人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。

CD_3^+ CD_(56)^+ NKT细胞在中晚期胃癌治疗中的临床疗效观察

目的:评估CD3+CD56+NK T细胞治疗73例中晚期胃癌的疗效及不良反应。方法:血细胞分离机采集患者外周血单个核细胞,加入细胞因子rhINF-γ、rhIL-2、rhIL-1及CD3McAb培养,10 d后定向诱导成CD3+CD56+NKT细胞,分次回输给患者,每疗程回输细胞总数为(5~10)×109个。治疗4 w后,用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群状态及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应。结果:在73例接受治疗的患者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为37例(50.68%),稳定(SD)21例(28.76%),进展(PD)15例(20.54%);CD3、CD4、CD8T细胞的百分比在治疗后均较治疗前显著增高(P<0.05),且72.60%(53例)的患者CD4/CD8比例调整至正常;80.82%(59例)的患者治疗后Th1类细胞因子分泌增加,61.64%(45例)的患者Th1/Th2细胞因子比例恢复平衡;治疗后42例食欲增加,51例体力及睡眠改善,23例体重回升大于治疗前体重的5%;输注后的副反应包括寒颤、发热、呕吐、兴奋失眠、皮疹、疲乏,经对症处理后短时缓解,无1例出现毛细血管渗漏综合征(SCLS)及实质脏器的损害。结论:过继性CD3+CD56+NKT细胞输注治疗能显著调整中晚期胃癌患者的免疫功能,改善临床症状,是一种安全、有效的辅助治疗手段。

CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞及其细胞因子在Graves病患者体内的表达

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞(NKT细胞)及其细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]在毒性弥漫性甲状腺肿[Graves病(GD)]患者体内的表达情况。方法选择19例GD患者作为实验组,另选择19例健康志愿者作为对照组。检测并比较两组甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、IL-6、TNF-α及NKT细胞水平,IL-2、IL-10阳性率,探讨FT4、TSH、TPOAb与NKT细胞及细胞因子的相关性。结果实验组FT3、FT4、TPOAb、TNF-α和NKT细胞水平均高于对照组,TSH和IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组IL-2和IL-10阳性率分别为89.47%、100.00%,均高于对照组的0、0,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-2、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平与FT4、TSH和TPOAb水平密切相关,IL-6水平与TSH水平密切相关(P<0.05)。以TSH水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TSH水平呈负相关(P<0.05)。以TPOAb水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TPOAb水平呈负相关(P<0.05)。结论GD患者外周血NKT细胞水平增加,其相关的细胞因子在GD发病中具有重要意义。

妊娠期Graves病患者体内CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达与妊娠结局的相关性研究

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病(grave disease,GD)患者体内的表达情况及其与妊娠结局的相关性。方法选取2018年10月至2021年3月东莞东华医院收治的53例妊娠期GD患者作为GD组,同期选取53例正常妊娠者作为对照组。依据随访结果将GD组分为正常结局组、流产组、产后出血组、低出生体重儿组4个亚组。采用流式细胞仪检测CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目。抽取外周静脉血检测2组甲状腺激素游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)的水平及甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)和促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)的滴度。比较GD组与对照组间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目与甲状腺激素、甲状腺激素抗体指标水平。分析GD组患者NKT细胞与甲状腺功能指标的相关性,GD组各亚组患者间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞数目差异,并分析细胞数目与妊娠结局的相关性。结果GD组患者外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平与外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。流产组、产后出血组、低出生体重儿组患者血清中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的平均数目均低于正常结局组,差异具有统计学意义(P<0.05);调控年龄、BMI等因素后,CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目仍然是流产等不良妊娠结局的独立危险因素。结论CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病患者体内表达降低,并与Graves病严重程度及不良妊娠结局具有一定的相关性,积极检测妊娠期Graves病患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达水平具有重要的临床应用价值。

CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法使用流式细胞分析外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3^-CD56^+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的功能下降明显。结论急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。

CD3^+CD56^+T细胞大颗粒淋巴细胞白血病一例

患者，男，72岁，因反复发热、乏力3个月于2007年2月28日收住我院。患者2006年12月初开始出现无诱因间断性发热，体温波动于38．5℃左右，伴乏力、纳差。2007年1月当地医院查血常规：wBC10．0×10^9／L．Hb128g／L，BPC79×10^9／L；血细胞分类：中性粒细胞0．11、淋巴细胞0．72、异形淋巴细胞0．17；骨髓象：增生活跃，异形淋巴细胞0．165。诊断为传染性单核细胞增多症，予地塞米松10mg／d静脉注射、阿昔洛韦及保肝治疗后，体温降至正常，乏力症状有所改善，但停药后再次出现持续发热，体温最高40℃。

