LncRNA LINC01137通过诱导CD8^(+)T细胞耗竭促进非小细胞肺癌进展的机制研究

目的研究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)LINC01137在非小细胞肺癌(nonsmall cell lung cancer,NSCLC)免疫逃逸中的生物学功能及其潜在的调节机制。方法采集24例健康志愿者和24例NSCLC患者血液样本,并收集NSCLC肿瘤组织和癌旁组织检测LINC01137水平。利用Starbase数据库预测LINC01137与miR-22-3p的结合位点,荧光素酶报告基因分析进行验证。采用A549细胞来源的外泌体和/或sh-LINC01137干扰序列转染A549细胞,检测细胞增殖和侵袭能力;收集转染后的细胞上清液培养CD8^(+)T细胞,检测CD8^(+)T细胞耗竭标志物干扰素-γ(interfereron-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、颗粒霉素B(granzyme B)和白细胞介素-2(interleukin-2,IL-2)水平,以及PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比。采用外泌体和/或miR-22-3p模拟物(miR-22-3p mimic)转染CD8^(+)T细胞,检测PD-1蛋白水平。结果与癌旁组织相比,NSCLC肿瘤组织中LINC01137表达(3.357±0.548 vs 1.011±0.371)明显升高;与健康志愿者相比,NSCLC患者外周血LINC01137表达(3.216±0.342 vs 1.007±0.313)亦明显升高,差异具有统计学意义(t=-17.367,-17.147,均P<0.001)。肿瘤组织LINC01137表达与外周血中LINC01137表达呈正相关(r=0.755,P<0.05)。在A549细胞来源的外泌体中LINC01137显著富集。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组细胞活力(65.852%±4.715%vs 100.153%±11.934%)及细胞侵袭(21.464%±3.481%vs 43.126%±1.447%)能力显著降低,差异具有统计学意义(t=4.630,9.953,均P<0.01)。NSCLC患者外周血中LINC01137表达和CD8^(+)T细胞百分比呈负相关(r=-0.520,P<0.05)。与Exo+sh-NC组相比,Exo+sh-LINC01137组IFN-γ(3865.314±543.852 pg/ml vs 1786.971±105.982 pg/ml),TNF-α(4631.930±510.715pg/ml vs 1973.242±379.623pg/ml),Granzyme B(3876.496±312.438pg/ml vs 1879.439±287.584pg/ml)和IL-2 mRNA水平(3.286±0.437 vs 1.015±0.314)升高,PD-1+Tim3^(+)CD8^(+)T细胞百分比(7.680%±2.185%vs 18.952%±3.216%)降低,差异具有统计学意义(t=-6.497,-7.237,-8.146,-7.310,5.021,均P<0.01)。miR-22-3p是LINC01137的靶基因。与Exo+NC mimic组相比,Exo+miR-22-3p组PD-1蛋白水平(0.384±0.087 vs 1.003±0.147)显著降低,差异有统计学意义(t=6.277,P<0.01)。结论NSCLC患者肿瘤组织及外周血中LINC01137表达显著上调;NSCLC细胞来源的外泌体中LINC01137通过靶向CD8^(+)T细胞中miR-22-3p并抑制其表达,诱导CD8^(+)T细胞耗竭,促进NSCLC细胞免疫逃逸。

miR-155/GATA3/CD4^(+)T细胞通路对变应性鼻炎发病机制的调控

变应性鼻炎(AR)指具有特异性体质的个体第二次接触相同致敏原后立即触发由免疫球蛋白E介导的Ⅰ型变态反应,其发病机制尚未明确,与多种基因、免疫细胞、细胞因子等密切相关。随着分子生物学和第二代基因测序技术快速发展,AR发病机制研究逐步深化、精准。研究发现miR-155和转录因子GATA3对AR发生发展有重要调控作用,进而影响CD4^(+)T淋巴细胞的优势分化趋势和ILC2增生。本文主要以miR-155/GATA3通路为中心,探讨相关上游基因和下游调控物质对AR发病机制的影响并进行综述。

1种用于分离猪肠道CD3^(+)T细胞方法的建立

CD3^(+)T细胞是猪肠道免疫系统的重要组成部分,对肠道病毒感染研究具有重要价值。该研究开发了一种采用磁珠富集手段从猪小肠组织中分离原代CD3^(+)T细胞的方法。该方法将为研究猪肠道免疫系统功能提供合适的细胞模型,还可加速抗病毒药物和疫苗研发。

