内皮祖细胞CD34抗体包被冠脉支架对猪冠状动脉再狭窄影响的研究

目的探讨生物可降解高分子载内皮祖细胞CD34抗体支架是否可降低猪冠状动脉支架置入术后再狭窄。方法以生物可降解高分子聚乙二醇-聚乳酸-聚谷氨酸共聚物为载体,应用N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶二硫)-丙酸酯(SPDP)方法制成内皮祖细胞CD34抗体洗脱支架。18只猪随机分为三组,即紫杉醇支架组、CD34抗体支架组、裸支架组,每组6只,将紫杉醇支架、CD34抗体支架、裸支架分别植入到各组猪的冠状动脉损伤段,4w后处死,取出支架段血管行病理学观察及计算机图像分析血管管腔面积、内膜增生面积以及面积狭窄百分比。结果CD34抗体支架组内膜增生面积较裸支架组减低(P<0.05),紫杉醇支架组内膜增生面积较裸支架组也减低(P<0.05),但较CD34抗体支架组无明显差别(P>0.05)。结论生物可降解高分子载内皮祖细胞CD34抗体支架可明显加速支架置入术后血管内皮修复,降低再狭窄的发生。

去细胞光氧化牛颈静脉血管片内膜光化学接枝CD34抗体的制备及初步评价

目的:用光交联剂SANPAH将不同浓度鼠抗人CD34抗体接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉表面,明确接枝鼠抗人CD34抗体的最佳反应摩尔比和最佳浓度。方法:实验于2006-06/08在中南大学湘雅二医院生物材料实验室完成。按4个不同摩尔比(1∶0,1∶10,1∶20,1∶50),SANPAH和4个不同浓度[0.665μmol/L(100mg/L),1.33μmol/L(200mg/L),6.65μmol/L(1g/L),13.3μmol/L(2g/L)]鼠抗人CD34抗体进行反应后,经紫外线照射光化学接枝于经过去细胞和光氧化后的牛颈静脉上,各组进行快速冰冻切片,滴加FITC标记的羊抗鼠IgG,然后在荧光显微镜下观察不同摩尔比和浓度反应结合的荧光效果,从而初步推断出最佳的反应和结合的摩尔比和浓度。结果:随着鼠抗人CD34抗体的浓度的升高,荧光整体上是越来越强,但是当浓度高于6.65μmol/L时,荧光差别不是很明显;当二者的反应摩尔比为1∶20时,荧光最强。结论:最佳的鼠抗人CD34抗体和SANPAH反映接枝的浓度是6.65μmol/L,最佳的摩尔比是1∶20。

CD34抗体包被支架植入预防兔动脉支架内狭窄的研究

目的探讨CD34抗体包被支架植入预防兔动脉支架内狭窄的效果。方法经颈动脉入路建立兔髂动脉损伤模型,损伤后即刻于右侧植入普通支架,左侧植入抗体支架。45 d取样6只,观察CD34抗体包被支架的效果、支架内最狭窄处管腔的百分率及CD34抗体包被支架内新生内膜面积的百分率。结果荧光显微镜下观察结果显示,抗体包被均匀密集。实验组支架内最狭窄处管腔的百分率为(16.13±3.93)%,明显低于对照组[(47.03±11.89)%](P<0.05)。实验组CD34抗体包被支架内新生内膜面积的百分率为(49.64±6.40)%,明显低于对照组[(66.83±6.00)%](P<0.05)。结论CD34抗体包被支架能够有效减轻受损动脉支架内狭窄的发生。

