CD226在小鼠小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)中的表达

目的 观察CD226在小肠3型固有淋巴样细胞(ILC3)上的表达情况。方法 采用生物信息学方法分析小鼠CD226在ILC中的表达。分离正常C57BL/6J小鼠小肠黏膜固有层淋巴细胞(LPL),流式细胞术检测CD226在ILC1和ILC3上的表达。构建葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠肠炎模型,观察CD226在ILC3上表达的变化情况。结果 小鼠小肠ILC1和ILC3均表达CD226;肠炎模型中ILC3所占比例降低,但CD226在ILC3上的表达水平升高。结论 小鼠小肠表达CD226,DSS诱导的肠炎模型中虽然ILC3比例降低,但CD226在ILC3的表达增加。

CD226分子的信号转导通路及功能研究进展

CD226分子属于免疫球蛋白超家族成员,广泛表达于T细胞、自然杀伤(NK)细胞、单核细胞、巨噬细胞等细胞表面。CD226胞外结构域与配体CD155、CD112结合后,激活细胞膜内侧的Src家族激酶Fyn、Src等,进而活化下游PI3K-AKT和VAV-1-ERK通路,调控T细胞的分化、增殖和细胞因子分泌,增强CD8^(+)T细胞、NK细胞的杀伤功能。CD226胞内结构域的S329位点磷酸化后结合淋巴细胞功能相关抗原1,协同促进T细胞、NK细胞免疫突触的形成。临床疾病相关研究发现,CD226促进抗肿瘤免疫应答,CD226^(+)CD8^(+)T细胞的存在是免疫检查点阻断治疗有效的前提。此外,CD226参与1型糖尿病、系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病的发生和发展。深入理解CD226信号转导机制及其介导的功能,可为靶向CD226的肿瘤免疫治疗和自身免疫性疾病治疗提供坚实的理论基础。

CD226、 TIGIT和CD96调节NK细胞功能参与机体抗肿瘤免疫

CD226是自然杀伤(NK)细胞表面的活化性受体,与具有免疫球蛋白和免疫受体酪氨酸抑制基序结构域的T细胞免疫受体(TIGIT)和CD96等分子通过竞争结合肿瘤细胞表面的CD155等配体,介导NK细胞的杀伤功能。虽然TIGIT和CD96在肿瘤微环境中有其他结合配体,但它们以更高的亲和力竞争结合CD115配体,并抑制NK细胞的活性,使肿瘤细胞逃避杀伤。因此,研究这三种NK细胞表面受体在不同肿瘤中的表达模式,并监测分析它们与配体的结合能力,有助于探索新的肿瘤治疗策略。本文总结了CD226、 TIGIT和CD96等NK细胞受体分子调节NK细胞功能在机体抗肿瘤免疫应答中的作用及其机制。

巨噬细胞条件性Cd226基因敲除小鼠的构建及功能分析

目的构建并鉴定巨噬细胞条件性Cd226基因敲除小鼠,为研究CD226分子调节巨噬细胞表型和功能影响疾病发生发展提供动物模型。方法通过Cd226^(flox/+)雌雄小鼠自交,得到基因型Cd226^(flox/flox)小鼠。Cd226^(flox/flox)与Lyz2-Cre^(+)小鼠杂交,获得Cd226^(flox/+)Lyz2-Cre^(+)小鼠,再将其与Cd226^(flox/flox)小鼠杂交,最终获得Cd226^(flox/flox)Lyz2-Cre^(+)小鼠,即巨噬细胞条件性Cd226基因敲除小鼠。采用PCR和琼脂糖凝胶电泳鉴定小鼠基因型;采用流式细胞术、qRT-PCR和Western Blot验证小鼠巨噬细胞CD226敲除效果;采用Transwell实验检测CD226对小鼠巨噬细胞迁移能力的影响。结果从基因和蛋白水平证实巨噬细胞条件性Cd226基因敲除小鼠构建成功。Transwell实验结果显示,与对照组相比,巨噬细胞条件性敲除CD226分子显著抑制腹腔巨噬细胞的迁移。结论成功构建巨噬细胞条件性Cd226基因敲除小鼠,为后续深入研究CD226调控巨噬细胞功能在免疫性疾病发病中的作用和机制提供更加精准的实验动物模型。

