重症肌无力患者外周血具有CD27和CD38表型的B细胞亚群表达变化

目的探讨重症肌无力患者外周血具有CD27和CD38表型的B细胞亚群表达变化。方法观察对象均为2016年1月至2018年12月住院治疗的重症肌无力患者共43例,采用流式细胞术和三色荧光标记法检测其外周血CD27^+CD38^-、CD27^+CD38^+、CD27^-CD38^+和CD27^-CD38^-B细胞表达变化。结果与正常对照者相比,重症肌无力患者外周血CD27^+CD38^-和CD27^+CD38^+B细胞比例升高(P=0.000,0.000)、CD27^-CD38^+B细胞比例降低(P=0.001)。其中,外周血CD27^+CD38^-B细胞比例,全身型高于眼肌型(P=0.031);CD27^-CD38^+B细胞比例,合并胸腺瘤者低于无胸腺异常者(P=0.026);CD27^+CD38^-和CD27^+CD38^+B细胞比例,肌无力危象者高于非肌无力危象者(P=0.017,0.011)。经甲泼尼龙冲击治疗后,QMGS评分减少(P=0.012)、外周血CD27^+CD38^+B细胞比例降低(P=0.034)、CD27^-CD38^+B细胞比例升高(P=0.006);Spearman秩相关分析,QMGS评分与外周血CD27^+CD38^-B细胞比例呈正相关(rs=0.394,P=0.009)。结论重症肌无力患者外周血中存在具有CD27和CD38表型的B细胞亚群,其表达变化与疾病严重程度相关,提示不同表型的B细胞亚群可能在重症肌无力的免疫机制和疾病进程中发挥不同作用。

CD19和CD27标记系统性红斑狼疮患者外周血B细胞的亚群分析

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)外周血中B淋巴细胞亚群的分化状态及其与体液免疫的关系。方法选择SLE患者32例,SLEDAI分为≥10分组和<10分组;健康献血者14例作为对照。采用流式细胞仪检测研究对象外周血中CD19+CD27-、CD19+CD27+和CD19+CD27++细胞,并分析各亚群比例、CD19平均荧光强度的差异和体液免疫的关系。结果两组SLE患者与正常对照相比,CD19平均荧光强度明显降低。SLEDAI≥10分组的CD19+CD27++细胞比率较正常对照明显升高。SLEDAI<10分组的CD19+CD27-细胞较正常对照明显升高,CD19+CD27+细胞明显降低。IgG与浆母细胞比率呈正相关。CD19+CD27++细胞比率在抗dsDNA抗体阳性组较阴性组明显升高。结论SLE患者外周血CD19+CD27+及CD19+CD27++亚群存在异常,可能与SLE患者体内的体液免疫异常有关,并在其中发挥重要作用。

CD27抗原在多发性骨髓瘤诊断中的价值

目的:探讨CD27抗原在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)中的表达及其在临床诊断中的价值,以及CD27抗原与患者的临床特征及遗传学异常的相关性。方法:采用8色流式细胞术(FCM)检测123例M M患者骨髓细胞免疫表型,以51例正常的或反应性浆细胞增生患者作为对照。抗体组合包括ckappa-FITC/clambda-PE/CD38-ECD/CD45-PERCP/CD19-PC7/CD27-APC/CD138-BV421/CD56-BV510,采用CD138/CD38设门出浆细胞群后进一步分析CD56、CD19、ckappa、clambda以及CD45的表达,区分异常浆细胞和正常的或反应性浆细胞后,进一步分析CD27的表达率和平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI),阳性率判断标准:≥20%为阳性。同时分析107例MM患者的实验室检查资料并采用荧光原位杂交(FISH)技术检测34例患者1q21扩增、13q14缺失、p53缺失、IGH重排,比较CD27^-M M患者与CD27^+M M患者的临床特征及遗传学异常特点。结果:MM患者中异常浆细胞的CD27^+率为48%(59/123),MFI为31.3±35.6;而正常的或反应性浆细胞CD27^+率为100%(51/51),MFI为93.7±6.3。MM患者中异常浆细胞CD27^+率及MFI明显低于正常的或浆细胞反应性增生的患者(P<0.001)。对58例CD27-和49例CD27^+M M患者进行实验室检查发现,反映疾病进展指标如血红蛋白、白蛋白、血清钙、血肌酐及预后相关因素β2-微球蛋白、LDH水平两组比较均无明显差异(P<0.05)。同时17例CD27-及17例CD27^+M M患者的1q21扩增、13q14缺失、p53缺失、IGH重排结果亦无显著差异(P<0.05)。结论:CD27^-或弱表达高度提示为MM。采用8色流式细胞术,能为良恶性浆细胞疾病的诊断和鉴别诊断提供可靠依据。