孪生兄弟共患皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤

皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤(SPTCL)是一种细胞毒性T淋巴细胞淋巴瘤,主要累及皮下组织,临床少见。笔者分析孪生兄弟共患SPTCL的临床资料,为临床提供参考,报道如下:1临床资料例1患者男,27岁,因“发热伴左上臂及左胸部皮下结节”于2012年6月27日就诊我院行左上臂皮肤活检,病理提示脂肪组织中见异型淋巴样细胞浸润伴多量凋亡,考虑为SPTCL;免疫组化:CD3^+,CD20^-,CD79a^-,CD5^+,部分细胞CD4^+,CD8^+,CD56^-,CD30^-,颗粒酶B+,P53(+/-),细胞增殖抗原标记物(Ki67)50%。骨髓常规:涂片淋巴样组织细胞易见,考虑淋巴瘤可能,嗜血粒细胞比例增高4%。

ILT3在冠心病患者外周血单核细胞的表达及意义

目的探讨冠心病患者外周血单个核细胞(PBMC)中免疫球蛋白样转录子(ILT)3的表达与临床意义。方法依据临床资料将100例冠心病患者分为稳定型心绞痛(SAP)组45例,急性冠状动脉综合征(ACS)组55例。用流式细胞术(FACS)检测PBMC中ILT3的表达百分比,分离培养各组外周血树突细胞脐周血分离的CD4^+T淋巴细胞混合培养(MLR),用FACS法检测CD4^+CD25^+T百分比和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测混合液中的白细胞介素(IL)-10、干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子(TNF)-β细胞因子含量。结果SAP组与ACS组PBMC中ILT3阳性百分比分别为〔(80.13±2.10)%、(1.83±0.91)%〕,差异有统计学意义(P<0.01)。SAP组CD4^+CD25^+T淋巴细胞百分比〔(89.2±2.3)%〕,较ACS组〔(39.5±5.3)%〕显著升高(P<0.01)。MLR上清液中SAP组较ACS组IL-10浓度明显升高,IFN-γ和TNF-β浓度明显降低,有统计学意义(P<0.01)。结论SAP患者的PBMC中ILT3表达明显升高,能诱导CD4+T淋巴细胞的CD4+CD25+T亚型表达增加,ILT3可能参与维持冠状动脉斑块稳定的免疫抑制。

Ⅲ期结直肠癌中NLRC3与预后和肿瘤免疫的关系

目的:探讨核苷酸寡聚化结构域样受体家族半胱天冬酶募集结构域蛋白3(nucleotide binding oligomerization domain-like receptor family caspase recruitment domain containing 3,NLRC3)与Ⅲ期结直肠癌的预后及肿瘤免疫相关指标的关系。方法:回顾性收集中南大学湘雅医院2012年至2013年122例经手术根治切除的Ⅲ期结直肠癌患者的相关资料。利用免疫组织化学法分析NLRC3与CD8^+T细胞的表达情况,利用患者的术前临床资料计算中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophil to lymphocyte ratio,NLR),并检测其微卫星稳定性。采用χ~2检验分析NLRC3与临床病理因素之间的关系,采用COX回归模型分析Ⅲ期结直肠癌的独立预后因素。结果:在Ⅲ期结直肠癌中,肿瘤组织CD8^+T细胞浸润分期(χ~2=27.79,P<0.01)、NLR值(χ~2=6.35,P<0.05)、淋巴结转移分期(χ~2=10.12,P<0.01)以及微卫星稳定性(χ~2=6.05,P<0.05)与NLRC3的表达有关。NLRC3(OR=0.066,95%CI:0.020～0.218)、血管癌栓(OR=3.119,95%CI:1.547～6.286)及NLR(OR=5.103,95%CI:2.465～10.563)对Ⅲ期结直肠癌的5年总生存期(overall survival,OS)有影响(均P<0.05);另外,NLRC3(OR=0.144,95%CI:0.055-0.377)、血管癌栓(OR=3.589,95%CI:1.859～6.932)及NLR(OR=2.939,95%CI:1.509～5.723)对Ⅲ期结直肠癌的无病生存期(disease free survival,DFS)同样有影响(均P<0.05)。结论:NLRC3,血管癌栓和NLR是Ⅲ期结直肠癌的独立预后因素。NLRC3通过抑制系统性炎症、促进局部抗肿瘤免疫而使Ⅲ期结直肠癌患者具有良好的预后。

多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞的免疫表型

目的:用多种细胞因子联合诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为细胞因子诱导的杀伤(cytokine-induced killer,CIK)细胞,并了解其在体外的增殖能力及免疫表型的变化. 方法:用Ficoll Hypaque淋巴细胞分离液分离获取10例大肠癌患者外周血单个核细胞,rhIFN-γ,rhIL-2,Anti- CD3mAb共孵育.分别在第0,4,7,10,13 d计细胞数,并通过流式细胞术检测细胞免疫表型. 结果:大肠癌患者外周血单个核细胞与IFN-γ,IL-2,Anti- CD3mAb共孵育4,7,10,13d,细胞数分别增加2.69±0.9, 14.1±3.7,23.0±5.0和31.2±3.0倍.CD3+,CD4+,CD8+ 和CD3+CD16+CD56+细胞在培养第13 d分别从(62.8±7.6)%, (31.5±5.8)%,(44.9±8.2)%和(1.9±0.9)%增加到(90.6±9.0)%,(48.0±6.3)%,(57.3±9.0)%和(41.0±12.7)%. 结论:rhIFN-γ,rhIL-2和Anti-CD3mAb能诱导大肠癌患者外周血单个核细胞为CIK细胞,体外增殖力强,是以CD3+CD16+CD56+为主的异质细胞群.

