1565nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊对斑秃小鼠IFN-γ信号及NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例的影响

目的研究1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊干预对斑秃小鼠干扰素-γ(IFN-γ)信号与NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的影响。方法将50只雄性C3H/HeJ小鼠随机分为正常组、模型组、点阵激光组、侧柏叶酊组及点阵激光联合侧柏叶酊组,每组10只。除正常组外,其余组小鼠均采用环磷酰胺诱导斑秃。在造模期间,点阵激光组给予1565 nm非剥脱点阵激光治疗;侧柏叶酊组给予5%侧柏叶酊在脱毛部位轻微按摩2~3 min;点阵激光联合侧柏叶酊组给予1565 nm非剥脱点阵激光及5%侧柏叶酊按摩治疗。观察各组小鼠皮肤状态和毛发生长情况;实验第7天取血,流式细胞术检测血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例,Western blot法检测毛囊组织中IFN-γ及其受体IFNGR1和IFNGR2表达情况。结果模型组小鼠斑秃部位的毛发出现断裂、变细,裸露皮肤表面出现黑点;各干预组斑秃情况均较模型组轻,其中点阵激光联合侧柏叶酊组最轻。模型组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显高于正常组(P均<0.05)。点阵激光组、侧柏叶酊组仅毛囊组织中IFN-γ蛋白相对表达量均明显低于模型组(P均<0.05),点阵激光联合侧柏叶酊组血液中NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞比例和毛囊组织中IFN-γ、IFNGR1、IFNGR2蛋白相对表达量均明显低于模型组及点阵激光组、侧柏叶酊组(P均<0.05)。结论1565 nm非剥脱点阵激光联合侧柏叶酊外用可通过抑制IFN-γ信号通路和NKG2D^(+)CD8^(+)T细胞的积累,从而有效改善斑秃。

过敏性鼻炎患者外周血CD4^(+)2型辅助T(Th2)细胞中IL-18的表达升高

目的 探讨过敏性鼻炎(AR)患者外周血2型辅助T(Th2)细胞白细胞介素18(IL-18)、 IL-18结合蛋白亚型a(IL-18BPa)和IL-18受体α(IL-18Rα)的表达水平及过敏原对其表达的影响。方法 采用大籽蒿花粉过敏原粗提液(ASWE)和梧桐花粉过敏原粗提液(PPAE)、室尘螨过敏原粗提液(HDME)激发外周血单个核细胞和免疫磁珠分选后的CD4^(+)T细胞,流式细胞术检测上述标本CD4^(+)Th2细胞中IL-18、 IL-18BPa和IL-18Rα的表达,BioPlex检测血浆IL-4的水平,并分析其与IL-18+Th2细胞比例的相关性。结果 与正常对照相比,AR患者外周血CD4^(+)Th2细胞中IL-18+细胞的比例增加,IL-18的平均荧光强度(MFI)增强;IL-18Rα MFI降低。过敏原可直接诱导分选后的HC CD4^(+)Th2细胞表达IL-18和IL-18Rα, AR患者CD4^(+)Th2细胞表达IL-18Rα。AR患者血浆IL-4水平升高,并与IL-18+Th2细胞的比例相关。结论 过敏原可能通过诱导外周血CD4^(+)Th2细胞表达IL-18参与AR发病。

NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系

目的探讨NOD鼠体内CD_4^+NKG2D^+T细胞与CD_8^+T细胞间关系。方法动态监测NOD鼠外周血中CD_4^+NKG2D^+T及CD8+NKG2D^+T细胞在不同周龄频率。利用IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,对其外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率进行分析。将磁珠分选所得CD_4^+NKG2D^+T细胞分别与经CFSE标记的纯CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞共培养4 d,检测体系中CD_4^+NKG2D-T细胞、CD_8^+T细胞CFSE的荧光强度变化。结果 NOD鼠外周血CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T及CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率均随其1型糖尿病疾病进程发展逐渐升高,且二者之间呈正相关。IGRP206-214特异性CTL清除的NOD鼠,外周血中CD_4^+NKG2D+/CD_4^+T细胞频率随CD8+NKG2D+/CD_8^+T细胞频率降低显著下降。与单独培养的CD_4^+NKG2D-T细胞相比,加入CD_4^+NKG2D^+T细胞的培养体系中,CD_4^+NKG2D-T细胞增殖加快。但CD_4^+NKG2D^+T细胞对CD_8^+T增殖作用不明显。结论 NOD鼠体内存在着一群与1型糖尿病疾病进程正相关的CD_4^+NKG2D^+T细胞,且该群细胞极有可能是通过直接作用于CD_4^+NKG2D-T细胞而间接对CD_8^+T细胞产生作用。

CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞联合hs-CRP在急性脑梗死肺部感染中的诊断价值

目的检测CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞在急性脑梗死肺部感染患者外周血中的表达水平,并分析其与超敏C反应蛋白(hs-CRP)联合检测对急性脑梗死肺部感染的预测价值。方法选取2019年6月—2020年12月于徐州医科大学附属医院确诊的50例急性脑梗死合并肺部感染患者作为研究对象,并以同期住院的50例未合并肺部感染的急性脑梗死患者作为对照组。比较2组患者的临床资料以及外周血CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞的表达水平。采用单因素和多因素Logistic回归分析筛查急性脑梗死合并肺部感染的危险因素,结合受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分比和hs-CRP单独检测以及联合应用的预测价值。结果与无肺部感染组相比,肺部感染组美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分更高且多合并吞咽困难,血清中IL-6及hs-CRP水平更高,外周血CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.05)。经单因素和多因素Logistic回归分析显示,CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率、hs-CRP水平升高是急性脑梗死合并肺部感染的危险因素。ROC曲线显示,CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率、hs-CRP单独作为肺部感染预测指标时,其曲线下面积AUC分别为0.941和0.814,二者联合应用时AUC为0.962。结论CD4^(+)NKG2D^(+)T细胞百分率与外周血hs-CRP水平联合应用对急性脑梗死并发肺部感染具有良好的诊断价值,可作为急性脑梗死发病早期预测并发肺部感染的生物学标志物。

应用CD^(2+)细胞增长试验体外检测人PBMC对免疫制剂的应答能力

为考核 CD2 + 细胞增长试验在评价人体对免疫制剂应答能力中的应用价值 ,用已建立的生物素 -链霉亲和素免疫细胞化学法 CD2 + 细胞增长试验 ,将健康人和肿瘤病人外周血单个核细胞 (PBMC)与 IL - 2、IFNγ 和胸腺肽3种免疫制剂共温后 ,分别检测 CD2 +细胞增长率。结果表明 ,健康人 PBMC经 3种药物作用后的 CD2 +细胞增长率高于肿瘤患者 ,而肿瘤患者对该 3种药物的应答能力低下 ,有明显的个体差异。据此认为 ,CD2 +细胞增长试验可用于临床评估患者对拟用免疫制剂的应答能力 ,预测疗效 ,有利于临床对个体合理选用免疫制剂。

雷帕霉素对人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞增殖和干性维持的影响

目的探讨雷帕霉素对人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞增殖和干性维持的影响。方法(1)自U2OS细胞中分离CD133^(+)U2OS细胞,分为预对照组、低剂量雷帕霉素组和高剂量雷帕霉素组,分别加入含0 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL雷帕霉素进行培养。干预24 h、48 h、72 h后检测各组细胞的增殖抑制情况,然后选择适宜的干预剂量和时间进行后续试验。(2)将CD133^(+)U2OS细胞分为对照组和雷帕霉素组,分别使用不含雷帕霉素的培养基、含雷帕霉素的培养基培养。干预48 h后检测两组细胞中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、磷酸化mTOR及干性标志蛋白[SRY盒转录因子2(Sox2)、八聚体结合转录因子4(Oct4)]的相对表达量。结果(1)与预对照组相比,低剂量雷帕霉素组和高剂量雷帕霉素组细胞的增殖均受到抑制,且随着干预时间的延长和剂量的增加细胞增殖抑制率有增高的趋势(均P<0.05)。故在后续实验选择100 ng/mL雷帕霉素干预48 h。(2)雷帕霉素组mTOR、磷酸化mTOR、Sox2、Oct4的相对表达量均较对照组降低(均P<0.05)。结论雷帕霉素能够抑制人骨肉瘤CD133^(+)U2OS细胞的增殖和干性维持,这可能与其降低mTOR信号通路活性有关。