CD27和CD28在肺结核病人抗原特异性CD4＋T细胞中的表达分析

目的 研究肺结核病人与健康人外周血结核抗原特异性CD4^＋T细胞中CD27和CD28的表达情况,了解不同分化程度T细胞在结核发病中的作用.方法 以荧光标记的抗CD4、CD154、CD27、CD28四种抗体共染色,用流式细胞仪检测肺结核病人和健康人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27和CD28的分布比例.通过对比分析,了解不同分化阶段CD4^＋T细胞在病人与健康人之间的分布差异.结果 特异性结核抗原刺激后,肺结核病人外周血CD4^＋ CD154^＋ T细胞中CD27^＋ CD28^＋（早期分化）、CD27^- CD28^＋ 和CD27^＋ CD28^-（中期分化）以及CD27^-CD28^-（晚期分化）T细胞的比例分别为（49.55±6.15）%、（26.85±3.87）%、（7.2±1.37）%和（16.35±3.97）%;而在健康人中这四群细胞的比例分别为（51.81 ±4.94）%、（29.83±5.33）%、（12.65±4.48）%和（5.7±2）%.结核病人与健康人以早期分化CD4^＋T细胞为主,在晚期分化CD4^＋T细胞比例上差异有统计学意义（t=2.26,P〈0.05）.结论 肺结核病人抗原特异性CD4^＋T细胞中晚期分化阶段细胞的比例显著高于健康人,提示抗原特异性CD4^＋T细胞的分化程度与结核病相关.

类风湿关节炎外周血CD19和CD27标记的B淋巴细胞亚群及其相关性研究

目的研究类风湿关节炎(RA)外周血中B淋巴细胞亚群(未活化B细胞、记忆性B细胞和浆母细胞)的分化状态及其与自身抗体和临床表现的关系。方法选择RA患者60例,根据临床表现和用药后的反应分为缓解期、活动期与难治型3组。健康献血者24名作为对照。采用流式细胞仪检测研究对象外周血中未活化B细胞(CD19^+CD27^-)、记忆性B细胞(CD19^+CD27^(dim))和浆母细胞(CD19^+CD27^(high))的比率,分析这3组B细胞亚群和CD19平均荧光强度与类风湿因子(RF)、抗Ⅱ型胶原(CⅡ)抗体和抗环瓜氨酸(CCP)抗体及临床表现的关系。结果①RA与正常对照比较未活化B细胞和浆母细胞明显升高,而记忆性B细胞明显下降(P＜0．05)；缓解组和难治组的未活化B细胞比率明显升高(P＜0．05),记忆性B细胞比率明显降低(P＜0．05)；活动组和难治组中的浆母细胞比率明显升高(P＜0．05)。②RA患者CD19平均荧光强度与血沉、C反应蛋白、日常生活能力呈正相关,浆母细胞亚群比率与关节肿胀指数正相关。③未活化B细胞、记忆性B细胞及浆母细胞亚群与RF、抗CⅡ抗体和抗CCP抗体无明显关系。结论RA患者外周血中存在着B细胞亚群的紊乱,以浆母细胞和未活化B细胞的比率升高,记忆性B细胞比率下降为特征,浆母细胞比率在活动性和难治性RA患者中明显升高且与关节肿胀指数正相关,B细胞在RA发病机制中发挥着重要作用。

炎症性肠病患者CD27～CD70共刺激途径的激活研究

目的探讨CD27CD70共刺激途径在炎症性肠病患者外周循环和肠黏膜中的表达，比较炎症性肠病患者CD27-CD70表达与正常对照者间的差异。方法共纳入62例克罗恩病（CD）、64例溃疡性结肠炎（UC）患者和56名正常对照者。应用酶联免疫吸附试验分析炎症性肠病患者和正常对照者血浆中CD27-CD70蛋白的表达；SYBR—green实时PCR法分析炎症性肠病患者和正常对照者外周血单个核细胞中CD27-CD70mRNA的表达；免疫组化法分析炎症性肠病患者和正常对照者肠黏膜组织CD27CDT0蛋白的表达。结果CD和UC患者血浆中CD27CD70的表达均显著高于正常对照者（P值均〈0．05）。ROC曲线的分析表明，CD27-CD70对区分CD患者和正常对照者以及区分UC患者和正常对照者具有显著的诊断价值（P值均〈0．05）。CD患者血浆中CD27和CD70水平与内镜下疾病活动性（EDAI）无关（r值分别=0．055和0．024，P值分别为0．678和0．852），且UC患者血浆中CD27和CD70水平与EDAI无关（r值分别-0．077和0．021，P值分别为0．547和0．869）。CD患者和UC患者外周血单个核细胞CD27和CD70mRNA表达均显著高于正常对照者外周血单个核细胞中mRNA的表达（P值均-0．000）。免疫组化实验表明CD患者和UC患者肠黏膜组织CD27和CD70的表达均显著高于正常对照者（P值均-0．000）。结论炎症性肠病患者血浆、外周血单个核细胞和肠黏膜中均存在CD27-CD70途径的激活，但血浆中CD27-CD70的水平不能反映内镜下疾病活动程度。选择性干预CD27CD70共刺激通路可能成为缓解或减轻炎症性肠病进程的有益尝试。

