0 .0 5)。结论 :抗人CD1 54单克隆抗体能够在体外抑制淋巴细胞的增殖 。

BAY11-7082及Lactacystein在CD154诱导转录因子NF-κB活化中的作用

目的对IκB-α磷酸化抑制剂BAY11-7082及蛋白酶小体抑制剂Lactacystein在CD154诱导转录因子NF-κB活化中的作用机制进行研究。方法应用重组CD154刺激EBV/LMP1阴性RamosB细胞,并分别加入BAY11-7082及Lactacystein,比较其对CD154诱导NF-κBluciferase活化、IκB-α磷酸化和降解、p65磷酸化以及NF-κB亚单位进入细胞核等各环节的抑制作用。结果Ramos细胞中BAY11-7082及Lactacystein均可完全抑制CD154诱导NF-κBluciferase活化。BAY11-7082对CD154诱导p65磷酸化、IκB-α磷酸化和降解及p50、p65和c-Rel进入细胞核均有抑制作用,而Lactacystein只抑制IκB-α降解及p65进入细胞核。结论Ramos细胞中BAY11-7082及Lactacystein抑制CD154诱导NF-κB活化的作用机制不同。

人CD154-GST融合蛋白基因在大肠杆菌中的表达

目的 :为制备重组人CD15 4-谷胱甘肽巯基转移酶 (GST)融合蛋白 (hCD15 4-GST) ,用于人CD15 4单克隆抗体研制。方法 :根据人CD15 4基因序列设计合成特异性引物 ,RT -PCR扩增人CD15 4基因 ,并插入融合蛋白原核表达载体pGEX - 4T - 1中 ,得到重组表达质粒pGEX - 4T - 1/CD15 4;用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1细胞 ,转化菌落经BamHⅠ、EcoRⅠ酶切鉴定。IPTG诱导大肠杆菌表达人CD15 4蛋白 ,SDS -PAGE电泳鉴定表达产物。结果 :从人外周血淋巴细胞扩增出 82 0bp的hCD15 4cDNA ;将其克隆至pGEX - 4T - 1质粒中 ,经双酶切鉴定及DNA序列分析证实含有目的基因 ;IPTG诱导后的大肠杆菌经SDS -PAGE电泳鉴定出现明显的 5 5kD蛋白带。结论 :成功构建了人CD15 4-GST原核表达质粒 ,并在大肠杆菌中表达出人CD15 4-GST融合蛋白 ,为人CD15

泌乳素对系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞表面CD40/CD154表达的影响

目的研究泌乳素(PRL)对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞表面CD40、CD154表达的影响,从而探讨其在系统性红斑狼疮发病机制中的作用。方法检测30例系统性红斑狼疮患者和20例正常健康人血清PRL水平,分离外周血单个核细胞(PBMC),采用流式细胞仪检测CD40、CD154的表达水平。结果①高PRL的SLE患者组CD154的表达水平明显高于正常PRL的SLE患者组和正常对照组(P<0.05);②正常PRL的SLE患者组PBMC经重组泌乳素(rhPRL)刺激后CD154的表达水平较刺激前明显增加(P<0.05),而正常对照组PBMC经rhPRL刺激后CD154表达增加不明显(P>0.05);③高PRL的SLE患者组、正常PRL的SLE患者组(加rhPRL)加入溴隐亭(Brc)前后,CD154表达水平无明显差异(P>0.05)。④SLE患者组PBMC表面CD40表达水平与正常对照组差异无显著性(P>0.05)。结论PRL可通过上调PBMC表面CD154的表达,在SLE的发病中起重要作用;Brc对内源性、外源性PRL均无明显抑制作用。

