慢性乙型肝炎患者外周血CD8^+淋巴细胞上CD28抗原的表达

乙型肝炎的肝细胞免疫损伤机制主要是由CD8＋淋巴细胞介导的细胞免疫反应.CD8＋淋巴细胞清除抗原需要双信号的刺激,即除了抗原递呈细胞（APC）对抗原的识别作为第一信号外,还涉及协同刺激分子的第二信号等因素[1].APC上的B7分子与其受体即CD8＋上的CD28分子结合,是乙肝免疫应答重要的协同刺激途径[2].本文通过检测慢性乙型肝炎患者外周血CD8＋淋巴细胞上CD28的表达水平,探讨慢性乙型肝炎的免疫状态.

CD28超竞争单抗对大鼠原位气管移植术后早期免疫炎性损伤的影响

目的:研究大鼠原位气管移植术后应用CD28超竞争单抗对在体扩增CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞的效果及对移植气管早期免疫排斥炎性反应的影响。方法:采用大鼠同种异体原位气管移植模型,分2组。治疗组受体移植当天经腹腔注射CD28超竞争单抗JJ316(0.5 mg);对照组注射同型抗体mIgG(0.5 mg)。于术后第5天采用流式细胞仪检测颈部引流淋巴结、脾及外周血单个核细胞中CD4+CD25+FoxP3+T细胞的比率;移植气管进行病理形态学检查。结果:CD28超竞争单抗治疗组较同型抗体mIgG对照组气管闭塞程度、炎症反应细胞浸润及呼吸道上皮损伤情况明显减轻;外周血、脾脏及颈部淋巴结中CD4+CD25+FoxP3+T细胞的比率[(16.9±4.2)%、(14.8±3.6)%、(5.8±1.2)%]高于同型抗体mIgG对照组[(2.8±1.4)%、(3.3±1.3)%、(2.9±0.9)%,P<0.05]。结论:大鼠原位气管移植后在体应用CD28超竞争单抗可减轻术后早期的免疫排斥损伤。

协同刺激分子CD28、B7-1在乳腺癌患者外周血的表达及意义

目的探讨协同刺激分子CD28、B7-1在乳腺癌患者外周血的表达及其与临床病理分期的相关性。方法选取30例乳腺癌患者为病例组,病理诊断均为浸润型导管癌,30例体检健康者为对照组。采用流式细胞术比较两组间CD28、B7-1的表达,分析CD28、B7-1与患者病理分期的相关性。结果与对照组比较,乳腺癌患者CD28、B7-1的表达水平均降低(P均<0.01);患者病理分期与CD28、B7-1水平均呈负相关(P均<0.01)。结论乳腺癌患者外周血协同刺激分子CD28、B7-1水平可作为判断乳腺病变程度、肿瘤转移的指标,也为进一步探讨乳腺癌的免疫治疗及靶点选择提供了理论及临床依据。

急性脑梗死患者外周血CD4CD25 T细胞和CD4CD28^- T细胞的变化

目的探讨急性脑梗死患者外周血CD4CD25T细胞和CD4CD28-T细胞亚群的变化及意义。方法选择急性脑梗死患者22例(脑梗死组),另选取健康体检者18例(对照组);均采用流式细胞仪检测外周血CD4CD25T细胞和CD4CD28-T细胞占CD4T细胞比例。结果脑梗死组外周血CD4CD25T细胞/CD4T细胞比例明显低于对照组[(41.14±9.92)%vs(49.01±12.19)%,P<0.05],而CD4CD28-T细胞/CD4T细胞比例明显高于对照组[(19.93±15.60)%vs(11.96±8.60)%,P<0.05]。结论急性脑梗死患者外周血CD4CD25T细胞比例减少,而CD4CD28-T细胞升高,两者共同作用,可能在脑梗死发生、发展中起重要作用。调节T淋巴细胞亚群可能是脑梗死的潜在治疗靶点。

