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人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
1
作者
王成伟
潘新宇
+3 位作者
冯永堂
辛宁
鞠吉雨
苗乃法
《潍坊医学院学报》
2009年第1期26-28,I0002,共4页
目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)...
目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)-CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB/C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a(+)-CD252的阳性菌株。转化有pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31.0~42.7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37 ℃、IPTG浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1:3200。结论pET32a(+)-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。
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关键词
cd252
融合蛋白
纯化
单克隆抗体
免疫原性
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职称材料
题名
人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
1
作者
王成伟
潘新宇
冯永堂
辛宁
鞠吉雨
苗乃法
机构
潍坊医学院免疫学教研室山东省高校免疫学重点实验室
出处
《潍坊医学院学报》
2009年第1期26-28,I0002,共4页
文摘
目的优化表达含人类CD252胞外段的融合蛋白,纯化目的蛋白,为单克隆抗体的制备打下良好的基础。方法将测序正确的pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒转入表达菌株BL21感受态细菌中,用SDS-PAGE电泳鉴定重组菌的诱导表达情况,通过改变pET32a(+)-CD252阳性菌株的诱导时间、温度,以优化出最佳表达条件。采用包涵体纯化法纯化目的蛋白。用纯化的重组蛋白免疫BalB/C小鼠,采用ELISA法测定血清中抗体效价。结果成功获得表达pET32a(+)-CD252的阳性菌株。转化有pET32a(+)-CD252胞外段重组质粒的表达菌经IPTG诱导后,在蛋白分子量标准的31.0~42.7kD之间出现了新的蛋白条带,新的蛋白主要存在于包涵体中。优化表达条件分析表明,在诱导4h、温度37 ℃、IPTG浓度为1.0mmol/L时,融合蛋白的表达量最高。包涵体洗涤纯化后,经SDS-PAGE电泳证明可得到较纯的目的蛋白。免疫小鼠后测得的平均抗体效价为1:3200。结论pET32a(+)-CD252胞外段原核表达载体能够表达CD252蛋白,并获取了目的蛋白的优化表达条件,表达蛋白具有良好的免疫原性。
关键词
cd252
融合蛋白
纯化
单克隆抗体
免疫原性
Keywords
cd252
Fusion protein
Purification
Monoclonal antibody
Immunogenicity
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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1
人类CD252基因片段在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性分析
王成伟
潘新宇
冯永堂
辛宁
鞠吉雨
苗乃法
《潍坊医学院学报》
2009
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