抗CD34抗体抵消雷帕霉素洗脱支架内皮延迟修复研究

目的:雷帕霉素洗脱支架在降低再狭窄风险的同时,通过抑制血管再内皮化,可能增加支架内血栓发生风险,抗CD34抗体通过特异捕获血液中内皮祖细胞,加速支架术后血管再内皮化。本研究目的是将抗CD34抗体涂敷到雷帕霉素洗脱支架上,通过实验小猪支架术后不同时间造影,随访评价抗CD34抗体对雷帕霉素洗脱支架早期再内皮化的影响。方法:将3种不同类型的支架包括金属裸支架(bare-metal stents,BMS)、雷帕霉素洗脱支架(sirolimous-eluting stents,SES)和抗CD34抗体与雷帕霉素洗脱联合支架(anti-CD34 antibody and sirolimous-eluting combined stents,ASES)随机植入到符合条件的10头中华小型猪冠状动脉内(共植入了6个BMS、7个支架和7个ASES),支架植入术后2 w,进行冠状动脉造影及冠状动脉内光学相干断层成像(optical coherence tomography,OCT)检查;动物处死后,对支架段冠状动脉进行病理组织学检查及扫描电镜观察。结果:1.通过对冠状动脉造影、OCT图像及支架段冠状动脉的病理组织学的观察分析,均未发现支架内血栓及小的附壁血栓。2.在2 w OCT检查图像上,ASES新生内膜覆盖率显著高于SES[(55.56±35.27)%vs.(41.82±23.28)%,P=0.047],ASES平均内膜覆盖厚度不但显著高于SES[(89±5.0)μm vs.(32±4.9)μm,P<0.001]、还高于BMS[(89±5.0)μm vs.(44±7.2)μm,P=0.001]。病理组织学观察及扫描电镜观察也显示,ASES和BMS新生内膜覆盖水平及质量均优于SES。结论:将抗CD34抗体联合应用到雷帕霉素洗脱支架上,能够显著抵消后者在支架术后早期对再内皮化的抑制作用。

雷帕霉素联合CD34抗体复合支架快速捕获外周血中内皮祖细胞

背景:临床用于治疗血管狭窄疾病的药物洗脱支架和单纯内皮修复型支架存在内皮化延迟和植入后再狭窄的问题。雷帕霉素联合CD34抗体复合支架可协同抵消抗增殖药物的内皮化延迟和内膜的过度增生,目前尚处于实验研究阶段。目的:观察雷帕霉素联合CD34抗体复合支架捕获内皮祖细胞能力及其所捕获内皮祖细胞的分化特征。方法:通过扫描电镜及间接免疫荧光观察雷帕霉素联合CD34抗体复合支架体外捕获外周血内皮祖细胞形态及其分化特征。通过荧光显微镜观察雷帕霉素联合CD34抗体复合支架植入兔耳动脉后捕获内皮祖细胞情况及支架片段的内皮化程度。结果与结论:扫描电镜观察到CD34抗体涂层支架可捕获直径6-8μm的纺锤状细胞,24 h时细胞变得充盈饱满。所捕获细胞具有内皮祖细胞的外形特征。间接免疫荧光观察CD34抗体支架表面可见大量血管内皮生长因子受体2阳性细胞黏附的红色荧光斑点。免疫荧光观察到CD34抗体涂层支架植入兔耳动脉24 h大部分被血管内皮细胞所覆盖,48 h达到完全覆盖,未见细胞异常聚集。结果表明雷帕霉素联合CD34抗体复合支架能特异性快速捕获外周血液中的血管内皮祖细胞,植入体内48 h即可完成血管内皮细胞覆盖,实现了支架快速内皮化,可促进内皮细胞修复。

