CD13、CD33在BCR-ABL^(+)急性淋巴细胞白血病患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关性

目的:探讨髓系抗原CD13、CD33在BCR-ABL^(+)急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)患者骨髓中的表达及其与临床特征和预后的相关性。方法:应用实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative-polymerase chain reaction, RQ-PCR)检测119例初诊ALL患者骨髓BCR-ABL表达水平。用流式细胞学检查检测ALL的抗原表达水平。对照分析单纯BCR-ABL^(+)患者中CD13^(+)和CD13-以及CD33^(+)和CD33-患者在初次诱导缓解率(initial-induction remission rate, CR1)和总生存率(overall survival rate, OS)的区别。结果:在BCR-ABL^(+)的ALL患者中,初诊时CD13^(+)患者较CD13-患者具有较低的首次诱导缓解率,差异具统计学意义(P<0.05),但CD33^(+)患者较CD33-患者首次诱导缓解率无统计学差异。CD13^(+)组及CD33^(+)的OS显著低于CD13-组及CD33-组(P<0.05)。结论:BCR-ABL^(+)ALL患者中CD13^(+)及CD33^(+)提示预后不良。

CD44与CD33在77例口腔黏膜良性淋巴组织增生病中的表达及临床意义

目的:探讨CD44与CD33在口腔黏膜良性淋巴组织增生病(benign lymphoadenosis of oral mucosa,BLOM)中的表达及临床意义。方法:选择2017年1月—2020年3月青岛市中医医院病理科77例BLOM蜡块作为实验组,另取同时间段63例正常口腔黏膜组织蜡块作为对照组。采用免疫组织化学法检测2组CD44、CD33阳性表达情况,采用Spearman分析BLOM患者病变组织中CD33与CD44阳性表达的相关性。收集患者一般资料,分析BLOM患者病变组织中CD33、CD44表达与临床病理特征的关系。采用SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果:对照组、实验组CD33阳性表达率分别为95.24%、63.64%,差异有统计学意义(P<0.05);CD44阳性表达率分别为93.65%、67.53%,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman分析结果显示,BLOM患者病变组织中CD33与CD44阳性表达呈正相关(r=0.834,P=0.002);CD33、CD44表达与临床分型、炎症程度、有无淋巴滤泡、淋巴细胞浸润有关(P<0.05),而与年龄、性别、病程、病变部位、上皮表面角化无关(P>0.05)。结论:BLOM患者病变组织中CD33、CD44阳性表达率下降,与临床分型、炎症程度、有无淋巴滤泡、淋巴细胞浸润密切相关。

SPR生物传感器在急性白血病髓系抗原CD33检测中的应用

采用自组装膜技术,在传感芯片表面修饰抗CD33单克隆抗体,利用自行构建的SPR生物传感器检测人骨髓血液中急性白血病髓系抗原CD33的表达。实验结果表明SPR生物传感器对AML患者骨髓血液的响应值远远大于对健康人骨髓血液的响应值。与传统的流式细胞术(FCM)方法相比,SPR方法具有能快速给出定量分析结果,操作简单等优点。用该SPR生物传感器对分离的骨髓血液和全血进行比较检测,结果显示SPR生物传感器对CD33抗原具有很好的特异选择性。SPR生物传感器在急性白血病髓系抗原CD33的检测中有着广阔的应用前景。

抗人CD33单链抗体的基因构建、表达及其生物活性检测

目的:构建及表达抗人CD33单链抗体(抗CD33-scFv)基因,并检测其生物活性。方法:采用RT-PCR方法从分泌抗人类白细胞表面分化抗原CD33单克隆抗体(mAb)的杂交瘤细胞中克隆出VL和VH可变区基因,再通过重叠延伸拼接(splice-overlap extension)PCR方法在VH和VL可变区基因之间引入柔性连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人CD33-scFv基因。将其克隆至原核表达载体PET-28a(+)并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达。结果:SDS-PAGE和Westernblot分析结果表明,抗CD33-scFv在Rosetta(DE3)菌中获得高效表达,重组蛋白的相对分子质量(Mr)为30000,表达产物以不溶性包涵体形式存在,经过溶解包涵体,镍柱亲和层析纯化和体外复性过程,获得了高纯度的scFv片段。流式细胞术(FCM)分析结果证实抗CD33-scFv可与人类白细胞表面的分化抗原CD33结合,保留了鼠源性mAb的与CD33结合的活性。结论:重组抗人CD33-scFv基因构建与表达成功,并且通过复性得到有生物活性的scFv,为下一步针对髓系恶性肿瘤的靶向治疗奠定了基础。