初治多发性骨髓瘤患者肿瘤细胞CD27表达与免疫状态和预后的相关性研究

目的:探讨CD27抗原在多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者骨髓瘤细胞上的表达及其临床诊断价值,以及CD27表达水平不同的患者在细胞遗传学异常、免疫细胞分群等方面是否存在差异。方法:检测124名MM患者骨髓瘤细胞的免疫表型,分析异常浆细胞CD27表达水平,以及外周血T细胞亚群、B细胞亚群与Th1/Th2/Th17细胞亚群表达水平,并检测患者是否存在t(14;16)、p53缺失、del(13q14.3)、IGH重排、t(4;14)、t(11;14)、del(13q14)等细胞遗传学异常。搜集124名患者临床资料,比较CD27+MM患者与CD27-MM患者之间的各项常用临床指标有无明显差异。筛选在院经过4个疗程化疗的57名患者进行疗效评价,分析CD27+MM患者与CD27-MM患者疗效评价有无差别,并对在院内接受治疗的所有患者随访,进行生存分析。结果:124名MM患者中,异常浆细胞CD27阳性率为29.03%(36/124)。对124名MM患者的临床基线资料进行分析,发现CD27+MM与CD27-MM患者淋巴细胞数、血肌酐、乳酸脱氢酶(LDH)、β2-微球蛋白水平有统计学差异。同时,两组患者的细胞遗传学结果显示,CD27+MM患者的IGH重排发生率(31.58%)小于CD27-MM患者(53.41%)。CD27+MM患者的R-ISS分层较CD27-MM患者整体偏低。免疫细胞分群结果显示,CD27+MM患者淋巴细胞B亚群中的CD19+B细胞水平较CD27-MM患者低,而淋巴细胞Th1/Th2/Th17亚群中的TNF-α水平与T亚群中的CD3+CD4+水平较CD27-MM患者高。CD27+MM患者经过4个疗程化疗后,完全缓解+非常好的部分缓解(CR+VGPR)率较CD27-MM患者高,且整体无进展生存时间(PFS)较长。结论:MM患者异常浆细胞上CD27低表达可能与患者疾病进展及预后不良有关。

脓毒症小鼠脾CD27和CD11b标记NK细胞亚群的变化

目的 评价脓毒症小鼠脾CD27和CD11b标记自然杀伤细胞（NK细胞）亚群的变化。方法 清洁级健康雄性C57BL/6小鼠168只，体重20～30 g，8～10周龄，采取随机数字表法分为2组（n＝84）：假手术组（Sham组）和脓毒症组（Sep组）。采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症模型。每组取小鼠30只，观察术后4 d内存活情况，计算生存率。于术后2、4、6、24、48和72 h时（T1～6）随机取6只小鼠，摘除眼球取血，采用ELISA法检测血清TNF-α和IL-10的浓度；于T4～6时随机取6只小鼠，断颈处死取脾脏，采用流式细胞仪检测NK细胞及其亚群的百分比。结果 与Sham组比较，Sep组不同时点小鼠生存率降低，T1～3，6时血清TNF-α浓度和T3～6时血清IL-10浓度升高，T4～6时脾NK细胞百分比和T5时CD27－CD11b＋NK细胞百分比降低，CD27＋CD11b＋和CD27＋CD11b－NK细胞百分比升高，T4，5时CD27－CD11b－NK细胞百分比降低，T6时CD27－CD11b－NK细胞百分比升高（P〈0.05）。结论 脾CD27和CD11b标记NK细胞亚群变化在小鼠脓毒症发生发展中起重要作用。

