孕酮对小鼠子宫巨噬细胞数量及膜受体CD14、CD204表达的影响

目的探讨孕酮对子宫巨噬细胞数量及其膜受体CD14、CD204表达的影响,以及孕酮和巨噬细胞在子宫局部免疫中的作用。方法 1.25只正常非孕鼠随机分为空白对照组、阴性对照组和低、中、高3个不同浓度孕酮处理实验组,每组5只。低、中、高浓度实验组每天分别皮下注射0.4mg、2.0mg、4.0mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,连续注射5d;空白对照组不做任何处理。2.孕4d和5d小鼠各15只,分别随机分为空白对照组、阴性对照组和实验组,每组5只。实验组分别于当天早晨皮下注射4mg孕酮,阴性对照组注射等体积芝麻油,空白对照组不做任何处理。以上各组均于末次注射后6h取子宫,通过非特异性酯酶(α-NAE)染色和免疫组织化学检测子宫α-NAE+、CD14+、CD204+巨噬细胞的变化。结果与对照组相比,注射孕酮后,非孕鼠子宫内膜、肌层和外膜的α-NAE+及CD14+巨噬细胞极显著减少(P<0.01),并与剂量呈正相关,但未检测到CD204+巨噬细胞;孕4d、5d小鼠子宫α-NAE+、CD14+、CD204+巨噬细胞均显著增多(P<0.01)。结论孕酮可通过调节巨噬细胞数量、分布及膜受体的表达影响子宫局部免疫状态,替代途径活化的巨噬细胞可能介导了妊娠期母胎免疫耐受的维持。

CD163^+、CD204^+巨噬细胞在胰腺癌组织中的浸润及临床意义

目的探讨CD163^+、CD204^+巨噬细胞在胰腺癌组织中的浸润及临床意义。方法收集2016年6月至2018年10月间在四川大学华西医院被确诊为胰腺癌的52例患者的肿瘤组织标本和癌旁组织标本,应用免疫组织化学法检测肿瘤组织和癌旁组织中的CD163^+、CD204^+巨噬细胞的表达情况,分析不同CD163^+、CD204^+表达水平与胰腺癌患者的临床资料和预后的关系。结果胰腺癌组织中CD163^+、CD204^+巨噬细胞数目均多于癌旁组织。单因素分析显示,CD163^+高表达患者与低表达者相比,在肿瘤大小、淋巴结转移、血管侵犯及TNM分期方面差异有统计学意义(P<0.05);CD204^+高表达患者与低表达者相比,在肿瘤大小、血管侵犯方面差异有统计学意义(P<0.05)。淋巴结转移是CD163^+高表达的独立危险因素,TNM分期是CD204^+高表达的危险因素(P均<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,CD163^+、CD204^+表达水平较低的胰腺癌患者的总生存率均高于高表达者(P均<0.05)。结论胰腺癌患者肿瘤组织中存在CD163^+、CD204^+巨噬细胞浸润,且CD163^+、CD204^+表达水平分别与患者的淋巴结转移、TNM分期密切相关,检测其表达水平对于评估胰腺癌的进展和预后具有一定的参考价值。

交感神经及其递质去甲肾上腺素对小鼠子宫巨噬细胞CD14和CD204表达的抑制作用

目的:研究交感神经在小鼠子宫局部免疫中的作用.方法:昆明种雌性小鼠,实验组连续5d腹膜腔注射6-羟多巴胺(6-OHDA)进行交感神经阻断实验,分别于注射后第1、3、5、7、9、14天取子宫;所有小鼠腹膜腔注射6-OHDA阻断交感神经,之后实验组每天腹膜腔注射5、10、25 μg去甲肾上腺素(NE)进行NE处理实验,在注射的第5天取子宫.免疫组织化学检测子宫巨噬细胞膜受体CD14和CD204的表达.结果:与对照组相比,交感神经阻断后子宫内膜、肌层和外膜CD14+巨噬细胞均显著增多,CD14表达显著上调;对照组和实验组第1天未检测到CD204的表达,其余各组均有CD204的表达,且表达量随着时间推移而增多,第9天达到高峰.各实验组注射NE后,子宫CD14+、CD204+巨噬细胞显著减少,CD14、CD204表达显著下调,中、高浓度组下调较明显.结论:交感神经及其递质NE可以通过调节巨噬细胞数量和膜受体CD14、CD204的表达参与子宫局部免疫状态的维持.

