CircWHSC1调节miR-212-3p/CD47轴对子宫内膜癌细胞免疫逃逸和紫杉醇耐药性的影响

目的:探讨环状链非编码RNA(Circ)WHSC1调节微小RNA(miR)-212-3p/整合素相关蛋白(CD47)轴对子宫内膜癌(EC)细胞免疫逃逸和紫杉醇(PTX)耐药性的影响。方法:qRT-PCR检测EC细胞系(Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B)及人子宫内膜基质细胞(ESC)系CL0453中CircWHSC1、miR-212-3p、CD47 mRNA表达水平;以Ishikawa细胞为研究对象,分为对照组、RNA干扰CircWHSC1载体(sh-CircWHSC1)组、阴性对照(sh-NC)组、sh-CircWHSC1+miR-212-3p抑制剂(miR-212-3p inhibitor)组、sh-CircWHSC1+抑制剂阴性对照(inhibitor NC)组;CCK-8分别检测各组Ishikawa细胞增殖及对PTX耐药性;流式细胞仪检测细胞凋亡状况;Western blot检测CD47及免疫逃逸蛋白(B7-H1、PD-L1)表达;双荧光素酶验证miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47靶向关系。结果:Ishikawa、RL95-2、HEC-1-A、HEC-1B细胞较CL0453细胞CircWHSC1、CD47 mRNA均显著增加,miR-212-3p表达显著下降(P<0.05);与对照组、sh-NC组相比,sh-CircWHSC1组CircWHSC1、CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著下降,凋亡率、miR-212-3p表达显著增加(P<0.05);与sh-CircWHSC1+inhibitor NC组相比,sh-CircWHSC1+miR-212-3p inhibitor组CD47 mRNA、增殖率、IC 50、B7-H1、PD-L1表达均显著增加,凋亡率、miR-212-3p表达显著下降(P<0.05)。miR-212-3p分别与CircWHSC1、CD47存在靶向关系。结论:干扰CircWHSC1表达可抑制Ishikawa细胞增殖,降低PTX耐药性,促进其凋亡,并可能抑制癌细胞免疫逃逸,其作用机制可能是通过调控miR-212-3p/CD47轴实现的。

阻断SP/NK1R信号轴可抑制小鼠黑色素瘤增殖

目的:探讨阻断SP/NK1R信号轴对小鼠黑色素瘤生长的影响及可能作用途径。方法:建立瞬时接种B16F10细胞形成原位黑色素瘤的小鼠模型,腹腔注射给予NK1R拮抗剂阿瑞匹坦(5 mg/kg)进行干预。给药5次后取小鼠胸腺、脾脏和皮肤黑色素瘤组织,计算各组小鼠体重变化、肿瘤增长变化、胸腺指数和脾脏指数;采用免疫荧光染色考察黑色素瘤组织中细胞增殖和凋亡情况;并观察肿瘤组织中浸润效应CD8 T细胞的表达情况。结果:给予阿瑞匹坦拮抗NK1R对各组小鼠体重没有明显影响,但能显著抑制原位黑色素瘤的增殖;阻断SP/NK1R信号轴能够引起小鼠胸腺指数显著升高,但对脾脏指数没有明显影响;免疫荧光染色结果显示给予阿瑞匹坦能够显著抑制黑色素瘤细胞在体内的增殖,并显著促进其凋亡;同时,拮抗NK1R能够显著增加肿瘤浸润效应CD8 T细胞的数目。结论:阻断SP/NK1R信号轴可以显著抑制小鼠中黑色素瘤细胞的增殖,并促进肿瘤细胞凋亡,这一作用可能是通过促进CD8 T细胞浸润,增强抗肿瘤免疫来实现的。

黄连-吴茱萸不同配比组方调节CD1d-iNKT细胞轴治疗动脉粥样硬化的作用机制

目的:探讨黄连-吴茱萸治疗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制及配伍比例。方法:采用高脂饲料喂养ApoE^(-/-)小鼠诱导AS模型。将造模成功的50只小鼠按照随机数表法分为模型组、连萸1∶1组(261.08 mg/kg)、连萸2∶1组(241.11 mg/kg)、连萸6∶1组(188.84 mg/kg)、西药组(10.40 mg/kg),每组10只。另设10只C57BL/6J小鼠作为空白组。中药予黄连、吴茱萸不同配比剂量灌胃,西药予以阿托伐他汀钙混悬液灌胃,空白组及模型组予等量的无菌蒸溜水灌胃,1次/d,连续灌胃12周。给药结束后,采用生化法检测总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;采用苏木精-伊红(HE)染色观察小鼠主动脉病理学变化;采用免疫组化法检测脾脏、胸腺CD1d蛋白表达;采用流式细胞术检测脾脏、胸腺iNKT细胞变化;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清干扰素(IFN)-γ、白细胞介素(IL)-6、IL-4、IL-13表达水平;采用实时荧光PCR法检测小鼠主动脉IFN-γ、IL-6、IL-4、IL-13 mRNA表达量。结果:与模型组比较,连萸不同配比组及西药组血清TC、TG、LDL-C显著降低,HDL-C显著升高(P<0.01,P<0.05);主动脉组织斑块面积减小;脾脏、胸腺CD1d蛋白表达水平显著降低(P<0.01),iNKT数量显著减少(P<0.01);血清IFN-γ、IL-6显著降低,IL-4、IL-13显著升高(P<0.01);主动脉IFN-γ、IL-6 mRNA表达水平显著降低(P<0.01),IL-4、IL-13 mRNA表达水平显著升高(P<0.01),且连萸1∶1组各指标改善优于连萸2∶1组、连萸6∶1组、西药组(P<0.01)。结论:黄连-吴茱萸配伍对小鼠主动脉斑块有较好的治疗作用,且1∶1配比效果最佳,其作用机制可能与调节CD1d-iNKT细胞轴,从而减轻血管炎性浸润有关。

重组人粒细胞集落刺激因子（rhG—CSF）对脑缺血大鼠SDF-1／CXCR4信号轴的影响

目的观察重组人粒细胞集落刺激刺激因子（rhG—CSF）对局灶性脑缺血大鼠SDF-1／CXCR4信号轴的影响。方法健康雄性SD大鼠采用线栓法建立局灶性脑缺血模型，随机分为rhG-CSF治疗组、生理盐水对照组和正常对照组。术后90min再灌注，分别于7、14、21d灌注取脑。免疫组织化学法检测脑内SDF-1、CXC[14、CD34（＋）的水平变化。结果rhG—CSF治疗组大鼠术后7、14d时神经细胞损伤明显轻于对照组，SDF-1、CXCR4的水平及血管再生明显优于生理盐水对照组和正常对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论rhG—CSF可促进SDF-1活化，激活SDF-1／CXCR4信号轴，促进EPCs归巢至缺血组织区参与血管再生。