子痫前期患者外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4的表达水平及意义

目的:探讨子痫前期外周血淋巴细胞CD28/CTLA-4的表达水平与子痫前期发病的相关性。方法:选择住院确诊的子痫前期孕妇35例为实验组,以30例正常妊娠晚期孕妇为对照组,应用流式细胞术检测两组外周血CD28和CTLA-4在CD3+T细胞上的表达水平并比较。结果:实验组孕妇外周血CD28的表达水平较对照组差异无统计学意义(P>0.05);CTLA-4表达水平显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);实验组中外周血CD28/CTLA-4值较对照组降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子痫前期患者外周血CD28/CTLA-4表达异常,从而使T细胞亚群分类异常,免疫调节功能紊乱,免疫耐受失衡,导致子痫前期的发生。

老年人外周血淋巴细胞的凋亡及CD28和CD95的表达

目的通过对健康老年人与健康成年人外周血淋巴细胞的凋亡率及CD28和CD95表达水平的比较性研究,观察衰老对淋巴细胞凋亡的影响,以及CD28和CD95与淋巴细胞凋亡的关系。方法将实验对象分为2组:成年组(25～59岁)与老年组(60～90岁)各20例,采用免疫荧光标记流式细胞术检测外周血淋巴细胞CD28和CD95的水平;Annexin-V-FITC/PI双染色流式细胞术测定地塞米松诱导的淋巴细胞凋亡。结果老年组:淋巴细胞凋亡率〔(14.90±4.12)%〕显著高于成年组〔(8.12±3.12)%〕;CD28+CD95-〔(8.80±4.86)%〕及CD28+〔(36.31±10.38)%〕均明显低于成年组〔(23.09±3.48)%、(52.29±4.90)%〕,而CD28-CD95+〔(53.23±8.28)%〕、CD95+〔(80.25±7.19)%〕及CD28-〔(63.69±10.38)%〕明显高于成年组〔(33.58±4.72)%、(63.18±4.12)%、(47.71±4.90)%〕;CD28+CD95+在两组间差异无统计学意义。淋巴细胞凋亡率与CD28(CD28+)呈负相关,与CD95(CD95+)呈正相关。结论老年人淋巴细胞凋亡率上升;CD28+表达下降,CD28-、CD95+表达上升;淋巴细胞的凋亡率与CD28+、CD95+有相关性。提示老化导致老年人淋巴细胞凋亡增加,CD28和CD95的变化与淋巴细胞凋亡密切相关。

胃癌患者外周血淋巴细胞CD_8、CD_(28)表达的检测及临床意义

目的探讨胃癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28的表达及其临床意义。方法用流式细胞术对48例胃癌患者和30例健康体检者外周血淋巴细胞CD8及CD28进行了检测。结果(1)胃癌组CD8+CD28-细胞与对照组比较明显增高(P<0.05),CD8+CD28+细胞则明显减低(P<0.01)。(2)胃癌患者手术后CD8+CD28-细胞明显低于手术前(P<0.01),CD8+CD28+细胞明显高于手术前(P<0.05)。(3)胃癌患者淋巴结转移组CD8+CD28-细胞明显低于未转移组(P<0.01)。(4)Ⅲ期胃癌患者CD8+CD28-细胞与Ⅰ期和Ⅱ期相比明显增高(分别P<0.01,P<0.05),随着临床分期的进程CD8+CD28+细胞、CD8-CD28+细胞逐渐减低(分别P<0.01,P<0.05)。结论检测胃癌患者的外周血中的CD8和CD28的表达,对了解患者的免疫状况,疾病进展和指导临床对患者进行免疫调节治疗方面有一定的价值。