高效抗逆转录病毒疗法治疗HIV—1感染者的免疫学变化

目的探讨高效抗逆转录病毒疗法(HAART)对人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)感染者免疫重建和部分免疫激活标志变化的影响。方法37例HIV-1感染者,经两种核苷类逆转录酶抑制剂和一种非核苷类逆转录酶抑制剂组方的HAART一年治疗,分别在治疗前、治疗12周、24周和48周,检测其血浆HIV-1病毒载量、CD3^+CD4^+、CD3^+CD8^+、CD4^+CD45RA^+CD62L^+、CD4^+CD45RO^+、CD8^+CD38^+、CD4^+CD28^+、CD8^+CD28^+细胞数和血浆可溶性的CD27(sCD27)分子水平。结果HIV-1病毒载量的变化与CD3^+CD4^+淋巴细胞计数、CD4^+CD28^+、CD8^+CD28^+细胞计数和百分比呈明显的负相关关系；与CD8^+CD38^+细胞计数和百分比、sCD27水平呈明显的正相关关系。抗病毒效果好的完全应答组上述各项检测指标比抗病毒效果差的部分应答组显示出更显著的变化。结论CD8^+CD38^+、CD4^+CD28^+、CD8^+CD28^+细胞计数和百分比以及sCD27水平与病毒载量在HAART治疗中显示同步变化,是观察抗病毒效果和免疫学效果的指标。

SLE患者外周血B细胞B7RP-1的表达及其与疾病活动度的相关性

目的探讨SLE患者B细胞分化和B7相关蛋白-1（B7RP-1）在B细胞上的表达。方法用三色流式细胞仪检测23例初发SLE患者和16例正常人对照浆细胞、记忆性B细胞、原始B细胞的百分比，并检测三类B细胞上B7RP-1的表达量；同时收集患者临床资料，进行SLE疾病活动度指数（SLEDAI）评分，分析疾病活动度与B7RP-1表达水平的关联。结果活动期和非活动期SLE患者浆细胞所占比例较正常人对照显著增加（P〈0．01），且活动期高于非活动期（P〈0．01）；相对于正常人对照，活动期SLE患者记忆性B细胞所占比例减少（P〈0．01），非活动期同正常人对照组差异无统计学意义；原始B细胞所占比例三组间差异无统计学意义。SLE肾炎组浆细胞所占比例高于非肾炎组（P〈0．05），记忆性B细胞和原始B细胞两组差异无统计学意义。SLE患者B细胞B7RP-1表达（46．51％）低于正常人对照组（63．75％），且三种类型B细胞B7RP-1表达量均低于正常人（P〈0．01），但活动期和非活动期患者B7RP-1的表达差异无统计学意义。SLE患者B7RP-1的表达同疾病活动度无关联（r＝0．035，P〉0．05），狼疮肾炎和非狼疮肾炎组B7RP-1表达差异无统计学意义。结论SLE患者外周血浆细胞所占比例增加，B7RP-1的表达下降，可能与SLE的发病机制有关。

基于TCGA数据库分析CD70在肝细胞癌中的表达及其对肿瘤微环境的影响

目的研究CD70及受体CD27在肝细胞癌(HCC)中的表达水平,及其与临床病理特征及预后的关系,并探讨CD70对肿瘤微环境可能的作用。方法下载癌症基因组图谱(TCGA)数据库中有关HCC的RNA测序数据,分析CD70和CD27在肿瘤组织和正常组织中的表达差异及其与临床病理特征的关系;采用Kaplan-Meier生存曲线比较CD70、CD27表达不同患者的生存率;分析CD70与其他影响肿瘤微环境基因表达间的相关性。结果通过TCGA数据库共获得371例HCC肿瘤样本和50例正常组织样本信息;CD70在HCC肿瘤组织内的表达水平显著高于正常组织;CD70表达水平与年龄、性别、肿瘤分期、是否存在远处转移及生存无明显相关性(P>0.05);CD27在HCC肿瘤组织内的表达水平与正常组织无显著差异,但CD27高表达组的总生存率显著高于CD27低表达组患者;HCC肿瘤组织内CD70表达与IL-12、FOXP3、CD25、CD39、CD27、PD-1、PD-L1、LAG3、CTLA4、Tim3、VEGF、IDO、CXCR4和CCL2的表达呈显著正相关(P<0.05,|r|>0.3)。结论CD70在HCC患者肿瘤组织中异常表达,虽然CD70表达升高与患者病理分期和生存无显著相关,但是其与免疫抑制肿瘤微环境相关,可能是HCC形成免疫逃逸的机制之一。