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。

胸腺肽联合奥沙利铂对NSCLC合并恶性胸腔积液患者外周血CD3^(+)、CD4^(+)水平的影响

探究胸腺肽联合奥沙利铂对非小细胞型肺癌(NSCLC)合并恶性胸腔积液(MPE)患者外周血CD3^(+)、CD4^(+)水平的影响。方法:纳入2019年1月~2022年1月来天津市蓟州区人民医院化疗的82例NSCLC合并MPE患者采用随机数字表法分为单一组和联合组各41例,入院后两组患者均给予常规科内治疗,在此基础上单一组采用奥沙利铂,联合组采用奥沙利铂+胸腺肽。化疗8 w后比较两组临床疗效,两组化疗前后免疫功能指标(CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+))水平以及胸腔积液中炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],两组不良反应发生情况。结果:化疗后联合组总有效率以及疾病控制率(DCR)明显高于单一组,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗前两组CD3^(+)、CD4^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05),化疗后联合组上述数据明显高于单一组,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后,两组患者胸腔积液中IL-6、TNF-α水平明显低于化疗前,且联合组明显低于单一组,差异有统计学意义(P<0.05)。化疗后,联合组胃肠道反应及骨髓抑制发生率明显低于单一组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:应用胸腺肽联合奥沙利铂治疗NSCLC合并MPE患者临床疗效显著,对患者机体免疫功能有增强作用,且安全性较高。

CD3^(+)T淋巴细胞计数联合早期预警评分对重症肺炎患者28 d死亡风险的预测价值

目的 分析CD3^(+)T淋巴细胞计数联合早期预警评分(EWS)预测重症肺炎患者28 d死亡风险的价值。方法 选取2020年6月—2021年5月天津市中医药研究院附属医院收治的78例重症肺炎患者为研究对象。根据患者28 d后生存状况,将其分为死亡组与存活组,比较两组CD3^(+)T淋巴细胞计数、EWS评分及其他临床指标,行一般多因素Logistic回归分析,筛查重症肺炎患者28 d死亡的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC),分析CD3^(+)T淋巴细胞计数、EWS评分预测重症肺炎患者28 d死亡的价值。结果 死亡组入院时SOFA评分、APACHEⅡ评分、EWS评分高于存活组(P <0.05),死亡组ICU住院时间、机械通气时间长于存活组(P <0.05),死亡组入院时CD3^(+)、CD4^(+)及CD8^(+)少于存活组(P <0.05)。Pearson相关性分析结果显示,死亡组患者入院时外周血CD3^(+)与EWS评分呈负相关(r=-0.422,P=0.000),CD4^(+)、CD8^(+)、CD4^(+)/CD8^(+)与EWS评分无相关性(r=-0.113、-0.122和-0.171,P=0.684、0.682和0.661)。ROC曲线结果表明,入院时CD3(^(+)敏感性为73.9%,特异性为81.1%)、EWS评分(敏感性为91.3%,特异性为54.7%)预测重症肺炎患者28 d死亡效能较好,且两者联合应用可有效提高各指标单独应用效能(敏感性为78.3%,特异性为77.4%)。一般多因素Logistic回归分析结果:入院时EWS评分[O^R=1.701(95%CI:1.347,2.147)]、入院时APACHEⅡ评分[O^R=1.578(95%CI:1.284,1.938)]、ICU住院时间[O^R=1.399(95%CI:1.095,1.788)]、机械通气时间[O^R=1.335(95%CI:1.155,1.543)]是重症肺炎患者28 d死亡的危险因素(P <0.05);入院时外周血CD3^(+)[O^R=0.679(95%CI:0.556,0.829)]是重症肺炎患者28 d死亡的保护因素(P <0.05)。结论 入院时EWS评分、外周血T淋巴细胞亚群中CD3^(+)联合预测重症肺炎患者28 d死亡效能较好,可作为临床评估患者预后的新指标,且入院时EWS评分也是导致重症肺炎患者28 d死亡的危险因素,CD3^(+)是其保护因素。