早发型重度子痫前期分娩前后CD28/CTLA-4的相关研究

目的:探讨白细胞分化抗原28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CD28/CTLA-4)与早发型重度子痫前期发病的关系。方法:采用流式细胞技术分别测定30例早发型重度子痫前期患者分娩前后的CD28、CTLA-4、CD28/CTLA-4表达水平,同时测量各组受试者血压及肝肾功能。结果:早发型重度子痫前期患者分娩前CD3+CD4+CTLA-4+、CD3+CD8+CTLA-4+高于分娩后,CD3+CD4+CD28+/CD3+CD4+CTLA-4+、CD3+CD8+CD28+/CD3+CD8+CTLA-4+低于分娩后,差异有统计学意义(均P<0.05)。CD3+CD4+CD28+/CD3+CD4+CTLA-4+、CD3+CD8+CD28/CD3+CD8+CTLA-4+两者无直线相关性(r=-0.037,P=0.844)。结论:早发型重度子痫前期患者分娩后较分娩前CTLA-4的表达下降,CD28/CTLA-4上升,可能提示CD28/CTLA-4免疫偏移与子痫前期的发生有关。

HepA-H和HepA-L肝癌荷瘤小鼠CD8^+/CD28^+T细胞和肿瘤新生淋巴管的研究

目的研究不同淋巴转移潜能肝癌(H epA-H和H epA-L)荷瘤小鼠体内CD 8+/CD 28+T淋巴细胞和肿瘤新生淋巴管,探讨与肿瘤淋巴转移的关系。方法用两种来源相同,而淋巴转移能力不同的小鼠肝癌细胞亚系,H epA-H(高淋巴转移)和H epA-L(低淋巴转移),小鼠皮下接种,制备荷瘤动物模型。采用抗小鼠CD 8、CD 28荧光标记单克隆抗体,流式细胞术定量检测小鼠外周血和肿瘤组织内CD 8+/CD 28+T淋巴细胞数量;应用5’-核苷酸酶-碱性磷酸酶双重组化染色法,观察肿瘤新生淋巴管。结果肿瘤皮下接种后14天,H epA-H组荷瘤小鼠外周血CD 8+/CD 28+T淋巴细胞数量明显低于正常对照组(P<0.05);H epA-H组肿瘤组织内CD 8+/CD 28+T淋巴细胞数量显著低于H epA-L组(P<0.05)。两种肿瘤细胞亚系均可诱导肿瘤新生淋巴管,但H epA-H肿瘤内和瘤周最高淋巴管密度均明显高于H epA-L组(P<0.01)。结论肿瘤淋巴转移能力的差异与体内CD 8+/CD 28+T淋巴细胞数量及肿瘤新生淋巴管有关。

免疫介导再生障碍性贫血小鼠骨髓T细胞表面CD28、CTLA4水平检测及其意义

目的研究免疫介导再障小鼠骨髓T细胞CD28、CTLA4的表达及其意义。方法建立免疫介导再障小鼠模型,取再障和正常组小鼠骨髓单个核细胞(BMNC),在终浓度为15μg/mL植物血凝素(PHA)条件下培养,于0h和48h分别用双色免疫荧光标记流式细胞术对T细胞CD28、CTLA4的表达进行分析。结果PHA刺激培养48h后正常组和再障组T细胞CD28、CT-LA4的表达较刺激前均明显升高(P<0.01);而且再障组刺激培养前后T细胞CD28的表达均显著高于同期正常组(P<0.01),但CTLA4的表达与同期正常组相比虽略有升高,但差异无显著性(P>0.05)。结论再障T细胞激活及其激活潜能增强,免疫分子CD28、CTLA4在骨髓中的表达异常可能参与了再障T细胞的免疫功能紊乱。

CD28噬菌体展示载体的构建及鉴定

目的:构建CD28分子胞外区噬菌体展示载体,并对其展示的CD28抗原性进行检测。方法:采用RT-PCR方法扩增CD28胞外区,将其重组于噬菌粒载体pComb3HSS,构建的重组载体与辅助噬菌体VCSM13共转染受体菌,使CD28胞外区展示在噬菌体表面。用ELISA和流式细胞仪检测展示在噬菌体上CD28的抗原性。结果:成功构建了CD28的重组噬菌体展示载体pComb3HSS-CD28。噬菌体展示的CD28可与抗CD28抗体结合,也可与JurkatT细胞表面的CD28竞争性结合抗CD28的抗体。结论:噬菌体展示的CD28具有抗原性。

