原发免疫性血小板减少症患者PBMC中CD200/CD200R1表达及临床意义

目的 检测CD200/CD200R1信号通路分子在原发免疫性血小板减少症(primary immune thrombocytopenia,ITP)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的表达情况并分析其临床意义。方法 采用实时荧光定量PCR法检测ITP患者组(n=19)和健康对照组(n=19)PBMC中CD200/CD200R1的表达情况。ELISA法检测ITP患者血清中TNF-α,IFN-γ及IL-17细胞因子的表达。分析ITP患者中CD200/CD200R1与细胞因子及血小板计数的相关性。监测有效治疗后ITP患者CD200/CD200R1的变化情况。结果 与健康对照组比,ITP组PBMC中CD200/CD200R1的表达下降,且与患者血小板计数呈正相关。ITP患者血清中细胞因子TNF-α,IFN-γ及IL-17上调,其中TNF-α和IL-17的表达和与CD200及CD200R1的表达量间均呈负相关。经地塞米松治疗有效的ITP患者PBMC中,CD200及CD200R1的表达呈上升趋势。结论 CD200/CD200R1在ITP患者中表达降低,减少了对炎性因子分子表达的抑制作用,因此炎性因子表达增高,从而参与了ITP疾病的发生发展。

CD200R1缺失促进脂多糖诱导的小胶质细胞内吞

目的研究CD200R1对细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小胶质细胞内吞功能的影响。方法应用LPS激活小胶质细胞并通过荧光微球内吞实验观察小胶质细胞内吞水平的变化以及通过RT-qPCR检测CD200R1mRNA水平的表达,并在BV2-SH-SY5Y共培养模型中同样通过荧光微球内吞实验观察LPS诱导的小胶质细胞内吞功能的变化,最后利用CD200R1基因敲除小鼠提取原代培养的小胶质细胞并加LPS处理,通过荧光微球内吞实验观察其内吞功能的变化。结果LPS激活小胶质细胞,促进了小胶质细胞内吞水平增加以及CD200R1表达下降。在BV2-SH-SY5Y共培养模型中,神经元细胞接触小胶质细胞后抑制LPS诱导的小胶质细胞内吞增加,CD200R1基因敲除的小胶质细胞加入LPS处理后,内吞水平增加更明显。结论CD200R1基因敲除的小胶质细胞在LPS刺激后内吞水平增加更明显。

β4GalT1-CD200R1复合物在小胶质细胞炎性活化中的作用

目的:探讨β1,4-半乳糖基转移酶-1(β4GalT1)和CD200R1相互作用对小胶质细胞炎性活化的调节作用及其分子机制。方法:免疫共沉淀技术结合Western Blot法研究β4GalT1和CD200R1在体内外的相互作用;细胞免疫荧光技术观察两者定位。构建小胶质细胞-神经元共培养体系,阻断CD200-CD200R1结合,RT-PCR技术和ELISA试剂盒检测BV2细胞炎性因子i NOS、CD86、IL-1β、TNF-α的表达变化,LDH试剂盒检测神经元损伤情况。结果:β4GalT1和CD200R1有相互作用且存在共定位。CD200-CD200R1阻断剂增强LPS诱导的小胶质细胞炎性活化和神经元损伤,CD200R144号位突变体增强炎症因子释放和神经元损伤。CD200R144号位调节CD200-CD200R1结合,该突变体影响CD200-CD200R1的正常结合。结论:β4GalT1通过调节CD200R1第44号位的N-糖基化修饰,进而调节小胶质细胞的炎性活化及其介导的神经元损伤。

脑卒中相关肺炎外周血CD200/CD200R1通路及CD147表达对病情评估的价值

目的探讨脑卒中相关肺炎(SAP)外周血CD200/CD200R1通路及CD147表达对病情评估及患者预后的价值.方法选择2017年12月-2019年12月南方医科大学珠江医院急诊科收治的脑卒中急性缺血性脑卒中患者140例作为研究对象,根据其住院期间是否发生肺部感染分为SAP组(n=55)及非SAP组(n=85),选择同期急诊科收治的因外伤、车祸等入院的患者60例作为对照组.S A P组根据格拉斯哥评分及肺部感染评分进一步分为轻度、中度、重度昏迷组及轻度、中度、重度感染组.采用流式细胞术检测所有患者外周血中CD200、CD200R1水平,采用酶联免疫吸附法检测血清CD147水平.结果SAP组CD200、CD200R1水平低于非SAP组及对照组,CD147高于非SAP组及对照组(P<0.05);非SAP组CD200、CD200R1水平低于对照组,CD147高于对照组;随昏迷程度增加,CD200、CD200R1水平逐渐降低,CD147水平逐渐升高,比较差异具有统计学意义(P<0.05);随感染程度的增加,CD200、CD200R1水平逐渐降低,CD147水平逐渐升高,比较差异具有统计学意义(P<0.05).结论随着脑卒中相关肺炎病情的加重,外周血中CD200、CD200R1水平不断降低,CD147水平不断增加,三指标对于患者预后具有一定的预测价值.