泛发性白癜风患者外周血体外活化后T细胞表达CD154水平的研究

目的:比较泛发性白癜风患者和正常人外周血T细胞体外活化后表达的CD154水平。方法:活化前及体外活化6h后,分别对泛发性白癜风患者及对照组外周血标记CD3,裂解红细胞,获取外周血有核细胞后标记CD154,流式细胞仪检测并比较两组CD3^+T细胞CD154表达水平。结果:体外活化6h后,泛发性白癜风患者外周血CD3^+T细胞CD154表达水平明显高于对照组(P<0.05)。结论:外周血T细胞过度表达的CD154可能通过诱导自身抗体产生及增加炎性细胞因子等途径参与白癜风的发病机制。

结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)对CD4^+ CD154^+ T细胞的影响

目的通过研究结核分枝杆菌纯蛋白衍生物(PPD)对CD4+ CD154+ T细胞亚群的影响,探讨结核分枝杆菌分泌蛋白的致病性。方法 PPD或/和BCG刺激PBMCs后,用流式细胞术检测活动性肺结核的CD4+ CD154+ T细胞和CD4+IFN-γ+T细胞的比例变化。结果①PPD刺激显著下调CD4+ CD154+ T细胞比例,能够抑制BCG刺激产生的CD4+ CD154+ T细胞的增殖;②PPD刺激CD4+ IFN-γ+ T细胞的效果显著低于BCG。结论 PPD内存在能显著抑制机体保护性免疫的分泌蛋白,可能是结核杆菌进入人体后抑制机体免疫力的重要因素之一。

系统性红斑狼疮患者高表达的CD154促进自身抗体分泌

【目的】探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)CD154表达水平、及CD40/CD154对SLE患者分泌自身抗体的影响和地塞米松(Dex)对此的作用。【方法】选择SLE活动期患者(10例)和正常对照者(11例),分离PBMC,检测其CD154的表达水平;培养PBMC,应用CD40 mAb和Dex进行干预,使用ELISA法检测培养液上清抗dsDNA水平。【结果】①活动期组PBMC CD154表达水平明显高于对照组6.4%±2.1%vs 1.5%±1.2%,(P<0.05);②活动期组培养液上清抗dsDNA抗体水平明显高于对照组[(11.8±6.8)U/mL vs(5.6±2.3)U/mL(RPMI 1640),(11.4±7.0)U/mL vs(6.3±2.1)U/mL(IgG),P均<0.05];③CD40 mAb使两组培养液上清抗dsDNA抗体水平明显增高[活动期组:(18.6±7.7)U/mL vs(11.8±6.9)U/mL,对照组:(8.3±4.4)U/mL sv(5.6±2.3)U/mL,P均<0.05]。④在活动期组,Dex明显抑制CD40 mAb引起的PBMC培养液上清抗dsDNA抗体水平的增高[(8.8±5.2)U/mL vs(18.6±7.7)U/mL,P<0.05],使其低于非特异性处理时水平[(8.8±5.2)U/mL vs(11.8±6.8)U/mL,P<0.05];Dex不影响对照组。【结论】活动期SLE患者PBMC表达的CD154水平升高,此能够促进抗dsDNA抗体的分泌,而Dex能够抑制其作用。

CD154(CD40L)的表达与初始和记忆CD4^+ T细胞相关性的探讨

目的:探讨CD154+细胞的表型特征与初始和记忆CD4+ T细胞以及与细胞因子表达之间的关系。方法:正常人外周血单个核细胞(PBMC),经抗CD3+抗CD28单克隆抗体(mAb)刺激培养后,利用多种抗细胞表面分子和抗细胞因子以及抗CD154抗体进行标记,用流式细胞术检测。结果:体外刺激PBMC6h后,CD154表达于CD4+ T细胞,而不表达于CD8+T细胞。对比分析CD4+CD154+ T和CD4+CD154- T细胞上CD45RA(初始)和CD45RO(记忆)表面分子的结果表明,大多数CD4+CD154+ T细胞为记忆细胞。当利用抗CD3或抗CD3+抗CD28mAb刺激后,分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α的CD4+ T细胞均为CD4+CD154+ T细胞,而且单个细胞可以同时分泌两种以上细胞因子。进一步研究表明,CD4+CD154+ T细胞低表达或不表达CD25,不表达CD62L,50%左右的细胞表达CCR7。结论:体外短时间刺激PBMC,经过对细胞表型和细胞因子表达的研究,表明CD154分子结合其他表面标记或细胞因子的表达可以用于鉴别初始和记忆CD4+ T细胞。