CD34抗体修饰的脱细胞血管支架的体内内皮化

目的研究CD34抗体修饰的脱细胞血管支架植入动物体内后募集循环中的内皮祖细胞参与再内皮化过程的性能。方法新鲜的羊前肢动脉经反复冻融和超高压处理,SDS彻底去除细胞,通过光交联法将CD34抗体固定于脱细胞血管内腔面。20只新西兰大白兔右下腹做一带蒂皮瓣,皮瓣供血动脉为股动脉的分支血管,血管移植部位选取股动脉,做1cm长的全段缺损,随机分为2组(n=10),实验组选用CD34抗体修饰的脱细胞血管支架,对照组用未修饰的脱细胞血管支架,显微外科端端吻合替代缺损的兔股动脉。术后通过对皮瓣色泽质地的观察,了解皮瓣的血供情况;行彩色多普勒、数字减影血管造影检查和病理切片观察移植血管的通畅情况及细胞黏附情况。结果实验组皮瓣术后血运较好,对照组皮瓣术后肿胀坏死。彩色多普勒、数字减影血管造影检查显示,实验组移植术后1周有3只动物发生血管闭塞,另7只动物在术后4周血管仍通畅、无明显狭窄;对照组术后1周无1只动物血管通畅。实验组术后4周解剖移植血管,H-E染色显示脱细胞血管支架表面形成连续融合单层细胞,管腔无明显狭窄;对照组术后1周解剖移植血管可见血栓形成,H-E染色显示血管腔内表面缺乏细胞覆盖。结论CD34抗体修饰的脱细胞血管支架在早期抗凝及通畅率上均优于未经修饰的脱细胞血管支架。

抗CD_(34)单克隆抗体标记血管生成在人脑胶质瘤组织中的表达及临床意义

应用免疫单抗标记的组织化学技术检测 63例人脑胶质瘤组织中 CD3 4 的表达情况 ,根据 CD3 4 阳性的血管内皮细胞计数来测定肿瘤微血管密度 (MVD)。结果发现 , 、 级胶质瘤 MVD显著高于 、 级 (P<0 .0 5 ) ;术后 18个月内复发和生存期 <3年者 MVD显著高于术后 18个月内无复发和生存期≥ 3年者 (P<0 .0 1) ;MVD与患者的性别、年龄、肿瘤生长部位无明显相关 (P>0 .0 5 )。认为人脑胶质瘤组织中血管形成与病理分级、术后复发及生存期密切相关 。

CD34抗体包被支架预防兔损伤动脉支架内狭窄

目的:观察CD34抗体包被支架能否减少和预防球囊损伤动脉支架内狭窄。方法:①用明胶作为包被底物对支架进行包被,然后再包被CD34抗体。②复制股动脉损伤家兔模型,损伤后即刻于右侧植入普通支架,左侧植入抗体支架;45 d后,观察支架内最狭窄处的百分率、支架内和支架两端的血管新生内膜增生。结果:45 d时,抗体包被支架内的最狭窄百分数明显低于普通侧支架(16.13±3.93vs47.03±11.89,P<0.05);抗体包被支架段动脉血管新生内膜百分数明显低于普通支架段动脉血管(49.64±6.40vs66.83±6.00,P<0.05);抗体包被支架远心端血管的新生内膜增生比普通支架远心端血管明显减轻。但两者的近心端动脉无明显差别。结论:CD34抗体包被支架能够有效减轻受损动脉支架内狭窄的发生。

鸡尾酒抗体D2-40/CD34-CK对淋巴结检出数量不足结直肠癌标本的临床病理评价

目的探讨鸡尾酒抗体D2-40/CD34-CK双重免疫组化染色在淋巴结检出数量不足的结直肠癌(colorectal cancer,CRC)标本脉管侵犯评估中的应用及意义。方法收集133例淋巴结检出数量<12枚的CRC标本,分别行HE染色及鸡尾酒抗体双重免疫组化染色,比较两种方法在脉管侵犯筛查效果中的差异,并分析应用鸡尾酒抗体免疫组化染色证实的脉管侵犯与临床病理特征及患者总生存期(overall survival,OS)的关系。结果 (1)鸡尾酒抗体D2-40/CD34-CK双重免疫组化染色及HE染色对脉管侵犯的检出率分别为42. 9%(57/133)和21. 8%(29/133),差异有显著性(P <0. 001)。(2)鸡尾酒抗体D2-40/CD34-CK双重免疫组化法证实的脉管侵犯与Dukes分期、浸润深度、临床分期、淋巴结转移、肿瘤出芽相关(P <0. 05)。(3)脉管侵犯、侵犯位置深度、程度及脉管侵犯灶数≤2个灶且癌栓细胞数量≥5. 5个与患者OS密切相关(P <0. 05)。结论鸡尾酒抗体D2-40/CD34-CK双重免疫组化染色对脉管侵犯评估优于常规HE染色切片观察,与肿瘤分期、淋巴结转移及出芽情况密切相关,是患者预后的独立影响因素,可作为淋巴结检出数量不足CRC病例的补充检测指标。

