CD_(25)/IL-2Ra在人肝组织毛细胆管上的表达

目的观察CD25/IL-2Ra在人肝毛细胆管上的表达,以利于肝毛细胆管分布、形态的观察。方法引用免疫组化方法观察CD25/IL-2Ra分子在人肝毛细胆管上的表达,并设立阳性对照(扁桃体)和CD4、CD8之间的片间对照。通过免疫荧光法观察CD25/IL-2Ra在肝毛细胆管上的表达,结果与免疫组化相一致。通过阻断试验进一步确认肝毛细胆管上CD25/IL-2Ra分子表达的特异性。通过与国际公认的CEA(多克隆抗体)作对照,进一步确认CD25/IL-2Ra是一种优良的肝毛细胆管标记物。结果常规免疫组化方法DAB显色CD25/IL-2Ra标记的毛细胆管显棕黄色条索状结构,显示结果比国际公认的CEA更佳,免疫荧光呈索状绿色荧光表达,阻断试验进一步确认肝毛细胆管上CD25/IL-2Ra分子的存在。结论免疫组化、免疫荧光法检测CD25/IL-2Ra表达来观察肝脏毛细胆管的分布、形态等,具有明确的特异性。

RA患者治疗前后血清IL-2、TNF-α和CD检测的临床意义

IL-2主要由TH细胞在抗原或丝裂原刺激下和IL-1诱导下分泌的一种15KD糖蛋白，在机体的免疫应答和调节中起着重要的作用。TNF-α是一种由活化单核细胞产生活化作用广泛的细胞因子。胞苷脱氨酶（CD）水平在早期感染的类风湿性关节炎（RA）患者中有明显的升高。

人外周血CD4^+ CD25^+调节性T细胞的分离、鉴定和功能特征

目的:分离人外周血CD4+CD25+Treg细胞,并检测其功能。方法:RT-PCR技术检测CD4+CD25+Treg细胞中Foxp3的mRNA表达;与CD8+T细胞和CD4+CD25-T细胞共同培养,或加入外源性IL-2及IL-4,检测其抑制功能;流式细胞术检测IFN-γ、IL-4和IL-10。结果:CD4+CD25+Treg细胞高表达Foxp3,主要分泌IL-10,能够抑制CD8+T细胞和CD4+CD25-T细胞的增殖,高浓度IL-2能够阻断CD4+CD25+Treg细胞的抑制功能。结论:CD4+CD25+Treg细胞是一群具有免疫抑制功能的调节性T细胞,这种抑制作用能够被高浓度IL-2阻断。

CD4^+CD25^+调节性T细胞的研究进展

CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)具有维持自身免疫耐受和调节免疫应答的功能,其功能紊乱或数目下降是导致自身免疫性疾病的重要原因之一。近年来,研究发现Foxp3在调控CD4+CD25+Treg细胞的发育和功能上起着重要作用。本文就CD4+CD25+Treg细胞的免疫抑制机制、Foxp3在其发育和功能上的作用、IL-2和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)等对其产生、维持及活化的作用等方面作一综述。

CD4^+ CD25^+ Foxp3^+调节性T细胞在霍奇金淋巴瘤中的研究进展

1995年,SAKAGUCHI等[1]发现在正常人和小鼠外周血及脾脏组织的CD4＋T细胞中有一持续高表达CD25分子（IL-2受体a链）的亚群,去除该类细胞可诱导各种自身免疫性疾病的发生，反之，