HIV感染合并肺部感染患者 CD3+CD4+-T细胞表达的研究

目的探讨α干扰素(Interferon-α,IFN-α)、干扰素诱导基因56(Interferon-stimulated gene 56,ISG56)、粘病毒抵抗蛋白A(Myxovirus resistance protein A,MxA)、免疫调控受体程序性死亡分子1(Programmed death-1,PD-1)和T细胞免疫球蛋白及免疫酪氨酸样抑制基序(T cell immunoglobulin and ITIM domain,TIGIT)对人类免疫缺陷病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)合并肺部感染患者CD3^+CD4^+-T细胞表达的影响。方法选取2016年12月-2017年12月于余姚市市人民医院就诊的52例HIV合并肺部感染患者作为研究组进行研究,另选择同期48例HIV未合并肺部感染患者作为对照组,检测患者外周血CD3^+CD4^+-T细胞表面的IFN-α、ISG56、MxA、PD-1和TIGIT指标水平情况。结果研究组CD3^+CD4^+-T细胞比例高于对照组(P<0.05);研究组IFN-α、ISG56、MxA分别为(15.82±5.31)、(0.74±0.22)、(0.83±0.14)pg/ml低于对照组(P<0.001);研究组TIGIT和PD-1的CD3^+CD4^+-T细胞分别为(23.61±12.83)%、(51.32±13.74)%高于对照组(P<0.05);研究组TIGIT CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.027);与病毒载量呈正相关(P=0.001);研究组PD-1CD3^+CD4^+-T细胞表面百分数与CD4+-T细胞绝对数呈负相关(P=0.026);与病毒载量无相关性(P=0.711)。结论HIV合并肺部感染患者,CD3^+CD4^+-T细胞占比上升,IFN-α、ISG56、MxA降低,TIGIT和PD-1升高,相关指标变化证明当受到感染时机体免疫功能会发生紊乱,且与HIV疾病进展具有一定程度的相关性,具有一定的临床价值。

性别因素对成人急性乙型肝炎早期病毒清除的影响

目的 探讨性别因素对成人急性乙型肝炎早期病毒清除的影响。方法 统计处理采用SPSS11．5软件。男性与女性病人之间血清病毒清除率的比较采用χ^2检验，男性与女性病人之间年龄、病程及外周血免疫细胞绝对计数的比较采用t检验，年龄与病程、血清病毒水平及外周血免疫细胞绝对计数之间的相关分析采用Spearman等级相关法，性别、年龄及外周血免疫细胞对血清病毒清除的影响采用二分类logistic逐步回归分析。结果 男性病人HBsAg转阴率为23.21％，女性病人HBsAg转阴率为53．57％；男性与女性病人之间HBsAg转阴率有显著性差异(P=0．005)。男性病人HBeAg转阴率为44．64％，女性病人HBeAg转阴率为71．43％；男性与女性之间病人HBeAg转阴率有显著性差异(P=0．020)。男性病人HBV DNA转阴率为44．64％，女性病人HBVDNA阴转率为50．00％；男性与女性病人之间HBV DNA转阴率无显著性差异(P=0．643)。男性与女性病人之间年龄、病程无显著性差异；男性与女性病人之间单核细胞、淋巴细胞、CD19^+淋巴细胞、CD56^+淋巴细胞、CD8^+淋巴细胞绝对计数及CD4^+，CD8^+比值均无显著性差异(P>0．05)；男性病人CD3^+淋巴细胞、CD4^+淋巴细胞绝对计数显著低于女性病人(P=0．014，P=0．036)。年龄与病程之间呈显著正相关(P=0．010)；年龄与血清HBsAg、HBeAg及HBVDNA水平之间呈显著负相关(P=0．001，P=0．002，P=0．015)。病程与血清HBsAg、HBVDNA水平之间无显著相关性(P>0．05)，与血清HBeAg水平之间呈显著负相关(P=0．005)。根据Logistic逐步回归法分析的结果，男性病人HBsAg和HBeAg转阴的机会显著小于女性病人(OR=6．654，P=0．002和OR=3．784，P=0．016)。结论 性别为影响成人急性乙型肝炎早期病毒清除的一个重要因素，其机制可能是男性病人清除HBV的免疫应答相对较弱。