急性髓系白血病CD33^+/CD34^+细胞表面核酸适配体的筛选及结构分析

目前,对急性白血病细胞表面特异性分子标记物所知甚少,因而白血病的诊断尚缺乏白血病细胞的特异性方法。为此,本研究采用细胞-指数富集配体系统进化(cell-systematic evolution of ligands by exponentialenrichment,cSELEX)技术,筛选与急性髓系白血病(acute myeloblastic leukemia,AML)M2型(AML-M2)患者CD33+/CD34+细胞结合的核酸适配体(aptamer),为寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物提供基础。首先,通过免疫磁珠方法分选出AML-M2患者骨髓CD33+/CD34+细胞并将其作为靶细胞,正常人CD33+/CD34+细胞为反筛选细胞,采用cSELEX技术,从单链DNA(single strand deoxyribonucleic acid,ssDNA)文库中筛选与AML-M2CD33+/CD34+细胞结合的适配体。随后,通过克隆和测序分析各适配体的结构。结果显示,经过13轮次的反复筛选,ssDNA文库的适配体与AML-M2患者CD33+/CD34+细胞的富集度从0.7%增加到52.9%,至第13轮时趋于稳定。对所获得的30个适配体序列分析表明,大多数适配体含有CCCCT、CTCTC和CTCAC保守序列中的一种。二级结构分析显示,30个适配体中含有3种不同类型的模拟二级结构。结论 :本研究成功筛选到AML-M2型白血病CD33+/CD34+细胞的适配体,这为进一步寻找AML-M2白血病细胞表面特异性分子标记物以及AML-M2型白血病的分子诊断创造了基础。

CD33和CD13表达与多发性骨髓瘤患者预后的关系

目的:探讨初诊多发性骨髓瘤(MM)患者中CD33和CD13的表达情况及其与患者预后的关系。方法:回顾性分析2014年1月至2020年1月初诊的121例MM患者中CD33和CD13的表达情况及CD33和CD13表达与患者预后的关系。结果:121例初诊MM患者中,CD33^(+)组有30例(24.8%),CD13^(+)组有12例(9.9%)。Kaplan-Meier分析显示,与CD33^(-)组比较,CD33^(+)组MM患者的无进展生存(PFS)时间和总体生存(OS)时间显著缩短(PFS 17.5 vs 23个月,P=0.000;OS 18.5 vs 25个月,P=0.000);与CD13^(-)组比较,CD13^(+)组MM患者的PFS时间和OS时间也显著缩短(PFS 21 vs 22个月,P=0.012;OS 25 vs 26个月,P=0.006)。Cox回归分析显示,CD33和CD13均是MM患者的独立预后不良因素(CD33:P=0.000;CD13:P=0.003)。结论:CD33和CD13均是MM患者的预后不良危险因素。

靶向CD33的CAR修饰的NK92细胞对CD33^+急性髓系白血病细胞的杀伤作用

目的:根据抗CD33-sc Fv序列构建CD33-CAR修饰的NK92细胞,探讨其对CD33^+急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞的杀伤作用。方法:通过基因合成以及分子克隆技术获得抗CD33-CAR片段,然后将其构建到慢病毒载体上,进行慢病毒包装,将得到的慢病毒转染NK92细胞,用流式细胞术检测细胞转染效率并通过嘌呤霉素筛选得到稳定表达抗CD33-CAR的细胞系CD33-CAR-NK92,利用钙黄绿素释放法检测该细胞的杀伤作用,ELISA法检测细胞因子IFN-γ分泌的变化。结果:成功构建p CDH-CD33-CAR重组慢病毒质粒,慢病毒转导后约18.7%的NK92细胞表达CD33-CAR(命名为CD33-CARNK92细胞),嘌呤霉素筛选后表达CD33-CAR的NK92细胞比例约86.3%。CD33-CAR-NK92细胞对CD33^+AML细胞MOLM-13的杀伤作用明显高于未被基因修饰的NK92细胞(P<0.01),而两者对CD33-肿瘤细胞JURKAT的杀伤作用没有明显差异(P>0.05)。效靶比为2∶1共培养6 h后,经CD33-CAR修饰的NK92细胞相比未被基因修饰的NK92细胞IFN-γ的分泌水平明显升高[(190.97±11.52)vs(88.41±2.75)pg/ml,P<0.01]。结论:CD33-CAR-NK92细胞能特异性识别CD33抗原并杀伤CD33^+AML细胞,其杀伤作用显著高于未被基因修饰的NK92细胞,为进一步开展靶向CD33的CAR-NK92细胞治疗AML的临床转化奠定了实验基础。