CD25在急性B淋巴细胞白血病中的表达及其临床意义探讨

本研究旨在通过流式细胞术标记CD25,探讨其与急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的关系及其临床意义。选择88例初发B-ALL患者骨髓,应用流式细胞术检测免疫表型标记,包括白介素2受体α链(CD25)、β链(CD122)、γ链(CD132),CD19、CD20、CD10、CD34、CDIgM、CD79a、CD22、CDTDT;用定性PCR方法检测BCR/ABL融合基因表达,实时定量PCR检测IL2RA(CD25基因)的表达。结果表明,CD25+和CD25-的B-ALL患者白细胞计数(WBC)、血红蛋白(Hb)、血小板(Plt)、骨髓原始细胞比例(marrow blast%)、外周血原始细胞比例(peripheral blast%)、肝脾和淋巴结肿大、CD10、CD20、CD22、CD34、CD79a、CDTDT、CDIgM表达水平差别均无统计学意义(P>0.05),而CD19在CD25+组中表达水平高于CD25-组(P<0.05)。本组BCR/ABL+患者为21例(23.9%,21/88),CD25+表达率为66.7%(14/21);BCR/ABL-患者为67例,CD25+表达率为4.5%(3/67),两组间差别有统计学意义(P<0.05)。IL2RA基因mRNA表达水平在CD25+和CD25-两组间无统计学差异(P>0.05)。21例BCR/ABL+B-ALL患者中,CD25+与CD25-两组间在缓解率和复发率方面差异无统计学意义(P>0.05)。BCR/ABL+B-ALL患者中有8例复发,复发率为38.1%(8/21),BCR/ABL-组有9例复发,复发率为13.4%(9/67),两组间差异有统计学意义(P<0.05)。BCR/ABL+组无复发生存时间(relapse-free survival,RFS)为21个月,BCR/ABL+CD25+患者RFS时间为15个月,而BCR/ABL+CD25-患者RFS时间为21个月,BCR/ABLCD25-患者RFS时间为24个月。结论:CD25在BCR/ABL+B-ALL患者中呈高水平表达,可以作为B-ALL的BCR/ABL融合基因表达的预测指标,与疾病复发有关,CD25+可以作为判断B-ALL不良预后的辅助标志。

中药有效成分Nordosin增强FK506体外抑制淋巴细胞IL-2分泌作用的研究

目的:观察中药有效成分Nordosin对FK506体外抑制致炎细胞因子作用的影响,探讨Nordosin在移植免疫领域存在的潜在应用价值。方法:建立ConA激活小鼠脾淋巴细胞增殖模型,采用ELISA和RT-PCR方法,测定Nordosin与FK506联合应用对淋巴细胞的IL-2蛋白和mRNA表达的影响;同时,运用流式细胞检测T淋巴细胞CD25+表达的变化。结果:Nordosin与FK506联合用药可以抑制小鼠脾淋巴细胞的IL-2分泌(P<0.01),IL-2 mRNA表达以及T淋巴细胞CD25+表达也显著降低(P<0.01),其作用强于单独使用FK506组(P<0.01)。结论:Nordosin可以增强FK506抑制体外淋巴细胞IL-2分泌及其受体表达的作用,Nordosin可望成为一种免疫抑制辅助用药。

IL-2及T淋巴细胞亚群变化对连续性血液净化治疗的指导意义

连续性血液净化（CBP）广泛应用于治疗各种危重症疾病如多器官功能不全综合征（MODS）、急性重症胰腺炎、全身炎症反应综合征（SIRS）及脓毒症（SEPSIS）等,并取得了显著疗效。CBP包括连续静静脉血液滤过（CVVH）、

IL-2调控慢性丙型肝炎患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞的抑制效应

目的探讨慢性丙型肝炎患者外周血中HCV特异性CD4+CD25+调节性T细胞的抑制活性以及外源性IL-2对CD4+CD25+Treg细胞抑制效应的影响。方法采用免疫磁珠分选18例慢性丙型肝炎患者与15例正常人外周血中CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25-T细胞,在此两种细胞共同培养体系中加入不同浓度外源性IL-2和IL-4,检测CD4+CD25+T细胞的抑制能力以及对HCV特异性CD4+T细胞的影响。结果与正常对照相比,慢性丙型肝炎患者的CD4+CD25+Treg细胞的抑制增殖活性高(P=0.034);CD4+CD25+Treg细胞显著抑制HCV特异性CD4+T细胞的增殖;当IL-2浓度为2 000 U/ml时,能够显著改变CD4+CD25+Treg细胞的低增殖能力,而且IL-2与IL-4的共同作用改变更明显,其中高浓度的IL-2能够阻断CD4+CD25+Treg细胞对CD4+CD25-T细胞的抑制功能。结论慢性丙型肝炎患者外周血中CD4+CD25+Treg细胞的抑制活性增强,高浓度IL-2可阻断CD4+CD25+Treg细胞的抑制效应。