RA患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞比例及中性粒细胞表面CD200R1的分析

本研究探讨类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的百分含量和中性粒细胞表面CD200R1的表达情况,并探讨其临床意义。采用流式细胞术分别检测RA患者和健康对照组外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞的百分含量和中性粒细胞表面CD200R1的阳性表达率。ELISA检测其血清中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)和CCR2的表达水平。实验结果显示:RA患者外周血CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞占CD4^+T细胞的比例明显低于健康对照组,中性粒细胞表面CD200R1的阳性表达率明显高于健康对照组,RA患者血清中MCP-1与CCR2的表达水平明显高于健康对照组。以上结果提示CD200/CD200R1信号异常,CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg细胞数量减少可能为RA的发病机制之一,调控CD200/CD200R1信号和CCR2^+Treg细胞输注可能成为RA治疗的新靶点。

海马CD200R1在小鼠围术期神经认知障碍中的作用

目的评价海马CD200受体1(CD200R1)在小鼠围术期神经认知障碍(PND)中的作用。方法清洁级雄性C57BL/6小鼠60只,9~10月龄,体重32~38 g。实验Ⅰ将36只小鼠采用随机数字表法分为2组(n=18):对照组(C组)和PND组。C组仅进行异氟醚麻醉,PND组在异氟醚麻醉下行左肝叶部分切除术。分别于术后1、3、7 d进行条件恐惧实验,记录僵直时间;然后处死小鼠取海马组织,采用ELISA法检测IL-1β和TNF-α含量,采用Western blot法检测CD200和CD200R1表达。实验Ⅱ取24只小鼠采用随机数字表法分为2组(n=12):CD200-Fc组和IgG1-Fc组。CD200-Fc组和IgG1-Fc组侧脑室分别注射1μg/μl重组蛋白CD200-Fc和人IgG1-Fc 2μl,注射结束后行左肝叶部分切除术。分别于术后1和3 d进行条件恐惧实验,记录僵直时间。结果实验Ⅰ与C组比较,PND组术后1和3 d时场景恐惧记忆实验僵直时间缩短,海马IL-1β含量升高,术后3和7 d时海马TNF-α含量升高,术后1 d时海马CD200和CD200R1表达上调(P<0.05)。实验Ⅱ与IgG1-Fc组比较,CD200-Fc组术后1 d时场景恐惧记忆实验僵直时间延长(P<0.05)。结论海马CD200R1表达上调是小鼠PND的内源性保护机制。

CD200/CD200受体1在类风湿关节炎免疫病理机制中的作用

目的探讨CD200/CD200受体1(CD200R1)信号轴在类风湿关节炎(RA)免疫病理机制中的作用。方法采用免疫组化法、流式细胞仪检测RA滑膜、外周血细胞CD200/CD200R1表达水平,观察强化CD200/CD200R1信号对RA破骨细胞分化及T辅助17(Th17)细胞增殖、分化的作用。结果 RA患者滑膜及外周血CD200+(3.55%±0.24%vs.14.37%±1.54%,P<0.0001)及CD200R1+(11.19%±1.23%vs.20.57%±1.26%,P<0.0001)细胞明显低于健康对照者,经英夫利西单抗联合甲氨蝶呤治疗后,外周血CD200/CD200R1表达明显升高(P<0.0001),且CD200R1变化水平与血沉(ESR)、C反应蛋白(CRP)、疾病活动性评分(DAS28)呈负相关。细胞培养发现通过上调CD200/CD200R1信号可以抑制CD4+辅助性T细胞向Th17细胞增殖分化(46.86%±1.08%vs.54.06%±1.80%,P<0.01),促进凋亡(1.21%±0.11%vs.0.82%±0.06%,P<0.0001)、坏死(13.54%±0.31%vs.3.82%±0.19%,P<0.0001),并抑制趋化因子配体20(CCL20)-趋化因子受体6(chemokine receptor 6,CCR6)介导的Th17细胞的炎性趋化(359.30±35.25vs.1992.00±318.00,P<0.0001)。此外,强化CD200/CD200R1信号还可降低单核诱导的破骨细胞形成。结论 RA滑膜及外周血CD200/CD200R1信号存在表达与功能异常,通过调控Th17细胞及破骨细胞免疫应答,有望成为RA抗炎治疗的新靶点。