艾灸对荷瘤胃癌大鼠外周血中CD3^-CD161^+NK与CD3^+CD161^+NKT含量的影响

目的探讨艾灸对荷瘤模型大鼠外周血中CD3^-CD161^+NK(Nature kill cell,自然杀伤细胞)、CD3^+CD161^+NKT(Nature kill T cell,自然杀伤T细胞)含量的影响。方法 50只健康SD大鼠,雌雄各半,随机分为空白组、假手术组、模型组、艾灸组、红外组5组,每组10只。采用Walker-256细胞株来源的瘤组织原位种植法制备胃癌模型。造模成功后艾灸组进行中脘、足三里等穴位悬灸,红外组进行腹背部胃体表投影区域的短波红外线照射,每次20 min,每日1次,连续21 d。期间密切观察大鼠行为学变化,记录体质量、饮食、饮水情况。第22天,各组大鼠禁食不禁水12 h后,眼眶采血,流式细胞法测外周血中CD3^-CD161^+NK、CD3^+CD161^+NKT含量变化。结果与空白组比较,模型组大鼠成模后体质量、食量明显降低,外周血中CD3^+CD161^+NKT增加(P<0.05)。与模型组比较,艾灸组大鼠干预中、后期体质量,食量增加,外周血中CD3^-CD161^+NK、CD3^+CD161^+NKT增加(P<0.05)。与红外组比较,艾灸组大鼠体质量、食量、外周血中CD3^-CD161^+NK、CD3^+CD161^+NKT增加更明显(P<0.05)。结论艾灸能增加胃癌SD大鼠体质量,恢复食量,改善胃癌大鼠状态,其机制可能与外周血中CD3^-CD161^+NK、CD3^+CD161^+NKT含量增加,细胞免疫增强有关。

人外周血Vα24 NKT细胞和CD3^+CD56^+CIK细胞生物学特性的比较研究

目的进一步认识Vα24 NKT细胞和CIK细胞在生物学特性的差异。方法从人外周血单个核细胞扩增NKT细胞和CIK细胞;经免疫磁珠纯化获得高纯度的TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞。运用流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的表型、细胞因子和细胞坏死相关因子的表达情况,并用DIOC18染色及流式细胞术测定纯化后的NKT细胞和CIK细胞的细胞杀伤活性。结果经纯化TCRVα24+Vβ11+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞的纯度均达到>90%;纯化后的Vα24 NKT细胞多数为CD4+和DN NKT细胞,高表达TCRVα24、Vβ11、CD3、CD161,低表达CD56;而纯化后的CIK细胞则以CD8+T细胞为主,高表达CD3、CD56,低表达CD161,几乎不表达TCRVα24和Vβ11。在抗原刺激下,CD3+CD56+CIK细胞的IFN-γ、TNF-α、Perforin、FasL、TRAIL表达水平均高于NKT细胞,但CD3+CD56+CIK细胞几乎不分泌IL-4,而NKT细胞则分泌高水平的IL-4;CD3+CD56+CIK细胞对肿瘤细胞株K562、U937、Jurkat的杀伤率均远远高于NKT细胞。结论TCRVα24+NKT细胞和CD3+CD56+CIK细胞是两类完全不同的细胞群,在抗肿瘤免疫和免疫调节中可能起着不同的作用。

CD_3^+ CD_(56)^+ NKT细胞在中晚期胃癌治疗中的临床疗效观察

目的:评估CD3+CD56+NK T细胞治疗73例中晚期胃癌的疗效及不良反应。方法:血细胞分离机采集患者外周血单个核细胞,加入细胞因子rhINF-γ、rhIL-2、rhIL-1及CD3McAb培养,10 d后定向诱导成CD3+CD56+NKT细胞,分次回输给患者,每疗程回输细胞总数为(5~10)×109个。治疗4 w后,用流式细胞仪检测患者外周血T细胞亚群状态及细胞因子水平,以评价细胞免疫功能,结合临床指标综合评价疗效,同时观察不良反应。结果:在73例接受治疗的患者中,部分缓解(PR)+微效(MR)为37例(50.68%),稳定(SD)21例(28.76%),进展(PD)15例(20.54%);CD3、CD4、CD8T细胞的百分比在治疗后均较治疗前显著增高(P<0.05),且72.60%(53例)的患者CD4/CD8比例调整至正常;80.82%(59例)的患者治疗后Th1类细胞因子分泌增加,61.64%(45例)的患者Th1/Th2细胞因子比例恢复平衡;治疗后42例食欲增加,51例体力及睡眠改善,23例体重回升大于治疗前体重的5%;输注后的副反应包括寒颤、发热、呕吐、兴奋失眠、皮疹、疲乏,经对症处理后短时缓解,无1例出现毛细血管渗漏综合征(SCLS)及实质脏器的损害。结论:过继性CD3+CD56+NKT细胞输注治疗能显著调整中晚期胃癌患者的免疫功能,改善临床症状,是一种安全、有效的辅助治疗手段。

