牛CD18编码全基因特异引物设计与PCR扩增

为了获得牛整合素CDl8亚单位编码全基因序列以进行牛白细胞粘附缺陷病(BLAD)相关研究,采用DNAstar引物设计软件对网上牛CDl8mRNA编码全基因序列及其限制性内切酶酶切位点进行分析,设计一对PCR扩增引物,经PCR扩增条件优化后,获得含有CD18编码全基因序列的2350bpPCR产物。

奶牛白细胞黏附缺陷症焦磷酸测序检测方法的建立及应用

奶牛白细胞黏附缺陷症(bovine leukocyte adhesion deficiency,BLAD)是一种常染色体隐性、致死性、遗传性疾病,严重影响奶牛生产性能和奶牛场的经济效益。为建立快速可靠的BLAD检测方法,本试验根据GenBank中BLAD CD18序列设计引物,PCR扩增后纯化产物,构建A/A、A/G和G/G 3种基因型标准质粒。用标准质粒建立焦磷酸测序检测方法。用建立的方法检测奶牛血液样品,其结果与Sanger测序结果进行比较,分析和验证检测结果的准确性。用建立的方法对300份奶牛血液样品进行检测,结果显示样品中A/A基因型检出294例,占总体比例的98%;A/G基因型检出6例,占总体比例的2%。随机抽取30份已检测样品进行Sanger测序,结果显示与焦磷酸测序法结果一致。本试验结果表明焦磷酸测序法检测BLAD,具有特异、灵敏、快速的特点,其检测结果准确可靠,适合于试剂盒的研发及应用于BLAD的临床诊断。

奶牛白细胞黏附缺陷症HRM检测方法的建立及应用

根据GenBank中奶牛白细胞黏附缺陷症(BLAD)CD18序列设计引物,进行PCR扩增后纯化产物,构建A/A型、A/G型和G/G型3种标准质粒,用标准质粒建立HRM检测方法。用建立的方法对300份奶牛血液样品进行检测,将其结果与Sanger测序结果进行对比,分析和验证检测结果的准确性。结果显示,样品中A/A基因型检出294例,占总体的98%;A/G基因型检出6例,占总体的2%,且两种检测方法的结果一致。结果表明,HRM检测BLAD具有简便快速、特异和灵敏等优点,可作为BLAD携带者突变筛查的优选方法。