T细胞膜脂肪微区域与白细胞介素-2α受体

目的 :确定T细胞膜脂肪微区域 (lipidrafts )是IL 2Rα的功能性区域。 方法 :应用流式细胞仪检测T细胞表面分子CD2 5 (IL 2Rα)的表达 ,分离T细胞膜脂肪微区域 ,应用蛋白质印迹法检测分析IL 2Rα所在的T细胞膜脂肪微区域分离组分。 结果 :在IL 2刺激下 ,T细胞膜表面分子CD2 5 (IL 2Rα)阳性表达率为 37.0 8% ,蛋白质印迹法检测确定IL 2Rα存在于脂肪微区域组分。 结论 :T细胞膜脂肪微区域是IL 2Rα的功能性区域。

CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞通过NKG2D增强急性髓性白血病中NK细胞毒性

目的CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞在急性髓性白血病中调控NKG2D介导NK细胞毒性的研究。方法免疫磁珠法分离急性髓性白血病(AML)和健康对照外周血NK细胞和CD4^(+)CD25^(+)细胞,分析foxp3与NKG2D表达,CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例与NK细胞的细胞毒作用相关性。Spearman法分析CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞比例与NK细胞的细胞毒性和NGK2D相关性。foxp3过表达处理AML外周血淋巴细胞后,流式细胞术检测NKG2D,IFN-γ和CD107a表达,LDH法检测NK细胞毒性。GEPIA2数据库分析AML患者NKG2D和foxp3基因表达相关性,TCGA数据库分析AML转录组数据中与NKG2D表达高相关性基因。IL-2(10μg/mL),IL-15(10μg/mL)处理NK细胞24 h后,流式细胞术检测NKG2D和CD107a表达,酶联免疫反应法检测NK细胞分泌的IFN-γ,LDH法检测NK细胞毒性。采用t检验等方法统计分析组间差异及变量相关性。结果与对照比较,AML组NK细胞中NKG2D表达(平均荧光强度MFI:942.25±117.17比3245.28±367.43)降低(P<0.001)。foxp3表达与NKG2D呈正相关性(r=0.590,P<0.001),NKG2D表达百分数与外周血淋巴细胞中CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例呈正相关(r=0.708,P=0.002),AML患者外周血NK细胞活力也与CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)细胞的比例呈正相关(r=0.655,P=0.006)。与OE-NC比较,OE-foxp3组细胞中NKG2D的表达水平(MFI:2115.37±269.53比914.28±103.36)、杀伤能力(58.24%±3.17%比24.18%±2.35%)、NK细胞毒性评估指标CD107a(45.43%±1.28%比18.24%±1.49%)和IFN-γ水平(24.16%±1.17%比16.28%±0.95%)升高(P均<0.001)。TCGA数据分析发现,NKG2D表达与CD3G、IL-3、IL-2、CD3E、IL-10、IL-17、IL-7R、IL-15、EZH2等基因相关性较高,流式细胞术检测发现,与对照比较,IL-2和IL-15处理后NK细胞的表面受体NKG2D和CD107a表达、IFN-γ水平、NK细胞毒性均升高。结论AML外周血中,NK细胞表面受体NKG2D低于正常对照,其中CD4^(+)CD25^(+)foxp3^(+)调节性T细胞通过IL-2和IL-15影响NKG2D表达进而调控NK细胞毒性。