CD40-CD154共刺激信号及其在角膜移植排斥中的研究进展

角膜移植手术失败的主要原因是T细胞介导的免疫排斥反应,T细胞的充分活化需要共刺激信号的协同作用。研究表明CD40-CD154信号在角膜移植排斥中具有重要意义,阻断该信号可延长移植物的存活。本文就其分子特性、免疫学功能进行了综述,重点探讨了阻断该信号抑制角膜移植排斥反应的效应和机制。

CD40/CD154与动脉粥样硬化及他汀类药物干预的研究进展

CD40/CD154作为一种重要的细胞间信息转导系统,通过诱导细胞活化和细胞因子的产生,调节细胞、体液免疫并参与介导细胞内信号转导通路,在动脉粥样硬化、免疫缺陷病、炎症等疾病的发生、发展中起到重要作用。而阻断CD40/CDl54信号系统的相互作用可以抑制动脉粥样硬化的发生与发展。

郎格罕细胞组织细胞增生症患者可溶性CD154与可溶性NFKL激活受体及骨保护素水平临床意义的研究

目的探讨血清中可溶性CD154(sCD154)、可溶性NF-KL激活受体(sRANKL)、骨保护素(OPG)水平与郎格罕细胞组织细胞增生症(LCH)发病机制关系。方法应用ELISA方法分别检测12例LCH患者(包括5例单系统多部位患者和7例多系统多部位患者)初诊及在治疗6周后血清sCD154、sRANKL和OPG水平,并对研究结果进行统计学分析。结果12例LCH患儿组与对照组比较,sCD154、sRANKL和OPG显著增高,而sRANKL/OPG比率明显降低。MM型组与SM型组相比较,血清sCD154、sRANKL、OPG水平以及sRANKL/OPG比率均无明显变化,但是OPG水平以及sRANKL/OPG比率与骨损害的数目相关。治疗前后比较,sCD154、sRANKL、OPG水平在治疗后有明显下降。结论血清sCD154、sRANKL、OPG可能与LCH的发病有关,而血清sRANKL/OPG比率是LCH患者发生溶骨性损害的标志。

B细胞血液肿瘤患者外周血CD40、CD154的表达及意义

目的分析B细胞血液肿瘤外周血淋巴细胞CD40、CD154表达率的特点。方法 28例B细胞血液肿瘤患者分为多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)17例,B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)11例;选取30例健康体检人员作为对照组。应用流式细胞术检测B细胞血液肿瘤患者外周血淋巴细胞(Peripheral Blood Lymphocytes,PBL)CD40、CD154的表达率。结果1MM组:CD40表达率为(17.50±8.32)%,CD154表达率为(1.00±3.26)%;B-NHL组:CD40表达率为(29.84±15.61)%,CD154表达率为(2.01±0.59)%;对照组:CD40表达率为(6.48±3.34)%,CD154表达率为(3.25±1.04)%。2化疗后B-NHL患者外周血淋巴细胞CD40表达低于化疗前,P<0.05。3MM患者III期组PBLCD40表达率高于I^II期组,P<0.05。B-NHL患者PBL CD154表达率III^IV期低于I^II期组,P<0.05。结论 1MM患者、B-NHL患者均存在PBL CD40高表达,B-NHL患者同时存在PBL CD154低表达;CD40高表达提示MM预后差,CD154低表达与B-NHL预后有关。2化疗降低了B-NHL患者PBL CD40表达率。为临床上进行B细胞血液肿瘤诊断与治疗提供一定的依据。