^(18)F-FDG-PET/CT糖代谢参数与B7-H3、CD8^(+)T细胞在结直肠癌中的相关性研究

背景:糖酵解功能与结直肠癌的增殖、转移、耐药性等具有明显相关性,对如何量化评估糖酵解水平还缺乏相应指标。目的:探讨术前^(18)F-FDG-PET/CT糖代谢参数与结直肠癌患者临床病理特征、B7-H3、CD8^(+)T细胞表达的相关性。方法:收集2021年4月—2022年7月苏州大学附属第一医院确诊的40例结直肠腺癌患者,所有患者在术前2周内行全身^(18)F-FDG-PET/CT检查,获取最大标准化摄取值(SUVmax)、平均标准化摄取值(SUVmean)、肿瘤代谢体积(MTV)、病灶糖酵解总量(TLG)。采用免疫组化染色检测B7-H3、CD8^(+)T细胞表达,并分析其与临床病理特征、^(18)F-FDG-PET/CT糖代谢参数的相关性。结果:MTV、TLG与结直肠癌患者的T分期、淋巴结转移相关(P<0.05),而SUVmax、SUVmean、MTV、TLG与其他临床病理特征无关(P>0.05)。与癌旁组织相比,结直肠癌组织中B7-H3表达显著升高(P<0.001),CD8^(+)T细胞表达显著降低(P<0.001)。结直肠癌组织中B7-H3表达与CD8^(+)T细胞表达无关(P>0.05);B7-H3表达与T分期、淋巴结转移相关(P<0.05);CD8^(+)T细胞表达与肿瘤大小、分化程度相关(P<0.05)。结直肠癌组织中B7-H3表达与SUVmax、SUVmean、MTV和TLG相关(P<0.05),CD8^(+)T细胞与MTV、TLG相关(P<0.01)。结论:^(18)F-FDG-PET/CT糖代谢参数中的MTV和TLG能更有效地反映结直肠癌病理特征和转移情况,可能具有更高的评估价值。在结直肠癌组织中,B7-H3明显高表达、CD8^(+)T细胞明显低表达,两者与PET/CT糖代谢参数均存在相关性。联合^(18)F-FDG-PET/CT和B7-H3、CD8^(+)T细胞的表达情况可能为结直肠癌临床判断分期、转移以及评估糖酵解水平等提供更为可靠的参考价值。

Tim-3靶向CD8^(+)T细胞调控TNF-α/IL-22/STAT3通路加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤

目的探讨T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域的分子3(Tim-3)对自身免疫性肝炎的影响及其机制。方法将30只小鼠分为3组:空白组、模型组和模型+Tim-3阻断组,每组10只。空白组经尾静脉注射等量生理盐水;其他两组尾静脉注射10 mg/kg刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎小鼠模型,造模成功后模型+Tim-3阻断组每天1次腹腔内注射液0.1 mg/ml Tim-3,注射7 d。HE染色观察小鼠肝组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清AST、ALT;酶联免疫吸附法检测IL-22、TNF-α水平;流式细胞分析肝组织CD8^(+)T比例;实时荧光定量PCR检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA相对表达;免疫印迹试验检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3蛋白相对表达。结果空白组小鼠肝脏组织无变化;模型组肝脏组织大面积性肝炎;模型+Tim-3阻断组见显著淋巴细胞浸润与大量空泡。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组Tim-3、IL-22、TNFα、STAT3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组Tim-3 mRNA及蛋白表达下降,IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA及蛋白相对表达升高(P<0.05)。结论阻断Tim-3可下调CD8^(+)T细胞,促进TNF-α/IL-22/STAT3炎症信号表达,加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤。

西北燥证对糖尿病大鼠AQP1、AQP3和CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达的影响

目的探讨西北燥证对糖尿病大鼠水通道蛋白-1(Aquaporin-1,AQP1)、水通道蛋白-3(Aquaporin-3,AQP3)和CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达的影响。方法选取16只正常大鼠,建立2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)大鼠模型,将造模成功的大鼠随机分为正常环境T2DM组、西北燥证T2DM组,每组8只。另选正常大鼠8只设为正常对照组。观察各组大鼠的一般情况,检测大鼠空腹血糖(Fasting blood glucose,FBG)、空腹血清胰岛素(Fasting serum insulin,FINS)、胰岛素抵抗指数(Homeostasis model assessment for insulin resistance,HOMA-IR)的变化,比较各组大鼠AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞的表达水平,分析血清CD4^(+)、CD8^(+)与AQP1、AQP3表达水平的相关性。结果与正常对照组比较,正常环境T2DM组大鼠和西北燥证T2DM组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T表达差异均有统计学意义(P<0.05);与正常环境T2DM组比较,西北燥证T2DM组大鼠FBG、FINS、HOMA-IR、AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T表达差异均有统计学意义(P<0.05)。结论西北燥证外环境可影响T2DM大鼠的血糖水平,其作用机制可能与调控AQP1、AQP3、CD4^(+)T、CD8^(+)T细胞表达有关。

肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8^(+)T细胞抗肿瘤的功能及机制研究

目的:探究肺癌细胞外泌体miR-24-3p调控CD8^(+)T细胞抗肿瘤的功能及机制。方法:将16HBE exo、A549 exo、H522 exo、H460 exo、miR-NC exo、miR-24-3p exo与CD8^(+)T细胞共孵育(16HBE exo组、A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组、miR-NC exo组、miR-24-3p exo组),与PBS共孵育组(PBS组)作为对照,CD8^(+)T与miR-24-3p exo共孵育后转染FGF11质粒(miR-24-3p exo+FGF11组)。CCK8法检测CD8^(+)T细胞的增殖能力。双荧光素酶报告基因实验验证miR-24-3p和FGF11的靶向关系。将各组CD8^(+)T细胞与A549细胞以20∶1的比例共孵育4 h(16HBE exo/CD8^(+)T组、A549 exo/CD8^(+)T组、H522 exo/CD8^(+)T组、H460 exo/CD8^(+)T组、miR-NC exo/CD8^(+)T组、miR-24-3p exo/CD8^(+)T组、PBS/CD8^(+)T组、miR-24-3p exo+FGF11/CD8^(+)T组),Elisa检测共孵育后细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度,LDH法检测CD8^(+)T细胞对A549细胞的杀伤能力。结果:相比于PBS组,A549 exo组、H522 exo组、H460 exo组CD8^(+)T细胞增殖能力显著降低(P<0.05)。A549 exo/CD8^(+)T组、H522 exo/CD8^(+)T组、H460 exo/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2的浓度显著下降(P<0.001),CD8^(+)T细胞杀伤能力亦显著下降(P<0.001)。双荧光素报告基因检测结果显示FGF11为miR-24-3p的靶基因。miR-24-3p exo组CD8^(+)T细胞增殖能力显著低于miR-NC exo组,miR-24-3p exo+FGF11组CD8^(+)T细胞增殖能力显著高于miR-24-3p exo组(P<0.05)。miR-24-3p exo/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8^(+)T细胞杀伤能力均显著低于miR-NC exo/CD8^(+)T组(P<0.001), miR-24-3p exo+FGF11/CD8^(+)T组细胞上清中INF-γ和IL-2浓度及CD8^(+)T细胞杀伤能力显著高于miR-24-3p exo/CD8^(+)T组(P<0.001)。结论:肺癌细胞外泌体miR-24-3p可通过靶向抑制FGF11而抑制CD8^(+)T细胞的抗肿瘤功能。

AECOPD合并肺炎患者外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞及IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达水平及意义分析

目的探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺炎患者外周血CD16^(+)/56^(+)自然杀伤(NK)细胞、白介素-12p70(IL-12p70)、白介素-10(IL-10)、白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达及临床意义。方法选取274例AECOPD患者,根据是否合并肺炎分为单纯AECOPD组89例、AECOPD合并肺炎组185例(根据肺炎严重程度分为重症组85例、非重症组100例),检测患者入院时外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞及IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达水平。结果AECOPD合并肺炎组血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ水平均高于单纯AECOPD组,且重症组均高于非重症组(P<0.05),但不同组外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞比较均差异无统计学意义(P>0.05);Spearman秩相关显示,AECOPD患者血清IL-12p70与IL-10、IL-4、IFN-γ表达呈正相关(P<0.05),但外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞与血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达均无显著相关性(P>0.05);血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ及四者联合预测AECOPD合并肺炎的AUC分别为0.677、0.778、0.618、0.717、0.789,预测AECOPD合并重症肺炎的AUC分别为0.600、0.682、0.611、0.598、0.687。结论AECOPD合并肺炎患者血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达均明显升高,且在重症肺炎中表达更高,其中以IL-10、IFN-γ对AECOPD合并肺炎预测价值较高,而联合检测预测价值更高。

