SiRNA沉默NK细胞CD158b表达及对异体树突状细胞的杀伤作用

目的探讨特异性的SiRNA干扰人NK细胞CD158b基因表达对异体树突状细胞杀伤的影响。方法将特异性的CD158b-SiRNA导入人NK细胞后,qRT-PCR及流式检测NK细胞CD158b基因mRNA及其蛋白质的表达。LDH释放法检测RNA干扰NK细胞CD158b前后对异体DC细胞杀伤效果的影响。结果特异性siRNA片段能有效降低CD158b mRNA水平,最大干扰效率达72%;脂质体及阴性对照siRNA片段对NK细胞CD158b的表达无特异的干扰作用;流式细胞仪检测证明转染特异SiRNA-CD158b后CD158b蛋白表达明显下降。RNA干扰NK细胞CD158b的表达后能显著提高其杀伤异体DC的活性。结论特异性的CD158b-SiRNA可有效降低NK细胞中CD158b mRNA水平,明显下调CD158b蛋白表达。RNA干扰NK细胞CD158b后所产生的异源反应性NK细胞对异体DC细胞杀伤效果显著增加,证明通过人工改变NK细胞KIR基因的表达产生KIR-HLA错配的异反应性NK细胞有望应用于异基因骨髓移植中降低GVHD。

人杀伤抑制性受体CD158b cDNA的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的 :CD1 5 8b基因克隆与表达。方法 :采用RT -PCR技术 ,从正常人外周血单个核细胞中扩增编码CD1 5 8b的cDNA ,经酶切后将其克隆于pMBP -c表达质粒上 ,酶切和测序鉴定。构建的高效表达克隆子经IPTG诱导后 ,表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析。结果 :RT -PCR获得了预期大小的cDNA ,DNA测序结果与GenBank登记的人CD1 5 8b编码序列一致。pMBP -c -CD1 5 8b表达质粒酶切后结果与预期相符。表达的重组蛋白经SDS -PAGE电泳分析 ,得到分子量为 5 8kD的蛋白质 ,与理论值一致 ,所获重组蛋白占菌体总蛋白 2 5 %。结论 :获得了CD1 5 8b基因 ,并成功在大肠杆菌中表达 ,所获重组蛋白为进一步研究CD1 5

肾移植术后外周血自然杀伤细胞的CD158b表达及意义

目的探讨肾移植术后外周血自然杀伤细胞(NK细胞)的CD158b表达及意义。方法测定62例患者肾移植前、术后第1d、术后第7d、肾功能正常时以及疑有排斥反应时外周血NK细胞的CD158b表达水平。结果62例中,术后38例肾功能恢复正常,观察期内无排斥反应发生,移植前后外周血CD3-CD16/CD56+细胞(NK细胞)及CD3-CD16/CD56+CD158b+细胞稳定,NK细胞中CD158b+细胞的比例也稳定;24例术后7～14d发生急性排斥反应,其外周血CD3-CD16/CD56+细胞呈上升趋势,CD3-CD16/CD56+CD158b+细胞呈下降趋势,NK细胞中CD158b+细胞的比例也呈下降趋势,经单因素方差分析,各指标在不同测定时点的差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论干扰NK细胞表达CD158b的因素较少,在临床上做出排斥反应诊断前,患者外周血中NK细胞的CD158b表达即呈下降趋势,因此术后监测NK细胞的CD158b表达可为评价患者的免疫状况提供依据。