CD204阴性人脂肪来源细胞体外成软骨潜能的初步研究

目的比较CD204+和CD204-两种人脂肪来源细胞的干细胞特性和体外诱导成软骨的能力。方法分离培养人脂肪来源细胞并进行流式细胞分选,分别获得CD204+和CD204-两种细胞。将这两种细胞培养扩增至第2代,观察其形态学特点;成脂、成骨定向诱导分化,油红O染色、茜素红染色定性;同时将两种细胞进行pellet成软骨诱导分化,比较体外诱导成软骨的能力,并以HE、Safranin O和Ⅱ型胶原免疫组化染色等进行鉴定。结果经流式细胞分选,脂肪来源细胞中CD204表达阳性率约为10%。分选后的CD204+和CD204-细胞均呈成纤维细胞样贴壁生长,但CD204-细胞具有更强的增殖能力。成脂诱导10 d后,两组细胞油红O染色均可见胞浆内有大量红染脂滴,但CD204+细胞具有更强的成脂潜能。成骨诱导2周后,两组细胞茜素红染色均可见钙结节红染,而CD204-细胞具有更强的成骨潜能。同时,细胞pellet成软骨诱导4周后,大体观可见CD204-细胞组pellet形成白色透明样软骨成分,而CD204+细胞组pellet外观微黄。HE和Ⅱ型胶原免疫组化染色均显示CD204-组pellet可见成熟软骨陷窝形成,Safranin O染色显示CD204-组软骨特异性细胞外基质沉积;而CD204+细胞组pellet则呈纤维化改变。结论脂肪组织来源的CD204-细胞具有干细胞的生物学特点,且有良好的成软骨潜能,可以成为软骨组织工程良好的种子细胞来源。

水红花子对LPS诱导流产小鼠子宫巨噬细胞的抑制效应及其保胎作用

目的:探讨水红花子对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的免疫抑制及其保胎作用。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为细菌脂多糖(LPS)处理组(B组),水红花子处理组(C组),水红花子及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,用酶组织化学、免疫组化和ELISA方法分别检测非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+和CD204+巨噬细胞、TNF-α的变化。结果:B组小鼠流产率和胚胎吸收率均为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至10.39%。与A组相比,在B组,α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量和阳性面积,以及TNF-α含量均显著增加;在D组,环肌外侧极显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层均接近正常水平。与A、B组相比,C、D组CD204+巨噬细胞数量和阳性面积均显著增多。结论:通过调节子宫巨噬细胞的表型、活性和TNF-α的分泌,可能是水红花子对抗LPS所致流产效应的机制之一。

红藤对LPS诱导流产小鼠的保胎作用及子宫巨噬细胞的影响

目的:探讨红藤对细菌脂多糖(LPS)诱导流产小鼠的保护作用及其免疫药理机制。方法:昆明种小鼠55只,随机分为对照组(A组,10只)和实验组。实验组又分为LPS处理组(B组)、红藤处理组(C组)、红藤及LPS双处理组(D组),每组各15只。观察妊娠结果,并用酶组织化学、免疫组化、ELISA方法检测子宫非特异性酯酶阳性(α-NAE+)、CD14+、CD204+巨噬细胞和TNF-α的变化。结果:小鼠流产率在B组为100%(P<0.01),胚胎吸收率为100%(P<0.01);而D组流产率降低为13.33%,胚胎吸收率降至12.56%;孕鼠子宫α-NAE+、CD14+巨噬细胞数量,B组子宫各部位与A组相比均显著增多(P<0.01);D组环肌外侧与A组相比显著增多(P<0.01),但环肌内侧、功能层无明显变化,C、D组CD204+巨噬细胞数量与A组、B组相比均显著增多(P<0.01);子宫TNF-α含量B组与A组相比显著增加(P<0.01),而D组接近正常水平。结论:红藤可以对抗LPS所致的小鼠流产,通过影响孕鼠子宫巨噬细胞的数量、分布和亚群,抑制TNF-α的分泌,是其保护胚胎正常发育的机理之一。