共刺激分子B_7和CD_(28)在胃癌患者中的表达

目的:研究胃癌患者外周血中CD28表达阳性的T细胞数量和患者胃癌组织细胞表面B7的表达水平,以探讨胃癌患者共刺激通路是否异常。方法:采用流式细胞术检测胃癌患者外周血中CD28阳性T细胞与胃癌患者组织细胞B7分子的表达,并与胃良性疾病患者和正常人作比较。结果胃癌患者CD28阳性的T细胞数为(38.18±5.83)%,明显低于对照组(52.99±4.75)%,t=11.05,P=0.03。胃癌患者组织细胞表面B7表达水平为(50.60±7.48)%,低于对照组(64.51±5.93)%,P=0.04。结论:胃癌患者外周血中T细胞低表达CD28分子,胃癌细胞低表达B7分子,从而影响B7CD28共刺激通路,使T细胞不能有效地清除肿瘤。

2型糖尿病患者外周血中膜型及可溶性CD28分子的表达及意义

目的分析2型糖尿病患者外周血中膜型及可溶性CD28分子的表达及其意义。方法分别收集2012年12月至2013年12月在北京军区联勤部门诊部就诊的30例2型糖尿病患者(糖尿病组)及同期30名健康体检者(对照组)的外周血,通过溶血及流式细胞术检测其外周血T细胞表面CD28分子的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清中可溶性CD28的水平,并进行对比分析。结果糖尿病组外周血CD4+CD28+T细胞和CD8+CD28+T细胞显著低于对照组[(28.29±7.71)%比(32.77±4.28)%和(12.18±3.17)%比(18.53±3.27)%,均P<0.01],血清中可溶性CD28水平显著高于对照组[(2.86±0.96)比(0.61±0.19)μg/L,P<0.01]。结论协同刺激分子CD28很可能参与了2型糖尿病的免疫病理机制。

联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能影响的实验研究

目的:探讨CTLA-4Ig及可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS对移植胰岛功能的影响。方法:在异种胰岛移植模型的基础上48只实验动物随机分成4组,每组12只,供体为SD大鼠,受体为近交系昆明小鼠。联合处理组(A组):分别于移植后0、2、4d和1、3、5d腹腔内注射CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白组;可溶性B7RP-1融合蛋白处理组(B组):移植后1、3、5d腹腔内注射可溶性B7RP-1融合蛋白组;CTLA-4Ig处理组(C组):移植后0、2、4d腹腔内注射CTLA-4Ig组;对照组(D组):单纯胰岛移植,不做CTLA-4Ig和可溶性B7RP-1融合蛋白处理组。通过观察大鼠胰岛移植后移植物存活时间和移植胰岛病理改变,并用RT-PCR方法检测IL-2和IL-10在移植组织中的表达情况。结果:联合处理组大鼠移植胰岛存活时间较对照组及CTLA-4Ig处理组和可溶性B7RP-1融合蛋白组明显延长,移植胰岛光镜检查接近正常,IL-2mRNA表达差异有显著性[(42.55±6.34)%VS(112.55±15.34)%,P<0.01],IL-10mRNA表达差异无显著性[(105.35±15.16)%VS(102.23±16.02)%,P>0.05]。结论:应用CTLA-4Ig+可溶性B7RP-1融合蛋白联合阻断CD28和ICOS,可以明显的抑制排斥反应,提高移植物的存活率。