敲除CD226通过调节小鼠脾脏和肠道免疫细胞比例缓解小鼠的慢性束缚应激引起的抑郁样行为

目的探讨CD226在小鼠慢性束缚应激(CRS)诱导的抑郁样行为中发挥的免疫调控作用及其可能机制。方法选取4~6周龄野生型(WT)雄性C57/BL6J和同品系CD226基因敲除(CD226KO)小鼠建立CRS模型,通过强迫游泳测试、蔗糖偏好测试等行为学检测方法对小鼠进行应激抑郁评分,利用流式细胞术分析脾脏、Peyer淋巴结及肠上皮内淋巴细胞亚群的差异。结果与WT CRS组相比,CD226KO CRS组强迫游泳测试静止时间显著降低,蔗糖偏好率显著上升;脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞之比显著降低;小肠上皮内淋巴细胞中T细胞受体αβ(TCRαβ)和TCRαβCD8αβ细胞亚群比例显著升高。结论敲除CD226能够缓解小鼠CRS模型诱导的抑郁样行为,影响CRS状态下小鼠脾脏及肠道免疫细胞比例,改善小鼠应激状态下的整体免疫状态。

CD226、CD96在非小细胞肺癌患者NK细胞中的表达及意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者自然杀伤(NK)细胞中CD226、CD96的表达水平及意义。方法选择2016年1月—2017年1月我院收治的85例NSCLC患者为研究对象,选取同期在本院进行健康体检的50例正常人为对照。采用流式细胞术检测外周血NK细胞中活化受体CD226、CD96和NK细胞抑制性受体TIGIT的表达,并分析CD226、CD96与NSCLC患者临床病理特征的关系。采用Pearson分析CD226与CD96表达水平的关系;免疫组化法检测NSCLC组织和癌旁组织中CD226和CD96的共同配体CD155的表达,并分析CD155与NSCLC患者临床病理特征的关系。结果NSCLC患者和正常人外周血NK细胞中CD226、CD96、TIGIT的阳性表达率分别为(75.32±12.02)%vs.(84.23±4.01)%(P<0.05),(25.31±5.36)%vs.(34.26±10.23)%(P<0.05),(47.36±20.08)%vs.(52.31±18.36)%(P>0.05)。Pearson分析结果显示,CD226^(+)NK细胞比例与CD96+NK细胞比例呈正相关(r=0.486,P<0.05)。NSCLC高/中分化患者CD226+NK细胞比例明显高于低分化患者(P<0.05)。无淋巴结转移患者CD96^(+)NK细胞比例明显高于有淋巴结转移患者(P<0.05)。NSCLC组织中CD155免疫组化染色总分明显高于癌旁组织(P<0.05),CD155的表达水平与患者临床病理特征无明显相关性(P>0.05)。结论NSCLC患者NK细胞中CD226、CD96的表达水平均明显降低,这可能对肿瘤免疫逃逸有一定影响;上调NK细胞中CD226和CD96的表达可能成为治疗CD155阳性NSCLC患者的潜在方法。

含3C蛋白酶切位点的人CD226胞膜外区Ig融合蛋白的真核表达及应用

目的 :构建含 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6 (PTA1)分子胞膜外区Ig融合蛋白编码基因的真核表达载体 ,并进行表达和初步鉴定。方法 :将人CD2 2 6分子的胞膜外区基因 ,克隆入含 3C蛋白酶靶序列的Ig真核表达载体 p 3C Ig中。测序证实后 ,转染COS7细胞并进行瞬时表达。表达产物经亲和层析柱纯化 ,并通过免疫荧光染色及 3C蛋白酶酶切反应进行鉴定。结果 :经表达和纯化获得CD2 2 6胞膜外区的Ig融合蛋白。该融合蛋白可与表达于ECV30 4细胞表面的CD2 2 6配体有效结合。同时 ,融合蛋白的Fc段亦经 3C蛋白酶切除 ,从而获得CD2 2 6胞膜外区的真核表达分子。结论 :成功地获得了含有 3C蛋白酶酶切位点的人CD2 2 6分子胞膜外区Ig真核表达产物 ,为进一步对CD2 2 6分子进行结构和功能研究 。