应用CD_2^+细胞增长试验评价人体对某些药物的应答能力

目的 :通过体外试验检测CD+ 2 细胞的增长程度 ,从而评价人体对某些药物的应答能力。方法 :无菌制备人PBMC悬液 ,用胰酶消化去除大部分CD2 抗原 ,然后将悬液分别与不同药物共温 18h ,使其得到不同程度的恢复。继用生物素 链霉亲和素系统 (BSA)免疫细胞化学法染色 ,分别计数CD+ 2 细胞 ,并计算其增长率。结果 :经IL 2、IFNγ、胸腺素等药物刺激后 ,健康人的CD+ 2 细胞增长率 ( 86 % )显著高于病人 ( 2 7% ) (P <0 0 1)。在这三种药物中 ,IFNγ对健康人CD+ 2 细胞的促增长作用更为显著 (P<0 0 1)。结论 :应用CD+ 2 细胞增长试验不仅可以评价免疫药物活性 ,还有指导临床用药和预测疗效等作用。

吸入用布地奈德联合重组人干扰素α-1b注射液雾化干预对呼吸道合胞病毒感染幼鼠模型血清白介素13水平及CD2^(+)T淋巴细胞占比的影响

目的分析吸入用布地奈德联合重组人干扰素α-1b注射液雾化干预对呼吸道合胞病毒(RSV)感染幼鼠模型血清白介素13(IL-13)水平及CD2^(+)T淋巴细胞占比的影响。方法本实验时间为2020-07-23至2020-08-02。采用随机数字表法将32只SPF级Wistar幼鼠分为空白对照组、阳性对照组、布地奈德组及联合用药组,每组8只。除空白对照组外,其余各组采用滴鼻法建立RSV感染幼鼠模型;从实验第4天开始,空白对照组和阳性对照组幼鼠给予0.9%氯化钠溶液雾化干预,布地奈德组幼鼠给予吸入用布地奈德混悬液雾化干预,联合用药组幼鼠给予吸入用布地奈德混悬液联合重组人干扰素α-1b注射液雾化干预,各组均连续雾化干预5 d。雾化干预结束后,观察各组幼鼠的一般情况,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)双抗体夹心法检测各组幼鼠血清IL-13水平,采用流式细胞仪检测各组幼鼠血清CD2^(+)T淋巴细胞占比。结果本实验过程中各组幼鼠均未出现死亡情况,其中空白对照组幼鼠毛发光滑、有光泽,呼吸频率正常,活动自如,精神状态良好,进食正常,体温正常;阳性对照组幼鼠毛发无光泽、竖立,呼吸急促、喘息,伴有发热、寒战,行动迟缓,精神萎靡或烦躁不安,厌食;布地奈德组和联合用药组幼鼠毛发光滑、有光泽,呼吸频率稍快,行动、饮食基本正常,精神状态一般。阳性对照组幼鼠血清IL-13水平、CD2^(+)T淋巴细胞占比高于空白对照组,布地奈德组、联合用药组幼鼠血清IL-13水平高于空白对照组(P<0.05);布地奈德组、联合用药组幼鼠血清IL-13水平、CD2^(+)T淋巴细胞占比低于阳性对照组(P<0.05);联合用药组幼鼠血清IL-13水平低于布地奈德组(P<0.05)。结论吸入用布地奈德联合重组人干扰素α-1b注射液雾化干预可降低RSV感染幼鼠模型血清IL-13水平、CD2^(+)T淋巴细胞占比,其可能通过抑制炎症反应、调节免疫功能而提高治疗效果。

白介素-9和哮喘

白介素 9(IL 9)是由CD4 + TH2 细胞分泌的多效性的细胞因子 ,在机体的免疫应答中具有多种免疫调节作用 ,可作用于参与哮喘发病的多种炎症细胞 ,是一种具有重要的潜在临床应用价值的细胞因子 ,近年来正越来越受到关注。