胃癌组织中VEGF和CD34的表达及微血管密度的临床病理意义

目的探讨血管内皮生长因子(Vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)和CD34(Clusterofdifferentiation34,CD34)在人胃癌组织中的表达及微血管密度(MicrovessiIdensity,MVD)的临床病理意义。方法检测45例胃癌手术切除标本中胃癌组织和20例浅表性胃炎中VEGF蛋白的表达,用抗CD34单克隆抗体显示血管内皮细胞,对CD34阳性血管进行MVD计数。结果VEGF阳性表达产物主要见于细胞的胞浆内。胃癌组织中VEGF阳性表达率高于浅表性胃炎(P<0.05)。胃癌组织和浅表性胃炎中血管内皮细胞胞浆呈棕黄色染色。胃癌组织MVD值高于浅表性胃炎(P<0.05)。MVD值与TNM分期、淋巴结转移、浸润深度有关(P<0.05),与分化程度无关(P>0.05)。VEGF表达阳性MVD值高于表达阴性MVD值(P<0.05)。结论VEGF、CD34在胃癌组织中存在高水平表达,前者可能参与胃癌的血管形成和淋巴结转移。

补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对大脑中动脉栓塞模型整合素相关因子的影响

背景:前期研究发现,补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可发挥协同抗脑缺血损伤作用。目的:分析骨髓间充质干细胞移植联合补阳还五汤促进脑缺血血管新生的作用。方法:将96只SD大鼠随机分为4组,均制作大脑中动脉栓塞模型。联合组于造模前3 d灌胃给予补阳还五汤10 mL/kg,1次/d,造模成功后2 h灌胃1次,以后每12 h灌胃1次;局灶脑缺血2 h再灌注2 h后,干细胞组、联合组向脑室中注入骨髓间充质干细胞悬液,30 min后再注射抗CD34、CD45抗体;抗体组注射抗CD34、CD45抗体;模型组注射生理盐水。联合组于再灌注后12,24,36,48 h进行血清αVβ3水平及脑组织免疫组织化学、Q-PCR、免疫印迹检测,其余3组均于再灌注后36 h检测上述指标。结果与结论:(1)血清αVβ3水平:抗体组血清αVβ3水平低于模型组(P<0.05),干细胞组、联合组高于抗体组(P<0.05),且联合组再灌注不同时间点的血清αVβ3水平高于干细胞组(P<0.01);(2)免疫组织化学:抗体组CD34阳性细胞数量少于模型组(P<0.05),干细胞组、联合组高于抗体组(P<0.05);(3)Q-PCR与免疫印迹检测:与模型组相比,抗体组、干细胞组p FAK蛋白表达水平降低(P<0.05),FAK基因及蛋白表达变化不大;与其他组比较,联合组FAK蛋白(自再灌注后24 h开始)和p FAK蛋白(自再灌注12 h开始)显著升高(P<0.05,P<0.01),且随着再灌注时间延长有逐渐升高趋势;(4)结果表明:骨髓间充质干细胞移植联合补阳还五汤可逆转抗CD34+CD45抗体引起的血管内皮细胞数量减少、整合素αVβ3及其下游信号分子表达下降,促进血管新生。

Delta like蛋白及乙酰肝素酶在食管鳞状细胞癌中的表达及其与微血管密度关系的研究

1991年weidner等首先报道肿瘤的微血管与乳腺癌生长、转移和复发的密切相关。肿瘤微血管密度（MVD）已被认为是评价肿瘤血管生成的金标准。因为新生的血管细小无序．所以需要特异的血管内皮细胞分子标记物。通常选用的是Ⅷ因子抗原、CD31、CD34等。其中CD34在肿瘤血管的内皮细胞均有表达．是一种新的血管生成相关抗原。CD34抗体和CD31、Ⅷ因子抗体比较，其染色更加敏感，能突出显示较小的和不成熟的微血管或单一的内皮细胞，而且重复性好。