巨细胞病毒感染下调肾移植受者NK细胞CD226和CD16的表达

目的探讨肾移植术后巨细胞病毒(CMV)感染对自然杀伤(NK)细胞活化性受体CD226以及CD16表达的影响。方法采用流式细胞术分别检测肾移植术后CMV感染期和稳定期、肾移植术后稳定期受者和健康对照者NK细胞CD226和CD16的表达。结果肾移植受者发生CMV感染者与CMV感染恢复期、稳定受者组和健康对照组NK细胞占淋巴细胞比例均无明显差异。但CMV感染组外周血CD226^+NK细胞占NK细胞比例为(75.06±13.65)%,显著低于健康对照的(88.28±11.98)%和肾功能稳定组的(87.53±6.43)%;感染恢复期患者CD226^+NK细胞比例恢复至(88.37±8.91)%,与稳定受者组和健康对照组均无显著差异。CMV感染组的NK细胞CD226平均荧光强度(MFI)与稳定受者组和健康对照组均无显著差别,而CMV感染恢复期患者NK细胞CD226的MFI明显高于上述3组。CMV感染组CD16^+NK细胞占NK细胞比例下降为(75.06±13.65)%,显著低于稳定受者组的(88.28±11.98)%和健康对照的(90.35±10.07)%,而恢复期CD16^+NK细胞比例回升到(86.30±14.01)%,与稳定受者组和健康对照组无显著性差异。NK细胞CD16的MFI在感染期和恢复期与稳定受者组和对照组均未见显著性差异。结论 CMV感染可引起NK细胞CD226和CD16表达下调,而在感染恢复期CD226和CD16表达恢复,提示CD226和CD16参与肾移植受者NK细胞抗CMV感染的过程。

CD226(PTA1)单抗诱导NK细胞克隆杀伤靶细胞的研究

目的 :研究CD2 2 6分子在NK细胞克隆上的表达及功能。方法 :用有限稀释法建立NK细胞克隆并鉴定。采用重导向杀伤实验 (redirectedcytotoxicityassay ,RCA)观察CD2 2 6单克隆抗体对NK细胞克隆杀伤作用的影响 ,并用ELISA方法检测杀伤相培养上清中细胞因子水平的动态变化。结果 :获得 1株NK细胞克隆。在重导向杀伤实验中 ,CD2 2 6单克隆抗体能明显提高NK细胞克隆的杀伤水平 ;促进NK细胞克隆IFN γ和GM CSF的分泌。结论 :CD2 2 6是一种新的NK细胞活化性受体 ,IFN γ和GM CSF水平升高可能与NK细胞克隆功能有关。

妊娠高血压综合征患者血清对内皮细胞表达CD226的影响

目的 :探讨妊娠高血压综合征患者血清对体外培养的内皮细胞表达CD2 2 6的影响。方法 :PIHS患者血清与血管内皮细胞进行共培养 ,用间接免疫荧光法进行标记 ,用流式细胞仪检测受刺激后血管内皮细胞上CD2 2 6的表达。结果 :PIHS组患者和正常孕妇血清刺激的血管内皮细胞表达CD2 2 6的百分率分别为 15 .5 1%和 7.15 % ,PIHS患者组显著高于对照组 (P <0 .0 0 1)。结论 :PIHS患者血清具有刺激血管内皮细胞表达CD2 2 6的作用 ,提示PIHS患者血清中可能存在某些细胞因子能诱导内皮细胞合成CD2 2 6 ,由此进一步提示CD2 2 6可能参与PIHS发生的病理生理作用。

人CD226基因SNP和启动子序列分析

目的 研究人CD2 2 6 (PTA1)启动子及其 5’上游调控序列。方法 应用计算机软件预测启动子序列 ,并分析人CD2 2 6基因 5’上游调控序列以及通过RT -PCR的方法研究开放读框中的单核苷酸多态性。结果 CD2 2 6基因在 -375bp处和 - 130bp处可能有两个启动子 ,含有AP - 1、Ets- 1、Sp1、P30 0、PU .1、PEA3等转录因子结合序列 ,在编码胞浆区的序列中存在一个单核苷酸多态性位点。结论 CD2 2 6基因表达受到多种转录因子和 5’端上游调控序列的调控。

小鼠CD226(PTA1)的基因克隆及其异型

目的 :克隆小鼠CD2 2 6 (PTA1)分子。方法 :从GenBank中检索出与人CD2 2 6分子在氨基酸水平上有 5 1%同源性的EST序列 ,设计并合成特异性引物 ,采用快速扩增cDNA末端的RACE方法 ,从 4周龄BALB c小鼠的胸腺中扩增小鼠CD2 2 6cDNA序列。结果 :克隆出完整的小鼠CD2 2 6cDNA ,长 2 2 2 3bp ,其中开放读框为 10 0 2bp ,编码含信号肽在内的 333个氨基酸 ,属免疫球蛋白超家族分子 ,较人CD2 2 6分子少了 3个氨基酸 ,在氨基酸水平上有 5 3%的同源性。此外 ,还克隆了小鼠CD2 2 6分子的 3种异型。结论 :成功克隆出小鼠CD2 2 6 (PTA1)cDNA ,并发现 3种异型 ,全面探讨该分子生物学特性 ,进行体内功能实验 ,基因敲除小鼠和转基因小鼠的研究提供了坚实的基础。