CD25含量与T辅助细胞对IL-2的促增殖反应性

目的研究不同激活状态下T辅助细胞（Th）中IL－2R各亚基的表达变化及对IL-2反应的相关性。方法以包被的抗CD3抗体激活Thl细胞，同时设立未激活对照。’H掺入法测定其对IL-2的促增殖反应；real－timePCR检测IL-2R各亚基编码基因的表达；流式细胞术检测CD25及CDl22的含量；以I125标记的IL-2检测不同状态的Thl细胞对IL-2的亲和力。脂质体法转染IL-2RotsiRNA至激活的Thl细胞，比较不同CD25含量时Thl细胞对IL-2的反应性。自小鼠体内分离CD4细胞，以抗CD3抗体激活后在不同时间点收集细胞，比较它们的CD25含量及对IL-2的反应性。结果较未激活对照相比，激活的Thl细胞中IL-2Rα亚基，即CD25的表达显著增加，而其他两个亚基则无变化；同时伴有对IL－2亲和力的升高，但对IL-2的促增殖反应性却显著降低。以siRNA适当下调IL-2Rα基因的表达则可显著提高激活的Thl细胞对IL-2的反应性。虽然激活后的naiveCIM细胞对IL-2的反应性明显增加，但却不与CD25的含量及激活度正相关。最高的IL-2反应性出现在低度激活的CD4细胞中。结论CD25在激活后的Th细胞中显著增多，并可通过自身数量的变化来调节所在细胞对IL-2的促增殖反应性。适度高表达的CD25可使靶细胞具有最高的IL-2反应性，过度表达的CD25则可导致对IL－2反应性的降低。

肺癌患者外周血Treg细胞与IL-10、TGF-β检测及其临床意义

目的测定肺癌患者外周血中CD_4^+CD_(25)^+FoxP3^+Treg细胞、CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β的表达水平,并分析它们之间的相关性。方法采用流式细胞术检测73例肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)Treg细胞表达水平,采用酶联免疫吸附反应检测IL-10及TGF-β值,并与19例健康人进行比较。结果肺癌患者外周血CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞、CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)Treg细胞、IL-10及TGF-β表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞及CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)Treg细胞成正相关(P<0.05)。CD+4CD+25Fox P3+Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P<0.05)。CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)Treg细胞与IL-10、TGF-β成正相关(P<0.05)。结论CD_4^+CD_(25)^+FoxP3^+Treg、CD_4^+CD_(25)^(hi)CD_(127)^(low)这两种标记方法都是检测Treg细胞的可靠方式,Treg细胞、IL-10、TGF-β参与了肺癌患者肿瘤微环境的构成,是导致肺癌免疫功能抑制的原因之一,检测其水平变化可作为评估肺癌患者免疫功能的可靠指标。

CD^＋CD25^＋调节性T细胞扩增方法的研究进展

CD^＋CD25^＋调节性T细胞是具有免疫无能性和免疫抑制性两大功能特征的抑制性T细胞亚群，是维持机体外周免疫耐受的重要组成部分。其在防止自身免疫性疾病发生、诱导移植免疫耐受、维持母胎免疫耐受及调节肿瘤免疫等方面都起着重要作用。由于CD^＋CD25^＋调节性T细胞在体内含量较少，且在体外扩增困难，使得对其特征与功能的研究以及其在临床上的应用潜力都受到极大限制。本文对近年来体内和体外实验诱导CD^＋CD25^＋调节性T细胞扩增的研究进展作一综述。