αβ-TCR^+CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞:一种新发现的免疫调节T细胞

免疫系统对自身或异体抗原产生免疫耐受的主要机制之一 ,是免疫调节T细胞的抑制性调节反应。此理论已在数种进行器官移植和自身免疫研究的动物模型中被证实。现已明确 ,免疫调节T细胞由多种不同的细胞亚型所组成。最近发现 ,一种新的抗原特异性αβ TCR+ CD4 CD8 免疫调节T细胞 (双阴性T细胞 ,DNT )能够抑制具有相同T细胞受者特异性的CD8+和CD4 + T细胞 ,从而抑制异体皮肤移植的排斥反应。有关DN调节T细胞及其独特抑制机制的研究 ,对于了解受者如何获得针对供体移植器官的特异性耐受 ,及正确理解如何保持对自身抗原的外周免疫耐受 。

CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞及其细胞因子在Graves病患者体内的表达

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞(NKT细胞)及其细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]在毒性弥漫性甲状腺肿[Graves病(GD)]患者体内的表达情况。方法选择19例GD患者作为实验组,另选择19例健康志愿者作为对照组。检测并比较两组甲状腺功能指标[血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3)、血清游离甲状腺素(FT4)、促甲状腺激素(TSH)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)]、IL-6、TNF-α及NKT细胞水平,IL-2、IL-10阳性率,探讨FT4、TSH、TPOAb与NKT细胞及细胞因子的相关性。结果实验组FT3、FT4、TPOAb、TNF-α和NKT细胞水平均高于对照组,TSH和IL-6水平均低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。实验组IL-2和IL-10阳性率分别为89.47%、100.00%,均高于对照组的0、0,差异有统计学意义(P<0.05)。IL-2、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平与FT4、TSH和TPOAb水平密切相关,IL-6水平与TSH水平密切相关(P<0.05)。以TSH水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α、NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TSH水平呈负相关(P<0.05)。以TPOAb水平为因变量,IL-2、IL-6、IL-10、TNF-α和NKT细胞水平为自变量,采用进入法纳入变量,结果显示IL-10水平与TPOAb水平呈负相关(P<0.05)。结论GD患者外周血NKT细胞水平增加,其相关的细胞因子在GD发病中具有重要意义。

妊娠期Graves病患者体内CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达与妊娠结局的相关性研究

目的探讨CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病(grave disease,GD)患者体内的表达情况及其与妊娠结局的相关性。方法选取2018年10月至2021年3月东莞东华医院收治的53例妊娠期GD患者作为GD组,同期选取53例正常妊娠者作为对照组。依据随访结果将GD组分为正常结局组、流产组、产后出血组、低出生体重儿组4个亚组。采用流式细胞仪检测CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目。抽取外周静脉血检测2组甲状腺激素游离三碘甲状腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游离甲状腺素(free thyroxine,FT4)的水平及甲状腺过氧化物酶抗体(thyroid peroxidase antibody,TPOAb)、甲状腺球蛋白抗体(thyroglobulin antibody,TGAb)和促甲状腺素受体抗体(thyrotropin receptor antibody,TRAb)的滴度。比较GD组与对照组间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目与甲状腺激素、甲状腺激素抗体指标水平。分析GD组患者NKT细胞与甲状腺功能指标的相关性,GD组各亚组患者间CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞数目差异,并分析细胞数目与妊娠结局的相关性。结果GD组患者外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目明显低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平明显高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。相关性分析显示,GD组患者血清中FT_(3)、FT_(4)、TPOAb、TGAb和TRAb水平与外周血中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目呈负相关,差异具有统计学意义(P<0.05)。流产组、产后出血组、低出生体重儿组患者血清中CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的平均数目均低于正常结局组,差异具有统计学意义(P<0.05);调控年龄、BMI等因素后,CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞的数目仍然是流产等不良妊娠结局的独立危险因素。结论CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞在妊娠期Graves病患者体内表达降低,并与Graves病严重程度及不良妊娠结局具有一定的相关性,积极检测妊娠期Graves病患者CD3^(+)CD56^(+)NKT细胞表达水平具有重要的临床应用价值。