超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节

目的研究超抗原对NK细胞CD226分子表达与功能的调节。方法以超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A/B(SEA/B)活化PBMC为模型,应用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析,观察CD226分子在NK细胞上的变化;采用51Cr释放实验,观察NK细胞在超抗原作用下杀伤功能的改变;利用激光共聚焦显微镜,观察CD226分子在NK细胞杀伤相的分布。结果在静止PBMC中,CD56+NK细胞的百分率为12.3%,CD56+CD226+细胞仅为1.4%。当效靶比为5∶1时,NK细胞对K562细胞的杀伤率为(3.2±0.2)%。当0.1mg/LSEA或SEB刺激PBMC1d后,CD56+NK细胞的百分率分别为13.5%和14.1%,CD226在NK细胞上的表达水平明显升高,且主要表达在CD56dim细胞上。在刺激第2天,SEA组CD56+CD226+占CD56+细胞69.1%,SEB组CD56+CD226+占CD56+细胞64.3%。刺激第3天,CD226在NK细胞上的表达水平均较第2天明显下降。在超抗原0.1mg/L作用3d中,SEA组和SEB组NK细胞杀伤率均明显高于同期未刺激组NK细胞的杀伤率及新鲜分离NK细胞的杀伤率(P<0.05),在作用的第2天,SEA组和SEB组杀伤率均达到峰值分别为(82.3±6.9)%和(80.6±7.5)%。激光共聚焦结果显示,CD226分子与LFA-1分子共定位于NK细胞与K562细胞的接触部位。结论超抗原SEA和SEB可提高NK细胞杀伤活性,可能与其促进CD226分子在NK细胞上的表达相关,CD226分子可能参与NK细胞免疫突触的形成。

CD226在NK细胞亚群上表达规律与功能关系的研究

目的 :观察CD2 2 6分子在NK细胞亚群上的分布和其他NK细胞活化性受体和抑制性受体的共存规律 ,及与NK细胞功能的关系。方法 :分别以IL 2或IL 15刺激PBMC和MLC细胞为模型 ,采用双重免疫荧光染色和流式细胞术分析 ,观察CD2 2 6分子在CD5 6 bright和CD5 6 dim NK细胞亚群上的表达 ,及与NK细胞活化性受体CD16和抑制性受体NKG2A的共存关系 ,同时用ELISA方法检测培养上清中IFN γ的水平。用 4小时51 Cr释放试实验检测NK细胞杀伤水平。结果 :在PBMC中 ,CD2 2 6主要分布于CD5 6 dim亚群 ,在IL 2作用下 ,CD2 2 6主要分布于CD5 6 bright亚群 ,而在IL 15作用下 ,NKG2A+ CD2 2 6 + 双阳性细胞明显增加。在MLC活化的NK细胞中 ,CD2 2 6主要分布于CD5 6 dim亚群 ,在IL 15作用下 ,CD2 2 6主要分布于CD5 6 bright亚群 ,IL 2和IL 15都能促进CD16 + CD2 2 6 + 和NKG2A+ CD2 2 6 + 双阳性细胞的增殖。IL 2和IL 15能明显提高PBMC培养上清中IFN γ的水平 ,并能促进PBMC和MLC中NK细胞的杀伤活性。结论 :CD2 2 6主要分布于活化NK细胞CD5 6 bright亚群上 ,其表达水平及与CD16及NKG2A共存关系可能受不同细胞因子调节并与NK细胞功能相关。

PTA1/CD226亚家族的研究进展

免疫球蛋白超家族(IgSF)成员占细胞黏附分子(CAM)的一大部分,通过识别细胞表面相应的配体或受体,发挥多方面的免疫学功能。现就一组同源IgSF新成员,包括血小板/T细胞活化抗原1(PTA1/DNAM-1/CD226)和CD96(Tactile)两个受体及其两个配体脊髓灰质炎病毒受体(PVR/CD155)和单纯疱疹病毒受体(nectin-2/CD112)的结构、相互作用、免疫学功能以及与临床的关系作一综述。

CD226对CD4^+T细胞调节作用的研究进展

CD226为表达于NK细胞、T细胞、单核细胞等多种免疫细胞膜上的一种Ⅰ型跨膜糖蛋白,与配体CD112或CD155结合后,通过介导多种免疫细胞的分化、增殖和功能调节来参与机体多项生理和病理活动。本文围绕CD226对于CD4+T细胞的免疫调控作用和参与疾病进程的研究进展展开综述,重点阐明CD226参与初始CD4+T细胞增殖分化、Th1/Th2/Th17细胞极化过程和对调节性T细胞的调控作用。