WuTac与CD25抗原结合的饱和度及其对健康人外周血淋巴细胞亚群的影响

目的动态监测鼠抗人T淋巴细胞CD25抗原单克隆抗体(WuTac)在健康人中与CD25抗原结合的饱和度及其对外周血淋巴细胞亚群的影响,评价WuTac临床应用的安全性,并预测其有效性。方法静脉恒速滴注WuTac0.05、0.1、0.2mg/kg,在用药前和停药后的1、24和72h经肘静脉采血,通过流式细胞术动态监测T淋巴细胞亚群及与CD25抗原结合的饱和度。结果不同剂量组的T淋巴细胞亚群用药前后差异均无统计学意义;停药后1h开始,CD25+淋巴细胞的比例明显降低,且一直持续至停药后72h,CD25+淋巴细胞的比例均明显低于用药前。不同剂量组的CD25抗原的饱和度均达96%以上。结论WuTac单抗用药后,对健康人T淋巴细胞亚群均无影响,能迅速与CD25高效结合,持续时间72h以上,为其Ⅱ、Ⅲ期临床研究奠定了基础。

八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖及其活化影响

目的:研究八珍汤对TGF-β1抑制下人T淋巴细胞的增殖及活化的影响。方法:以正常人外周血来源的T淋巴细胞为研究对象,设对照组、PHA组、PHA+八珍汤组、PHA+TGF-β1组、PHA+TGF-β1组+八珍汤组。以MTT法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞术(FCM)检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞活化的影响及对CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的数量的影响;ELISA法检测八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2的影响。结果:八珍汤可以使TGF-β1抑制的T淋巴细胞的增殖率回升(P<0.01),但仍低于对照组(P<0.01),并随TGF-β1作用时间的延长,恢复难度增加。八珍汤可以使T淋巴细胞活化率增加,TGF-β1+八珍汤组与TGF-β1组的活化标志CD69表达有统计学差异(P<0.01);八珍汤能使CD4+CD25+调节性T淋巴细胞的比例降低(P<0.01);能使T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2的能力恢复(P<0.01),但都未能恢复到TGF-β1抑制前的水平,明显低于PHA组水平(P<0.01)。结论:八珍汤对TGF-β1抑制的T淋巴细胞增殖率、T淋巴细胞的活化、CD4+CD25+调节性T细胞比例、IFN-γ、IL-2的分泌水平都有一定的恢复作用。

雷公藤甲素对小鼠淋巴细胞体外活化的抑制作用

目的研究雷公藤甲素(TRD)对小鼠T淋巴细胞活化标志CD69、CD25及细胞因子IL2及IFNγmRNA表达的影响,为阐明其免疫抑制作用提供分子药理学依据。方法无菌分离小鼠淋巴结细胞,加入不同浓度的雷公藤甲素预先孵育1h,用多克隆刺激剂刀豆蛋白(ConA)刺激T细胞活化,利用荧光标记的单克隆体双染技术,流式细胞仪检测TRD对小鼠T细胞CD69、CD25表达的影响;采用半定量RTPCR技术从mRNA水平检测TRD对细胞因子IL2、IFNγmRNA的表达的影响。结果TRD能抑制T细胞早期活化标志CD69和CD25,同时TRD也能抑制IL2及IFNγmRNA的表达。结论TRD对T细胞早期活化分子及细胞因子表达的抑制作用可能是其发挥免疫抑制作用的机制之一。

天然调节性T细胞的调节因素研究进展

天然CD4+CD25+调节T细胞来源于胸腺,通过直接接触机制抑制效应细胞的增殖,调节自身免疫和移植免疫。本文主要综述了影响天然调节T细胞分化、发育和功能的主要因素和可能机制。Foxp3是Treg的标志,检测其表达可以作为判定Treg的方法。IL-2主要通过IL-2Rα及STAT5途径促进Treg的增殖活化。膜型和分泌型TGF-β具有不同功能,膜型TGF-β1可能主要介导Treg的抑制功能,而分泌型TGF-β可能主要促进Treg的增殖。树突状细胞由于作用途径不同,对Treg既有正调节,也有负调节。CTLA-4途径可能通过作用于Treg自身、DC或效应细胞直接或间接地调节Treg的功能。