抑制c-myc基因表达对HL-60细胞表面分化抗原CD13、CD33的影响

目的:利用重组反义c-myc腺病毒载体(Ad-AS-c-myc)抑制HL-60细胞c-myc基因表达,检测细胞表面分化抗原CD13、CD33变化,了解抑制HL-60细胞c-myc表达,对细胞分化及分化抗原的影响。方法:重组Ad-AS-c-myc病毒按感染强度(MOI)为100的转染剂量,转染HL-60细胞。RT-PCR检测c-myc表达。流式细胞仪检测CD13、CD33阳性细胞率。同时对转染细胞行Wright's染色,观察细胞形态变化。结果:Ad-AS-c-myc转染HL-60细胞后,c-myc基因表达降低,CD13阳性细胞率升高,CD33阳性细胞率降低。结论:抑制c-myc基因表达,使HL-60细胞CD13表达增强,CD33表达降低。细胞形态向成熟粒细胞方向分化。

CD33分子信号传递及其功能的研究进展

CD33分子为一种跨膜受体,主要存在于血液、骨髓和淋巴细胞中.它属于免疫球蛋白超家族成员,并且是能够结合唾液酸的免疫球蛋白样的凝集素家族成员.在这一膜受体内部存在免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM).由于ITIM能够特异性的与酪氨酸磷酸酶shp-1和shp-2结合并向胞内传递抑制性信号,从而达到抑制细胞活性的目的,所以CD33分子主要在临床上作为一种靶位点用于急性骨髓系白血病(AML)的治疗.

CD33抗体为主方案治疗难治性白血病

目的:评估CD33抗体为主方案治疗难治性白血病的疗效和不良反应。方法:采用CD33抗体为主方案对11例难治性白血病进行治疗。结果:CD33抗体为主方案治疗总有效率54%,其中完全缓解(CR)为36%,除血小板未完全缓解外均达到完全缓解标准(CRP)为18%,治疗后中位生存时间4.8月,缓解后中位生存时间8.2月。2例慢性粒细胞白血病急粒变均完全缓解,且BCR/ABL(-)。1例难治性急性淋巴白血病在缓解后即行异基因干细胞移植,至今无病生存已9月。不良反应有骨髓抑制(100%)、输注相关寒战发热(90%),肝静脉闭塞综合症(VOD)发生率55%,发生在干细胞移植后的患者和年龄大于60岁的患者。结论:本组资料显示CD33抗体为主方案对表达CD33的急慢性白血病有一定疗效。对于移植后复发和年龄大于60岁的患者,在使用CD33抗体时需注意患者肝脏情况,一旦出现VOD,及时处理。对于用药后缓解的患者,应尽早行异基因干细胞移植。

抗人CD33单链抗体与CD80胞外区融合基因的构建、表达及其生物活性检测

目的构建及表达CD80胞外区与抗人CD33单链抗体（scFv）融合基因，并初步检测融合蛋白的生物活性。方法扩增CD80胞外区，利用人血清白蛋白（HAS）第三结构域亲水性的403—427位氨基酸作为链间连接肽将其与抗人CD33scFv连接，并克隆至原核表达载体PET22b（＋）中，经IPTG诱导，在大肠杆菌Rosseta（DE3）内得到融合蛋白的表达。表达产物经过溶解包涵体，镍柱亲和层析纯化和体外复性过程，获得了高纯度的融合蛋白。并用间接免疫荧光法检测融合蛋白与人CD33抗原结合活性。结果克隆出CD80胞外区序列，大小为633bp，正确合成作为链间连接肽的人血清白蛋白（HAS）第三结构域的403～427位氨基酸。成功构建融合基因表达载体，SDS．PAGE和Westernblot分析结果表明，融合蛋白在Rosseta（DE3）中得到高效表达，融合蛋白相对分子质量（M1）约为55000，复性后经过间接免疫荧光检测表明具有与人CD33抗原结合活性。结论成功构建PET22b（＋）-CD80胞外区一CD33scFv（ExCD80-CD33scFv）融合基因表达质粒，融合蛋白在宿主菌Rosetta（DE3）中获得了表达，并初步检测其生物学活性。

抗CD33单克隆抗体在急性髓细胞性白血病中的应用

大量已经完成和正在进行的临床研究都表明,GO作为AML免疫治疗的重要手段将日渐占据更为重要的位置,其单独或者联合其他药物在不同AML治疗阶段中的应用方案也将日趋完善。

HIM3－4：一个以CD33转染细胞为免疫原制备的CD33单克隆抗体

应用鼠－鼠杂交瘤技术，以ＣＤ３３＋转染细胞为免疫原制备出一株ＣＤ３３单克隆抗体（单抗）命名为ＨＩＭ３－４（ＩｇＧ１）．经第五届国际人类白细胞分化抗原会议进一步正式命名为ＣＤ３３单抗．本文首次在国内报道，以基因转染细胞作为免疫原成功地制备针对其因表达产物的单抗．