人滤泡辅助性T细胞(Tfh)上CD226分子的表达格局

目的:用免疫荧光染色和流式细胞术(FCM)分析鉴定人滤泡辅助性T(Tfh)细胞,对外周血和扁桃体来源的Tfh上CD226分子的表达格局进行研究,采用免疫组化染色的方法,检测异位淋巴组织来源的生发中心中CD226分子的表达情况。方法:采用密度梯度离心法分离人外周血PBMC;扁桃腺经研磨、200目滤网过滤获取扁桃腺细胞,对两种细胞采用不同荧光素标记的抗CXCR5、CD4及CD226抗体进行染色和FCM分析。常规制备类风湿性关节炎(RA)关节滑膜活检组织石蜡切片,采用免疫组化的方法分析CD226分子的表达格局。结果:外周血及扁桃腺Tfh细胞上可以检测到CD226分子,外周血Tfh上CD226阳性率为(91.88±0.52%),MFI值为201.49±6.2;扁桃腺Tfh上CD226表达阳性率为(90.81±0.69%),MFI值为230.81±8.4,表达密度稍高于其他CD4+T细胞。RA患者关节滑膜组织可以观察到异位生发中心(GC),并检测到CD226分子的表达。结论:健康人外周血、扁桃腺及RA患者关节滑膜组织中存在不同比例的Tfh细胞,其膜上CD226分子的表达具有独特的格局,该结果为进一步研究其功能提供了思路。

CD226在再生障碍性贫血患者T淋巴细胞上的表达及其与血清中相关细胞因子浓度的关系

目的:研究CD226在再生障碍性贫血(简称再障,AA)患者外周血T淋巴细胞亚群上的表达率及其与血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10浓度的关系,以探讨其在AA发病机制中的作用。方法:60例AA患者和30例正常对照者外周血单个核细胞,四色荧光标记的单克隆抗体染色,利用流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群上CD226的表达率;用ELISA法检测血清中IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的浓度。结果:重型再障(SAA)和非重型再障(NSAA)患者CD3+、CD3+CD4+和CD3+CD8+T淋巴细胞上CD226的表达率与正常对照组相比均差异有统计学意义(均P<0.05),尤其SAA患者CD3+、CD3+CD8+T淋巴细胞上CD226表达率显著性高于正常对照组(P<0.01),而SAA与NSAA之间差异无统计学意义。SAA和NSAA患者血清中IL-2、IFN-γ水平与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);IL-4、IL-10水平与正常对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。AA患者CD3+T淋巴细胞上CD226表达率与血清中IL-2、IFN-γ水平呈正相关(r值分别为0.129、0.200);与IL-4、IL-10水平呈负相关(r值分别为-0.095、-0.147)。结论:AA的发病不仅与T细胞功能紊乱及其分泌的Th1型细胞因子增高有关,还与Th2型细胞因子相对不足有关。AA患者T淋巴细胞的异常活化需要CD226的参与,CD226异常高表达可能与AA的免疫发病有关。

检测可溶型CD226双mAb夹心ELISA的建立及初步应用

目的 :建立一种检测可溶型CD2 2 6 (sCD2 2 6 )的双mAb夹心ELISA ,并用于临床标本的检测。方法 :确定包被mAbLeoA1和HRP mAbFMU3的最佳工作浓度及最佳稀释液后 ,建立双mAb夹心ELISA ,并对方法的特异性、敏感性和稳定性进行鉴定。再以建立的方法检测临床标本。结果 :包被mAbLeoA1的最佳工作浓度为 2 .5mg/L ,HRP mAbFMU3的最佳工作浓度 1∶4 0 0 ,标准品及HRP mAb的最佳稀释液分别为 1g/LBSA 1mL/LTween2 0 PBS和 30 g/LPEG PBS .建立的双mAb夹心ELISA ,其特异性 (与人IgG无交叉反应 ,阻断实验中阻断效应呈剂量依赖性 )、敏感性 (检出下限为 110ng/L标准品CD2 2 6 /Fc融合蛋白 )及稳定性 (CV <10 .2 % )均较良好。对部分临床标本的检测中 ,发现 6例类风湿关节炎(RA)患者血清sCD2 2 6的水平升高 ,与正常人血清sCD2 2 6水平相比差异显著 (P <0 .0 1)。结论 :建立一种特异性高、重复性好、较敏感的检测sCD2 2 6的双mAb夹心ELISA 。