外周血CD3^+CD56^+T细胞在恶性肿瘤患者中的表现及临床意义

目的了解 CD3+ CD5 6 + T细胞与 CD3- CD5 6 + 、CD3+ CD5 6 - 的关系及其在参与恶性肿瘤患者抗肿瘤免疫中的作用。方法采用流式细胞术对 10 0例恶性肿瘤患者 (5 5例实体瘤患者和 45例非实体瘤患者 )及 46例健康对照组外周血中的 CD3+ CD5 6 +、CD3- CD5 6 +、CD3+ CD5 6 - 3类淋巴细胞进行标记分析。结果在实体瘤和非实体瘤患者组中 :CD3+ CD5 6 + T细胞均有高表达 ,2组患者与健康对照组比较均有显著性差异 (P<0 .0 1)。 CD3+ CD5 6 - T细胞在实体瘤组的表达都显著低于非实体瘤组和健康对照组 ,2组间比较均有显著性差异 (P<0 .0 0 1) ;而 CD3- CD5 6 + NK细胞在 2患者组中的表达与健康对照组比较均无显著性差异 (P>0 .0 5 )。结论 CD3+ CD5 6 + T细胞在恶性肿瘤患者外周血中的高表达较 CD3- CD5 6 + NK细胞更明显 ,并且不受恶性肿瘤细胞类型的影响 ,提示高表达的 CD3+ CD5 6 +

人外周血细胞毒性CD3^-CD56^+ NK细胞高效扩增的研究

目的 探索从人PBMC中高效扩增细胞毒性CD3-CD5 6 + NK细胞的方法。方法 使用干细胞生长培养基 (SCGM )和RPMI 16 4 0培养基 ,在抗CD3单抗、IL 2和植物血凝素 (PHA)的作用下从 5例健康成人PBMC中诱导扩增CD3-CD5 6 + NK细胞 ,并用MTT法检测其细胞毒活性。结果 只有在使用SCGM为基础培养基时 ,PBMC经抗CD3单抗、IL 2作用获得大量增殖 ,在PHA存在时获得最大增殖(P <0 .0 5 ) ,在 14天时扩增 5 1.3± 7.2倍 ,含有 (5 2 .4± 7.9) %CD3-CD5 6 + NK细胞和 (14 .2± 4 .0 ) %CD3+ CD5 6 + T细胞 ;在效 /靶比 10∶1时 ,对K5 6 2和Raji的杀伤率分别达83.7%和 5 5 .8%。结论 可使用SCGM ,在抗CD3单抗、IL 2和PHA协同作用下大量扩增细胞毒性CD3-CD5 6 + NK细胞 ,为应用NK细胞进行肿瘤过继免疫治疗提供了一种简单有效的扩增NK细胞的方法。

组蛋白H3K27甲基化抑制剂EPZ005687对U937细胞和正常骨髓CD34^+细胞凋亡、增殖及细胞周期的影响

本研究目的在于探讨组蛋白H3K27甲基化抑制剂新药EPZ005687对白血病细胞系U937细胞和正常骨髓CD34+细胞的凋亡、增殖抑制和细胞周期的影响。以不同浓度的EPZ005687作用于U937细胞,在不同时间点采用Annexin V/PI法检测细胞凋亡,WST-1法检测细胞增殖,7-AAD流式细胞术检测法检测细胞周期,免疫化学法检测H3K27组蛋白甲基化活性。结果表明:EPZ005687显著诱导U937细胞的凋亡,在0.5、1、5和10μmol/L浓度下作用于U937细胞48 h后,其凋亡率分别为3.96%±0.79%、5.74%±0.73%、13.34%±1.77%和25.24%±2.55%,而EPZ005687对正常骨髓CD34+细胞的凋亡影响较小;在0.5、1、5和10μmol/L浓度下CD34+细胞凋亡率分别为3.64%±0.62%、4.28%±0.99%、6.18%±1.19%和7.56%±1.34%;0.5、1、5和10μmol/L浓度的EPZ005687分别作用于U937细胞12 h至96 h,作用CD34+细胞1至5 d,明显观察到EPZ005687显著抑制U937细胞的增殖且呈剂量依赖性,而对正常CD34+细胞的增殖抑制并不明显。细胞周期分析显示,1μmol/L EPZ005687作用72 h可使U937细胞明显阻滞于G1期(64.18%±13.27%vs 49.43%±12.54%),S期细胞比例明显下降低(9.67%±2.61%vs 15.26%±5.58%),而正常CD34+细胞因多数细胞位于G1期,S期细胞较少而不受其影响。进一步的H3K27组蛋白甲基化检测分析显示,EZP005687可明显地降低U937细胞的H3K27组蛋白甲基化,而不降低正常CD34+细胞的H3K27组蛋白甲基化。结论:组蛋白H3K27甲基化抑制剂EPZ005687明显抑制U937细胞的增殖,诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞,但对正常造血细胞CD34+影响较小,可作为一种潜在的血液肿瘤治疗药物应用于临床。