内皮祖细胞捕获支架防治犬肝静脉再狭窄的实验研究

目的观察内皮祖细胞(Endothelialprogenitorcells,EPCs)捕获支架置入预防犬肝静脉支架内再狭窄的效果。方法家犬24只,按随机数字表法分为实验组与对照组,每组12只,每组再分为2个亚组各6只。实验组置入EPCs捕获支架,对照组直接置入支架。术后第1周每组处死一个亚组动物,取部分支架内组织用于扫描电子显微镜观察。术后第8周行肝静脉造影复查,处死剩余动物,然后取支架内及邻近支架肝静脉血管组织织用于光学显微镜观察。结果术后第1周,通扫描电子显微镜观察支架腔面内皮化程度实验组明显优于对照组。术后第8周肝静脉造影复查,实验组支架开放情况明显优于对照组(t=20,P<0.01);光学显微镜观察实验组平均新生内膜厚度、平均新生内膜面积、平均百分狭窄面积均显著优于对照组(t值分别为6.08、4.50和5.52,P<0.01)。结论 EPCs捕获支架可以促进肝静脉支架腔面的血管内皮生长,预防再狭窄。

磁介导功能型纳米粒子在铁支架表面定向捕获CD34阳性细胞

构建内皮祖细胞捕获支架是目前心血管疾病治疗的一个研究热点.利用磁性纳米粒子捕获内皮祖细胞也越来越受到关注,但是单纯的磁性纳米粒子和磁场源地作用相对微弱,本研究引入铁支架作为另一磁响应源,共同作用来提高纳米粒子表面捕获率.首先利用CD34抗体构建了一种定向捕获CD34阳性细胞的功能型磁性纳米粒子,再利用外加磁场将其归巢到铁支架表面.FTIR和TEM结果表明CD34抗体已成功接枝到双羧基PEG包裹的Fe_3O_4纳米粒子上,体外细胞评价证实该纳米粒子不具有细胞毒性.体内动物实验结果表明该Fe_3O_4-PEG@CD34纳米粒子能够特异性识别捕获CD34阳性细胞,并且在外加磁场的作用下能够将其快速归巢到铁支架表面,这为实现支架表面快速内皮化提供了可能.

内皮祖细胞移植对兔布加综合征门静脉高压的作用

本研究旨在观察内皮祖细胞（EPCs）对兔布加综合征（BCS）模型门静脉压力（PVP）的影响，现将结果报道如下。一、材料与方法1．材料：健康成年家兔24只，体质量2．0～2．5kg。EGM一2MVBulletKit培养基、人纤维连接蛋白、异硫氢基荧光素（FITC）标记荆豆凝集素-1（FITC-UEA-1）和Dil标记的乙酰化低密度脂蛋白（Dil-acLDL）购白美国Sigma公司，FITC标记的抗CDl33单克隆抗体和藻红蛋白标记的抗CD34单克隆抗体购自美国Bioscience公司。

靶向捕获内皮祖细胞磁性纳米粒子的生物学修饰及其细胞相容性评价

采用共价接枝将CD34抗体接枝到聚乙二醇修饰的四氧化三铁磁性纳米粒子上,构建具有CD34抗体与PEG共同修饰的功能型磁性纳米粒子。通过红外检测(FT-IR)、纳米粒子粒径分析(动态光散射和透射电子显微镜)等方法对修饰后的磁性纳米粒子进行检测,并将其与内皮祖细胞(EPCs)共混培养,评价纳米粒子的细胞相容性以及对EPCs短时间的结合效果,然后在动态外加磁场的作用下评价修饰后磁性纳米粒子对EPCs的定向引导效果。结果表明,CD34抗体成功修饰到磁性纳米粒子表面,修饰后的纳米粒子在一定的浓度范围内有较好的细胞相容性,短时间对EPCs具有较好的识别结合作用,并且能在外加磁场作用下初步实现在动态环境下对EPCs的定向引导。