系统性红斑狼疮患者CD154的表达与炎症、心肌损伤指标的关系研究

目的测定系统性红斑狼疮(SLE)合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,并与C反应蛋白(CRP)、心肌损伤指标之间进行相关分析,探讨CD154与患者炎症状态、心肌损伤的关系。方法①32例2010年4～10月在我院门诊或住院治疗的SLE患者,男2例,女30例。②给予心脏彩超测定左房前后径(LAD)、室间隔厚度(IVST)、左心室前后径(LVDd)、左心室重量指数(LVMI)、左心室射血分数(LVEF),心电图检查,免疫比浊法测定C反应蛋白(CRP)、全自动生化分析仪化学发光免疫分析法测定CK-MB、肌钙蛋白(cTnI),分离外周血单个核细胞,采用流式细胞仪分析检测CD154的表达水平。③根据心脏彩超、心电图检查、CK-MBⅡ、肌钙蛋白结果,将有心肌损伤指标阳性的患者分为A组(20例),心肌损伤指标阴性的患者分为B组(12例);20例健康志愿者为正常对照。④资料采用卡方检验,以Spearman相关法,即多元线性回归分析1个因变量和多个自变量之间的线性关系,P<0.05为差异有统计学意义。结果①A组外周血单个核细胞CD154的表达水平为(29.1±10.8)%、CRP为(68.4±12.2)mg/L均明显高于B组(11.9±8.2)%、(36.9±11.5)mg/L,P<0.01;正常对照组外周血单个核细胞CD154的表达(5.9±2.2)%显著低于A、B组,P<0.01。②A组CK-MBⅡ为(9.7±3.6n)ng/ml、cTnI为(0.43±0.21)ng/ml、IVST为(11.8±3.2)mm、LVMI为(110.51±18.64)g/m2显著高于B组CK-MBⅡ为(2.3±0.8)ng/ml、cTnI为(0.22±0.09)ng/ml、IVST(9.6±1.1)mm、LVMI(90.78±9.53)g/m2(P<0.01);A组LVDd(50.3±6.6)mm、LAD(32.4±5.4)mm、亦高于B组LVDd(46.4±3.1)mm、LAD(28.2±4.6)mm(P<0.05);A组LVEF(56.2±14.8)%显著低于B组LVEF(64.7±10.3)%(P<0.01)。③患者外周血单个核细胞CD154的表达水平与CRP、CK-MBⅡ、cTnI、LVDd、LVIMI、IVST、LAD呈正相关[γ=0.343,γ=0.315,γ=0.437,γ=0.364,γ=0.448(均P<0.01);γ=0.266,γ=0.216(均P<0.05)];与LVEF呈负相关(γ=-0.346,P<0.01)。结论 SLE合并心肌损伤患者外周血单个核细胞CD154的表达水平,显著高于无心肌损伤患者,并与炎症、心肌损伤明显相关,提示CD154在SLE患者的心血管事件的发生发展中可能起到重要作用,可能会成为SLE患者心血管事件的重要预测指标,进一步研究可能会为SLE心肌损伤带来新的治疗方法。

重组Ag43-CD154嵌合蛋白诱导抗肝纤维化免疫反应

目的:了解基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43重组嵌合蛋白是否能够诱导产生抗自身抗CD154抗体的免疫反应。方法:将CD154-Ag43重组蛋白作为模式疫苗免疫刀豆素蛋白诱导肝纤维化模型小鼠,用免疫印迹和酶联免疫斑点试验了解是否能够诱导产生抗CD154抗体,用HE染色观察肝脏纤维化状态,用Masson trichrome和硝酸银染色观察肝脏组织胶原蛋白和网状纤维。结果:免疫印迹发现CD154-Ag43免疫的小鼠可以有效产生抗自身CD154抗体,酶联免疫斑点试验发现脾脏中有特异分泌抗CD154抗体的B淋巴细胞。肝脏组织HE染色发现CD154-Ag43免疫的肝纤维化模型小鼠肝脏纤维化明显轻于对照组,并且肝脏胶原蛋白和网状纤维也明显少于对照组。结论:基因工程技术构建制备获得的CD154-Ag43嵌合蛋白有可能是一种防治肝纤维化的有效模式疫苗。