CD_3^+ CD_(56)^+ NKT细胞在中晚期胃癌治疗中的临床疗效观察

目的:评估CD3+CD56+NK T细胞治疗73例中晚期胃癌的疗效及不良反应。方法:血细胞分离机采集患者外周血单个核细胞,加入细胞因子rhINF-γ、rhIL-2、rhIL-1及CD3McAb培养,10 d后定向诱导成CD3+CD56+NKT细胞,分次回输给患者,每疗程回输细胞总数为(5~10)×109个。治疗4 w后,用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群状态及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应。结果:在73例接受治疗的患者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为37例(50.68%),稳定(SD)21例(28.76%),进展(PD)15例(20.54%);CD3、CD4、CD8T细胞的百分比在治疗后均较治疗前显著增高(P<0.05),且72.60%(53例)的患者CD4/CD8比例调整至正常;80.82%(59例)的患者治疗后Th1类细胞因子分泌增加,61.64%(45例)的患者Th1/Th2细胞因子比例恢复平衡;治疗后42例食欲增加,51例体力及睡眠改善,23例体重回升大于治疗前体重的5%;输注后的副反应包括寒颤、发热、呕吐、兴奋失眠、皮疹、疲乏,经对症处理后短时缓解,无1例出现毛细血管渗漏综合征(SCLS)及实质脏器的损害。结论:过继性CD3+CD56+NKT细胞输注治疗能显著调整中晚期胃癌患者的免疫功能,改善临床症状,是一种安全、有效的辅助治疗手段。

CD3^+CD56^+T细胞的免疫学特性及其抗肿瘤作用

ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞由于在正常人外周血含量甚微，所以其特性很久以来不被认识，近年来通过对ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞的研究，表明了其在抗肿瘤方面所显示出来的作用。本文就ＣＤ３＋ＣＤ５６＋细胞来源。

组蛋白去乙酰化酶3对外周CD4^(+)T细胞分化的影响

目的探讨组蛋白去乙酰化酶3(HDAC3)对外周CD4^(+)T细胞分化及功能的调控作用。方法采用CD4cre酶介导Hdac3杂合基因缺失小鼠(Hdac3^(fl)/flCD4^(cre+/-))及其野生型正常对照小鼠(Hdac3^(fl)/fl,WT),流式细胞术检测HDAC3缺失对外周CD4^(+)和CD8^(+)T细胞比例和数量的影响;在体外佛波酯(PMA)和离子霉素(Ionomycin)刺激条件下,流式细胞术检测HDAC3缺失对CD4^(+)T细胞中IFN-γ、IL-4和IL-17A的表达以及Tfh细胞产生的影响;采用ELISA检测HDAC3缺失对小鼠血清IFN-γ、IL-4和IL-17表达的影响;分选Hdac3^(fl)/flCD4^(cre+/-)和WT小鼠外周初始CD4^(+)T细胞,分别在Th1和Th2分化条件下培养,细胞内染色检测HDAC3缺失对Th1、Th2以及Th17相关细胞因子及其特异转录因子表达的影响;采用Microarray检测HDAC3缺失对CD4^(+)T细胞分化亚群相关基因表达的影响;采用链脲佐菌素(STZ)处理小鼠构建Ⅰ型糖尿病(TIDM)疾病模型,检测HDAC3缺失对TIDM发病的影响。结果与WT小鼠相比,Hdac3^(fl)/flCD4^(cre+/-)小鼠外周CD4^(+)和CD8^(+)T细胞的比例和数量显著降低。Hdac3^(fl)/flCD4^(cre+/-)小鼠CD4^(+)T细胞及血清中IFN-γ的表达显著降低,而IL-4和IL-17A的表达显著增加,Tfh细胞比例也显著增加;HDAC3缺失抑制体外培养CD4^(+)T细胞向Th1分化但促进其向Th2分化;Microarray检测发现HDAC3缺失导致Th1型细胞谱系基因表达降低,而Th2、Th17以及Tfh细胞谱系基因表达增加;在STZ诱导条件下,HDAC3缺失抑制小鼠T1DM的发生和CD4^(+)T细胞向Th1分化。结论HDAC3促进外周CD4^(+)T细胞向Th1细胞分化并加重T1DM的发生。