系统性红斑狼疮患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化的临床意义

分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化。94例SLE患者作为研究对象,另选取同期健康体检者50例为对照组。结果显示SLE组CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和百分率均明显低于对照组(P<0.05);Pearson积差分析显示CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数与SLEDAI评分和24 h尿蛋白定量呈明显负相关性(P<0.05);以8.04%为临界值,CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数判断SLE活动性的灵敏度为57.78%,特异度为78.57%,AUC为0.677。实验表明SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞表达明显减少,观察其表达水平变化可为判断病情活动度和肾功能损害提供参考依据。

慢性肝脏疾病中CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT细胞亚群的变化研究

目的探讨CD3^-CD161^＋NK、CD3^＋CD161^＋NKT细胞在慢性肝炎／肝硬化及肝细胞癌患者肝脏组织及外周血中表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎／肝硬化患者肝脏组织及外周血、15例正常肝脏组织、48例正常人外周血中的CD3^-CD161^＋NK和CD3^＋CD161^＋NKT进行定量分析。结果慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（13．4±1．3）％]和肝细胞癌癌周组CD3^-CD161^＋NK细胞[（16．7±4．8）％]及远离肝癌组的肝脏组织CD3^-CD161^＋NK细胞[（22．0±4．4）％]与正常肝脏组织CD3^＋CD161^＋NK细胞[（35．1±7．2）％]相比，肝细胞癌癌周肝脏组织内含量最低（t值分别为2．301、2．137、2．034，P〈0．05）；外周血中肝细胞癌组CD3^-CD161^＋NK细胞f（11．6±6．3％）]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（14．7±6．2）％]与慢性肝炎／肝硬化组CD3^-CD161^＋NK细胞[（10．8±1．7）％]、CD3^＋CD161^＋NKT细胞[（12．5±0．8）％]、正常对照组CD3^＋CD161^＋NK细胞[（7．5±0．8）％]、CD3^-CD161^＋NKT细胞[（13．8±1．7）％]相比肝癌组CD3^-CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．134，2．099，P〈0．05），肝癌组CD3^＋CD161^＋NKT细胞含量最高（t值分别为2．125，2．154，P〈0．05）。结论由于NK细胞及NKT细胞数量减少或／和活性降低，使肿瘤细胞逃逸了免疫监视，可能促进了肿瘤的发生、发展及转移。

肝细胞癌患者外周血中调节性T细胞、NK细胞及NKT细胞的表达及意义

目的探讨CD4+CD25+调节性T细胞、CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞在肝细胞癌患者外周血中的表达及意义。方法利用流式细胞仪对31例肝细胞癌患者、59例慢性肝炎、肝硬化患者及48例正常人外周血中的CD4+CD25+调节性T细胞、CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞进行定量分析。结果肝细胞癌组外周血中CD4+CD25+T细胞较正常对照组及慢性肝炎、肝硬化组明显减少(P<0.05),肝细胞癌组外周血中CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞较正常对照组及慢性肝炎、肝硬化组明显增加(P<0.05)。结论 CD4+CD25+调节性T细胞可能通过对CD3-CD57+NK细胞及CD3+CD57+NKT细胞功能的抑制参与了肝癌细胞的免疫逃逸作用。

CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞在急性白血病患者中的变化

目的通过分析急性白血病患者发病时以及缓解时外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量以及功能变化,进一步了解急性白血病患者免疫功能状态。方法使用流式细胞分析外周血CD3^-CD56^+NK细胞及CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的数量,同时分析上述两群细胞内的干扰素表达水平来评估细胞的功能。结果CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞数量在急性白血病发病时显著增加,经化疗获得完全缓解后数量又下降到正常健康人水平,并且无论在发病时还是缓解时CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞内干扰素水平均明显下降。CD3^-CD56^+NK细胞的变化有所不同,在发病时数量以及功能改变均不明显,而在疾病缓解时,急性淋巴细胞白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的数量下降明显,急性髓系白血病患者CD3^-CD56^+NK细胞的功能下降明显。结论急性白血病患者发病时可能产生免疫反应,但免疫细胞功能缺陷可能参与疾病的发生进展,其中CD3^+CD56^+NKT样淋巴细胞的变化可能与疾病的关系更密切,且急性髓系白血病患者免疫细胞功能异常更明显。

CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞与系统性红斑狼疮活动的相关性研究

目的探讨SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞的表达水平及其临床意义。方法流式细胞术检测134例SLE患者、90名健康对照外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数及占淋巴细胞百分比,ELISA法测定血清抗核抗体、抗dsDNA抗体、抗C1q抗体水平;Logistic多元逐步回归分析SLE患者疾病活动的独立危险因素,Pearson或Spearman相关分析CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞与SLE患者临床指标的相关性,多元逐步回归分析影响CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞的独立危险因素。结果SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和占淋巴细胞百分比[(151±126)%,(10±7)%,134例]均低于健康对照组[(404±261)%,(19±9)%,90名](t=-12.218,P<0.01;t=-9.606,P<0.01)。活动组SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和占淋巴细胞百分比[(94±67)%,(9±6)%,54例],均低于非活动组[(189±142)%,(11±6)%,80例](t=-4.586,P<0.01;t=-2.241,P=0.027)。外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和百分比、病程、尿蛋白定量(24 h)、ESR、C4均与SLE患者疾病活动的独立相关(OR=0.990、0.936、0.979、1.813、1.040、0.183,P均<0.05)。而SLEDAI评分与SLE患者CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数独立相关(β=-0.358,P<0.01)。结论SLE患者外周血中CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数及百分比是SLE患者疾病活动的独立危险因素,外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞下降可能在SLE发生、进展中扮演重要角色。

调节T细胞在梅毒患者中的表达及临床意义

目的探讨梅毒患者外周血T细胞亚群及调节T细胞在梅毒病人发病中的临床意义。方法采用流式细胞术检测了32例梅毒患者以及30例健康体检者外周血T细胞亚群CD3、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、CD4+CD45RA+、CD4+CD29+、CD8+CD28+、CD8+CD28-、NK细胞以及CD3+CD4+CD8-和CD4+CD25+调节T细胞水平。结果与正常对照组相比,梅毒患者NK细胞的百分率明显降低(P<0.01),CD4+CD25+和CD3+CD4-CD8-调节T细胞的百分率明显升高(P<0.01),其它T细胞亚群无明显变化。结论梅毒患者NK细胞,CD4+CD25+和CD3+CD4-CD8-调节T细胞的异常变化可能是梅毒患者RPR持续阳性或临床症状反复,经久不愈的原因所在。

“双阴性”T细胞与系统性红斑狼疮

系统性红斑狼疮(SLE)是典型的自身免疫疾病,其发病率、死亡率都较高.炎性因子和自身抗体的产生与SLE发病机制密切相关.研究发现,SLE患者的外周血中TCRαβ^+CD3^+CD4^-CD8^-T细胞(简称“双阴性”T细胞,DN-T细胞)数量明显增多,且与SLE的活动相关,其起源和功能尚不清楚.越来越多的研究认为DN-T细胞中环磷酸腺苷响应元件调节因子α(CREMα)的过表达和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的激活是SLE病理生理中的关键因素.本文主要介绍DN-T细胞的起源、功能特性及在SLE的致病作用,以寻求治疗SLE的新途径.

探索Th17细胞在急性髓细胞白血病中的作用

目的:探索急性髓细胞白血病(AML)骨髓中Th17细胞及其相关因子在AML发生与发展中的作用。方法:选取初诊AML患者23例,另取25名健康志愿者为对照。采用流式细胞仪分别测初诊AML组、初诊AML组诱导缓解后、对照组骨髓中CD3^+ CD161^+ IL-17^+ IFN-γ^+ T细胞的比例。采用ELISA法检测初诊AML组、初诊AML组诱导缓解后、对照组骨髓液中血管内皮生长因子(VEGF)、IL-17浓度;对VEGF与IL-17进行相关性分析。结果:初诊AML组骨髓中CD3^+ CD161^+ IL-17^+ IFN-γ^+ T细胞的比例为(1.52±0.10)%,初诊AML组诱导缓解后CD3^+ CD161^+ IL-17^+ IFN-γ^+ T细胞的比例为(1.36±0.06)%,对照组骨髓中CD3^+ CD161^+ IL-17^+ IFN-γ^+ T细胞的比例为(0.22±0.04)%。初诊AML组VEGF浓度(254.08±24.34)pg/ml,IL-17浓度(20.24±3.82)pg/ml;初诊AML组诱导缓解后VEGF浓度(137.37±22.51)pg/ml,IL-17浓度(10.42±2.96)pg/ml;对照组骨髓液中VEGF浓度(125.98±14.96)pg/ml,IL-17浓度(10.59±2.87)pg/ml;VEGF与IL-17呈正相关。结论:Th17细胞具有促进AML发生与发展的作用。