迟发型放射性脑病患者外周血CD4^+CD28^-T细胞的变化

目的探讨迟发型放射性脑病(REP)患者外周血CD4^+CD28^-T细胞亚群的变化及意义。方法选择迟发型REP患者45例(迟发型REP组),另选取因脑瘤及鼻咽癌接受放射治疗患者45例(放射对照组)及未接受放射治疗正常对照45例(正常对照组)。均采用流式细胞仪检测外周血CD4^+CD28^-T细胞占CD4 T细胞比例。结果迟发型REP组CD4^+CD28^-T/CD4T细胞比例明显高于放射对照组及正常对照组(均P<0.05),放射对照组与正常对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论迟发型REP患者外周血CD4^+CD28^-T细胞升高,可能在迟发型REP发生、发展中起重要作用。调节T淋巴细胞亚群可能是迟发型REP潜在治疗靶点。

B7-CD28/CTLA4共刺激途径在再生障碍性贫血免疫机制中的作用

再生障碍性贫血（AA）发病机制极为复杂,有造血干细胞损伤、骨髓微环境异常、免疫功能紊乱等学说。近年来有学者认为细胞免疫功能紊乱参与了造血功能衰竭的病理过程[1]。AA是T淋巴细胞介导的自身免疫性疾病[2],

CD28家族生物学特性及其在慢性乙型病毒性肝炎中的研究进展

乙型肝炎病毒（HBV）感染后可被自限性清除或发展为慢性感染;HBV特异性T淋巴细胞免疫在病毒清除过程中起着重要作用,与HBV感染后的临床转归密切相关。T淋巴细胞活化、增殖及分化有赖于双重刺激信号的作用：第一信号来自T细胞受体（TCR）与抗原的特异性结合;第二信号即抗原递呈细胞（APC）上的B7家族分子与T细胞上的CD28家族分子相互作用提供的共刺激信号。

消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/CTLA-4协同刺激通路及腹水微环境的影响

目的 研究消水散对人胃癌小鼠腹膜移植模型B7/CD28/细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)协同刺激通路及腹水微环境的影响。方法 2019年4月至2020年5月,在湖南省中医药研究院动物中心实验室,采用腹腔注射人胃癌细胞MGC803建立人胃癌小鼠腹膜移植模型,共分为模型组、消水散低、中、高剂量组,另取正常小鼠为对照组,每组10只。通过行为学观察及测定血清促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)含量评估模型质量,影像学方法评估恶性腹水情况,流式细胞仪及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)分别检测B7-1、B7-2、CD28及CTLA-4表达量及其mRNA表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测腹膜组织转化生长因子-β1(TGF-β1)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平。结果 正常小鼠的阳虚症状积分为(0.00±0.00)分,血清ACTH水平为(103.46±10.13)ng/L、CORT水平为(81.34±9.21)μg/L、T3含量为(178.52±15.86)ng/L、T4含量为(213.59±16.97)μg/L和TSH含量为(10.84±1.15)mIU/mL。与对照组相比,模型小鼠阳虚症状积分[(7.84±1.59)分]显著增加(P<0.05),血清ACTH[(71.09±6.42)ng/L]、CORT[(43.42±7.14)μg/L]、T3[(103.77±13.24)ng/L]、T4[(127.64±13.25)μg/L]、TSH含量[(8.14±1.02)mIU/mL]显著降低(P<0.05)。模型组小鼠的腹水量为(5.18±0.46)mL、瘤体积为(1.23±0.12)cm3、瘤重为(1.73±0.15)g、B7-1 mRNA水平为(1.06±0.10)、B7-2 mRNA水平为(1.04±0.11)、CD28 mRNA水平为(0.97±0.08)、CTLA-4 mRNA水平为(1.03±0.09)、TGF-β1含量为[(181.73±15.26)pg/g]和IL-10水平为[(68.74±6.03)pg/g]。与模型组相比,消水散低、中、高剂量组小鼠的腹水量[(4.03±0.41)、(3.24±0.25)、(2.33±0.27)mL]、瘤体积[(0.93±0.09)、(0.49±0.05)、(0.16±0.02)cm3]、瘤重[(1.42±0.13)、(0.79±0.11)、(0.27±0.08)g]、CTLA-4 mRNA水平[(0.83±0.07)、(0.42±0.05)、(0.16±0.02)]、TGF-β1[(152.69±12.39)、(131.45±11.68)、(107.26±10.52)pg/g]、IL-10[(51.65±5.38)、(34.28±2.73)、(27.13±2.64)pg/g]表达水平呈剂量依赖性降低(P<0.05),B7-1[(2.13±0.22)、(4.56±0.51)、(7.29±0.68)]、B7-2[(1.95±0.14)、(4.32±0.41)、(6.83±0.63)]、CD28[(2.02±0.15)、(3.94±0.28)、(7.11±0.84)]mRNA水平逐渐增加(P<0.05)。结论 消水散可抗人胃癌移植瘤恶性腹水作用,可能与抑制CTLA-4表达,促进T细胞激活,改善机体免疫抑制及腹腔免疫微环境有关。