CD3^(+)T细胞趋化因子受体在反复肺炎患儿血清中的表达水平及临床意义

目的探讨外周血CD3+T细胞趋化因子受体在反复肺炎患儿血清中的表达水平及临床意义。方法选取2019年10月至2021年1月该院98例反复肺炎患儿作为观察组,另选取同期88例急性肺炎患儿为对照1组,80例健康体检儿童为对照2组。比较3组CXCR1、CXCR2及肺功能[用力肺活量(FVC)、第1秒用力呼气容积(FEV 1)、最大呼气流量(PEF)]水平,分析反复肺炎患儿CXCR1、CXCR2与肺功能相关性,比较1年内再次发作患儿与未发作患儿一般资料及CXCR1、CXCR2水平,分析再次发作的危险因素,以及CXCR1、CXCR2对再次发作的预测价值。结果观察组CXCR1、CXCR2水平较对照1组、对照2组高,对照1组CXCR1、CXCR2水平较对照2组高,观察组、对照1组FVC、FEV 1、PEF较对照2组低(P<0.05),但观察组与对照1组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。CXCR1、CXCR2与FVC、FEV 1、PEF呈负相关(P<0.05)。1年内再次发作患儿营养状况较未发作患儿差(P<0.05),CXCR1、CXCR2水平较未发作患儿高(P<0.05);CXCR1、CXCR2水平高为反复肺炎患儿再次发作的危险因素(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析显示,CXCR1、CXCR2联合预测再次发作的曲线下面积(AUC)为0.797,高于单独预测(P<0.05)。结论反复肺炎患儿外周血CD3+T细胞趋化因子受体CXCR1、CXCR2水平明显升高,且与肺功能密切相关,通过测定CXCR1、CXCR2水平不仅能评估病情程度,还可对再次发作风险进行评估。

CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞及其细胞因子在Graves病患者体内的表达

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞(NKT细胞)及其细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]在毒性弥漫性甲状腺肿[Graves病(GD)]患者体内的表达情况。方法选择19例GD患者作为实验组,另选择19例健康志愿者作为对照组。检测并比较两组甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、IL-6、TNF-α及NKT细胞水平,IL-2、IL-10阳性率,探讨FT4、TSH、TPOAb与NKT细胞及细胞因子的相关性。结果实验组FT3、FT4、TPOAb、TNF-α和NKT细胞水平均高于对照组,TSH和IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组IL-2和IL-10阳性率分别为89.47%、100.00%,均高于对照组的0、0,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-2、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平与FT4、TSH和TPOAb水平密切相关,IL-6水平与TSH水平密切相关(P<0.05)。以TSH水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TSH水平呈负相关(P<0.05)。以TPOAb水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TPOAb水平呈负相关(P<0.05)。结论GD患者外周血NKT细胞水平增加,其相关的细胞因子在GD发病中具有重要意义。

CD3^+CD56^+NKT样细胞在急性白血病患者体内表达的研究

目的探讨CD3+CD56+NKT样细胞在急性白血病患者治疗前后体内的表达情况。方法分别取急性白血病(急性髓系白血病43例,急性淋巴细胞白血病12例,急性混合细胞白血病5例)及非恶性肿瘤(10例)患者骨髓血2ml送流式细胞仪检测,比较白血病患者治疗前后及非恶性肿瘤患者体内CD3+CD56+NKT样细胞的表达情况。结果急性白血病患者初治组与非恶性肿瘤患者对照组间比较,急性白血病患者骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比对照组低(P<0.01);急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例明显比治疗前高(P<0.01),且与缓解程度及时间呈正相关;急性白血病患者治疗后骨髓中CD3+CD56+NKT样细胞比例与非恶性肿瘤对照组比较无统计学意义(P>0.05);不同类型白血病之间,急性早幼粒细胞白血病治疗后CD3+CD56+NKT样细胞比例明显较其他类型高(P<0.05),急性髓系白血病(除M3外)与急性淋巴细胞白血病之间比较CD3+CD56+NKT样细胞比值结果比较无统计学意义(P>0.05)。结论急性白血病患者CD3+CD56+NKT样细胞反映了机体的免疫功能,化疗后CD3+CD56+NKT样细胞明显增多可能是预后较好的标志之一。