阻断CD154-CD40信号途径对血小板诱导内皮细胞表达基质金属蛋白酶-1的影响

目的 :探讨活化血小板及T淋巴细胞经CD15 4分子诱导内皮细胞表达基质金属蛋白酶 - 1(MMP - 1)的功能差异 ;并分析阻断CD15 4 -CD4 0信号途径对血小板诱导内皮细胞表达MMP - 1的影响。方法 :体外分离健康人血小板及淋巴细胞 ,凝血酶 (1U/ml )诱导血小板活化 ,植物血凝素 (10mg/L)和佛波脂 (2 0 μg/L)刺激T淋巴细胞增殖并发生活化。以流式细胞术检测血小板及T淋巴细胞CD15 4表达水平 ,然后使其分别与培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)共育。以未经刺激的HUVECs作为阴性对照 ,TNF -α(2 0 0U/ml)刺激的HUVECs作为阳性对照 ,并使用特异性CD15 4及CD4 0阻断单抗 ;逆转录 -聚合酶链式反应测定HUVECs表达MMP - 1mRAN水平 ,底物凝胶电泳酶谱法检测培养基中MMP - 1活性。结果 :以表达同等水平CD15 4的血小板及T淋巴细胞分别作用于HUVECs后 ,均能显著提高MMP - 1mRNA表达 ,同时培养基中MMP - 1活性也明显增强 (P <0 .0 1)。但在诱导血小板或T淋巴细胞活化前加入CD15 4单抗 ,上述效应又都受到明显抑制。同样 ,在活化血小板诱导HUVECs之前 ,如果向培养基中加入CD4 0单抗 ,也能显著降低MMP - 1mRNA表达及其活性 (P <0 .0 1)。结论 :活化血小板及T淋巴细胞表面的CD15 4分子 ,在诱导内皮细胞表达MMP - 1方面具有完全相?

阻断型CD154抗体和CD80抗体生物学作用的研究

为比较阻断型抗人CD154单克隆抗体(1B1)和抗人CD80单克隆抗体(3H8)的单独及联合应用在调节CD4+T细胞对同种抗原的初次和再次免疫应答中的作用。采用免疫磁珠阴性选择法分离获得人外周血CD4+T细胞、将纯化的CD4+T细胞与刺激细胞体外共培养,通过检测培养上清IL-2、IFN-γ水平以及CD4+T细胞的增殖来评价1B1和3H8的生物学作用。结果显示,1B1和3H8单独或联合应用能不同程度地抑制混合淋巴细胞反应中CD4+T细胞对同种抗原刺激的增殖,下调CD4+T细胞分泌IL-2和IFN-γ,并且在再次反应中能有效诱导CD4+T细胞对同种抗原的免疫低反应性。因此,1B1和3H8的单独及联合应用在移植排斥的免疫干预及同种抗原免疫耐受的诱导中具有潜在的应用前景。

人CD154基因真核表达载体的构建及在Eca109细胞中的表达

目的:构建人CD154基因真核表达质粒pcDNA3.1-CD154,初步观察转染该质粒后Eca109细胞的细胞生物学特性。方法:人外周血单个核细胞体外经PHA激活后提取总RNA,用RT-PCR技术扩增人CD154cDNA全长并构建真核表达质粒pcDNA3.1-CD154。用LipofectamineTM2000介导pcDNA3.1-CD154质粒转染食管癌Eca109细胞株,RT-PCR检测转染细胞中CD154mRNA的表达,观察细胞生长特征。结果:用T7/SP6通用引物测序证实重组质粒中插入片段为正向插入的人CD154基因。pcDNA3.1-CD154转染Eca109细胞后细胞异型性明显改善,生长速率减慢。结论:pcDNA3.1-CD154构建成功;转染该质粒的Eca109细胞生物学特性发生改变。