人B7.1基因cDNA的克隆及其逆转录病毒表达载体的构建

目的 克隆人 B7.1全长 c DNA及构建相应的逆转录病毒表达载体。 方法 应用逆转录多聚酶链反应从人 B淋巴瘤细胞系 Raji中克隆 B7.1全长 c DNA ,再将 c DNA插入到质粒 p Bluescript中 ,经自动荧光测序证实无误后 ,再通过定向克隆构建相应的逆转录病毒表达载体 PL XSNh B7。 结果 逆转录多聚酶链反应扩增产物长度与预期的 889bp一致 ;用 M13正、反向引物进行荧光测序证实 ,克隆出的序列与 Gen Bank的 B7.1c DNA序列完全一致 ;人 B7.1全长 c DNA被成功地插入到质粒 PL XSN中。 结论 人 B7.1全长 c DNA的克隆及相应逆转录病毒表达载体的构建为今后应用 B7.1进行肿瘤免疫基因治疗提供了可能性。

CD8阳性T细胞亚群在肺癌外周血的检测及分析

目的检测肺癌患者外周血清中CD8^+T细胞亚群CD28^+及CD57^+的表达程度,探讨其临床意义。方法合肥市第二人民医院经细胞学或病理学诊断为肺癌的初次治疗患者30例,TNM分期(UICC,第7版)Ⅲ期12例,Ⅳ期18例。病理类型腺癌15例,鳞癌8例,小细胞肺癌7例。流式细胞仪分别检测肺癌患者组治疗前后及健康对照组人群的血清中CD8^+T细胞CD28^+和CD57^+的表达水平,分析该表达水平变化及与肺癌临床分期和病理学类型之间的关系。结果肺癌患者治疗前血清中CD28^+T细胞亚群比例为(12.34±3.72)%,CD57^+T细胞亚群比例为(19.53±5.26)%。而健康对照组血清中CD28^+T细胞亚群比例为(23.53±4.15)%,CD57^+T细胞亚群比例为(11.37±2.73)%,差异有统计学意义(P<0.05),该类指标与肿瘤病理类型无关,而随着不同临床分期增加,CD8^+CD57^+T细胞未见差异,而CD8^+CD28^+T细胞表达差异有统计学意义(P<0.05)。经两周期化疗后,缓解组(完全缓解+部分缓解)患者血清中CD28^+、CD57^+T细胞亚群比与健康对照组患者相比,差异无统计学意义(P>0.05),而未缓解组(稳定+进展)患者的CD28^+、CD57^+T细胞亚群比例分别为(10.62±2.74)%、(20.45±4.36)%.与健康对照组差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌患者血清中CD8^+CD28^+T细胞表达较正常人群明显减低,而CD8^+CD57^+T细胞表达较正常人群明显升高,联合该两种T细胞亚群检测不仅可以了解肺癌患者免疫状况,同时可以评估肺癌患者预后,有一定临床应用价值。