人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞体外扩增的实验研究

目的探讨人体外周血CD3^+CD4^-CD8^-双阴性T细胞(DNT细胞)在体外进行分离和扩增的方法。方法取健康的成人外周血20ml,应用Rosettesep抗体吸附法去除CD4^+T细胞和CD8^+T细胞;再将DNT细胞放入anti-CD3mAb包被的培养板中,并加入rhIL-2、rhIL-4,共同培养,第10天和第14天计数细胞扩增倍数及记录扩增曲线;利用Easysep免疫磁珠法纯化,采用流式细胞仪检测其纯度。结果经分选、纯化后的DNT细胞,纯度可达94%以上;体外培养第10天和第14天,DNT细胞扩增倍数分别为53倍和41倍。结论通过Rosettesep抗体吸附法及Easysep免疫磁珠法分离及纯化DNT细胞是可行的,可获得大量高纯度的DNT细胞。

原发性干燥综合征患者T细胞亚群及CD4^+CD25^+ T细胞检测的意义

目的探讨T淋巴细胞亚群及CD4+CD25+T细胞在原发性干燥综合征(PSS)患者中的检测意义。方法用流式细胞仪检测18例PSS患者以及20例健康体检者外周血CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、NK细胞(CD3-/CD16+56+)、CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节T细胞水平。结果 PSS患者与正常对照组比较,CD3+CD4+细胞亚群的百分率明显升高(P<0.05);CD4+/CD8+与对照组比较有明显升高(P<0.05);CD3+CD4-CD8-双阴性T细胞及CD4+CD25+调节性T细胞的百分率明显降低(P<0.01),其它T细胞亚群无明显变化。结论 PSS患者T淋巴细胞亚群的水平是异常的。T细胞亚群的比例异常与疾病的病程和临床表现相关联。CD3+CD4-CD8-和CD4+CD25+调节性T细胞水平降低导致机体自身免疫反应抑制功能减弱,免疫耐受状态被打破,可能是引发PSS发生发展的重要因素。

外周血DNT细胞及T细胞亚群变化与乙型肝炎慢性化的相关性研究

目的探讨外周血中CD3+CD4-CD8-(DNT)细胞及T细胞亚群变化与乙型肝炎病毒(HBV)感染慢性化的关系。方法用流式细胞术测定136例HBV感染者[33例无症状携带者(ASC)、28例急性乙型肝炎(AHB)、28例轻度慢性乙型肝炎(CHB)、25例中度CHB、22例重度CHB患者]及39名健康对照(HC)外周血中的DNT细胞及T细胞亚群。结果 ASC组、AHB组、HC组DNT细胞比例分别为5.43%±3.31%、4.75%±2.71%和4.82%±3.43%,3组间差异无统计学意义(P>0.05),其中HC组和AHB组均低于CHB各组(由轻到重分别为7.97%±4.12%、8.41%±4.93%、11.36%±5.01%,P均<0.05),但ASC组仅显著低于重度CHB组(P<0.05),与轻度CHB组和中度CHB组间差异均无统计学意义(P>0.05);DNT细胞比例在轻度CHB组与中度CHB组间差异无统计学意义(P>0.05),但二组均显著低于重度CHB组(P均<0.05)。HC组、AHB组、ASC组间T淋巴细胞亚群分布差异无统计学意义(P均>0.05),但随着CHB患者病情加重CD3+、CD3+CD4+CD8-(CD4+)细胞比例降低,CD3+CD4-CD8+(CD8+)细胞比例升高。结论外周血DNT细胞比例的升高与HBV感染者慢性化关系密切,且与CHB患者的疾病进程有关。

女性不孕不育患者DNT细胞与T细胞亚群变化及意义

目的探讨女性不孕不育患者外周血CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞(DNT细胞)与T细胞亚群变化的临床意义。方法选择106例女性不孕不育患者,其中不孕症36例,复发性流产(RSA)70例,≤30岁56例,>30岁50例。根据狼疮抗凝初筛实验结果、狼疮抗凝确认实验结果、抗精子抗体实验结果分组统计。另选38例健康体检女性作为对照。采用流式细胞术检测女性不孕不育患者和健康体检女性外周血DNT细胞与T细胞亚群。结果与健康体检女性相比,不孕不育患者CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、NK细胞的差异均无统计学意义(P>0.05),DNT细胞的差异有统计学意义(P<0.001),其中RSA患者、不孕症患者的DNT细胞均显著高于健康体检女性,差异有统计学意义(P<0.001),而RSA患者与不孕症患者的DNT细胞差异无统计学意义(P=0.090)。≤30岁患者CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、DNT、NK细胞与>30岁患者差异均无统计学意义(P>0.05)。狼疮抗凝物(LA)初筛阴性患者的DNT细胞高于LA初筛阳性患者,差异有统计学意义(P=0.047),而CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、NK细胞的差异均无统计学意义(P>0.05)。LA确认阴性患者的DNT细胞低于LA确认阳性患者,差异有统计学意义(P=0.017),而CD3+CD4-CD8+LA确认阴性患者高于确认阳性患者,差异也有统计学意义(P=0.007),而CD3+、C3+CD4-CD8+、NK细胞的差异均无统计学意义(P>0.05)。CD3+、CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、DNT与NK细胞在抗精子抗体(As Ab)阴性患者与AsAb阳性患者的差异无统计学意义(P>0.05)。结论不孕不育患者DNT细胞升高与T细胞亚群的变化提示机体免疫功能异常,在不孕不育的发病机制中可能起一定作用。

女性不孕不育患者外周血DNT细胞、T细胞亚群的检测及临床意义

目的分析女性不孕不育患者外周血CD3+CD4-CD8-双阴性调节性T细胞(DNT)、T细胞亚群的水平,探讨其临床意义。方法选取2015年2月-2017年8月我院收治的女性不孕不育患者97例,其中不孕症组32例、不育症组65例,另取同期于我院进行体检的健康女性50例为对照组。采用流式细胞仪检测各组DNT细胞与T细胞亚群水平,所有不孕不育患者分别进行狼疮抗凝物(LA)、抗精子抗体(AsAb)检测。根据检测结果将患者分为LA阳性组、LA阴性组及AsAb阳性组、AsAb阴性组,比较各组DNT细胞与T细胞亚群水平。结果 3组CD3+CD4-CD8-水平差异有统计学意义(P<0.05),不孕组与不育组患者CD3+CD4-CD8-水平均高于对照组(P均<0.05),不孕组与不育组间CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、CD3+水平对比差异均无统计学意义(P均>0.05)。LA阳性组患者CD3+CD4-CD8-水平高于LA阴性组,而CD3+CD4-CD8+水平低于LA阴性组(P<0.05);两组CD3+CD4+CD8-、CD3+水平对比差异无统计学意义(P>0.05)。AsAb阳性患者CD3+CD4-CD8-水平高于AsAb阴性患者(P<0.05),AsAb阳性患者与AsAb阴性患者CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、CD3+水平对比差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论女性不孕不育患者外周血DNT细胞水平升高,而T细胞亚群亦会发生一定程度的变化,提示了免疫功能异常可能在不孕不育的发病机制中发挥重要作用。