CD33单克隆抗体在AML治疗中的研究进展

CD33在90％急性髓系白血病(AML)的原始细胞表面表达,为AML的特异性治疗提供了理想靶点。CD33单抗通过补体介导的细胞毒作用和抗体介导的细胞毒作用产生抗肿瘤效应;并且通过与放射性核素、细胞毒药物偶联形成免疫复合物,从而增强对白血病细胞的杀伤作用。本文综述了近年来CD33单抗在基础和临床研究中的进展。

急性粒细胞白血病CD33、CD45及MDR表达和靶抗原的筛选

目的 :观察急性粒细胞白血病 (AML)CD33、CD4 5及MDR表达和抗原强度的变化 ,筛选特异的靶抗原 ,探讨抗体靶向治疗的应用价值。方法 :应用间接免疫荧光法检测AML细胞CD33、CD4 5及MDR的表达和抗原强度的变化。结果 :CD33、CD4 5表达阳性率分别为 81.5 %、90 .6 % ,CD33抗原表达比CD4 5强 ,差异有显著性意义(P <0 .0 5 )。CD33与MDR在白血病细胞上表达差异无显著性意义。结论 :CD33特异性强 ,抗原性强 ,适合作靶抗原 ;MDR也是耐药白血病治疗的较好靶抗原。抗体靶向治疗将是AML治疗的一条新途径。

人源化CD33单克隆抗体联合化疗与单用化疗在初次复发或难治性急性髓性白血病治疗中比较的Ⅲ期多中心随机研究的评价

4背景 CD33是一种细胞表面的受体，它只存在于粒单细胞表面。体外研究表明，抗CD33抗体与受体结合后导致了剂量依赖性的细胞凋亡．这与其他抗体如CD22在淋巴系统恶性肿瘤中的方式是相似的。由于CD33在急性髓性白血病（acute myeloid leukemia，AML）的幼稚细胞中广泛表达（〉90％），而在大多数的非血液系统的组织则不表达．故针对CD33的抗体类药物．如联合了刺孢霉素的抗CD33抗体吉姆单抗奥佐米星（Gemtuzumab Ozogamicin，GO）已用于治疗AML的病人。

抗CD33抗体在治疗急性髓系白血病中的应用

CD33抗原是靶向治疗急性髓系白血病的一个合适的靶点,抗CD33单克隆抗体经过基因工程改造后,可通过抗体依赖性细胞毒作用杀伤靶细胞,并且可将靶向性单抗与细胞毒药物或放射性同位素偶联杀伤靶细胞,发挥治疗作用。抗CD33单抗GO(gemtuzumab ozogamicin)已用于临床治疗。本文就抗 CD33抗体在治疗急性髓系白血病中的应用作一综述。

肾癌患者外周血中CD33^+HLA-DR^-髓源抑制性细胞的表达及其临床意义

目的探讨肾癌患者外周血中CD33+HLA-DR-髓源抑制性细胞(MDSCs)的表达及其与肿瘤分期和病理类型的相关性。方法采用流式细胞术检测肾癌患者(44例)和健康志愿者外周血中CD33+HLA-DR-MDSCs水平,并分析其与肿瘤进展及肿瘤病理类型的相关性。结果肾癌患者外周血中CD33+HLA-DR-MDSCs的表达显著高于健康对照组[(1.91±0.66)%vs(0.62±0.22)%,P<0.001];根据肿瘤分期划分,晚期(Ⅳ期)肾癌外周血CD33+HLA-DR-MDSCs表达明显增高:Ⅰ+Ⅱ期∶Ⅲ期[(1.46±0.44)%∶(2.04±0.35)%,P<0.01];Ⅲ期:Ⅳ期[(2.04±0.35)%∶(2.50±0.64)%,P<0.05];肿瘤患者外周血中CD33+HLA-DR-MDSCs的表达与患者性别和年龄无明显相关性(P>0.05)。结论肾癌患者外周血中CD33+HLA-DR-MDSCs表达与肿瘤分期、分型相关,对肾癌患者的预后及肿瘤免疫方面的研究有显著意义。

吉妥珠单抗在CD33阳性急性髓系白血病中的研究进展

目前,通过运用传统化疗或造血干细胞移植治疗急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)虽然取得一定疗效,但远期预后仍存在局限性。为改善这一缺陷,抗体偶联药物将可能成为这部分患者的最佳选择。吉妥珠单抗(gemtuzumab ozogamicin,GO)是一种由人源化抗CD33单抗与脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)嵌入剂卡奇霉素(calicheamicin,CLM)形成的抗体偶联药物。CD33表达于90%的AML细胞表面,不表达于正常造血干细胞和成熟粒细胞。因此,其成为AML靶向治疗的良好靶点。已有许多研究报道,GO无论是单药还是联合治疗,均能改善CD33阳性AML患者的预后。本文主要就GO的特征及其在CD33阳性AML中的研究进展进行综述。