白藜芦醇提高CD34^＋CD38^-KG1a白血病细胞对人外周血单个核细胞的杀伤敏感性

目的:研究白藜芦醇(Resveratrol)作用前后CD34+CD38-KG1a白血病细胞对IL-15介导的人外周血单个核细胞(PBMC)杀伤敏感性的变化及机制的初步探讨。方法:应用CCK-8法检测白藜芦醇对白血病细胞的IC50值,以此量的白藜芦醇作用于白血病细胞.,并用LDH释放法检测白藜芦醇作用前后,效靶比分别为5∶1、10∶1、20∶1的IL-15介导的PBMC对CD34+CD38-KG1a细胞杀伤能力。流式细胞仪(FACS)检测IL-15介导前后PBMC表面NKG2D的表达。流式细胞仪(FACS)检测作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体(MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3)表达。结果:白藜芦醇作用前后在不同效靶比时对IL-15介导的PBMC杀伤敏感性差异有统计学意义(P<0.05)。IL-15介导PBMC前后表面NKG2D的表达有显著变化,差异有统计学意义。白藜芦醇作用前后CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D各配体中MICA、MICB无显著变化(P>0.05),ULBP1、ULBP2、ULBP3有显著变化,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以提高CD34+CD38-KG1a细胞对IL-15介导PBMC的杀伤敏感性,其机制可能与白藜芦醇提高CD34+CD38-KG1a细胞表面NKG2D配体的表达有关。

小白菊内酯抑制CD34^+CD38^-KG-1a白血病细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性

目的:探讨小白菊内酯(parthenolide,PTL)对CD34+CD38-KG-1a白血病细胞的增殖、Bcl-2表达及其被同种异体NK(allo-NK)细胞杀伤敏感性的影响。方法:免疫磁珠法从KG-1a细胞中分离CD34+CD38-KG-1a细胞。XTT法检测PTL对CD34+CD38-白血病细胞增殖的影响,Real-time PCR和Western blotting分别检测PTL对CD34+CD38-KG-1a细胞Bcl-2mRNA和蛋白表达的影响,LDH释放法观察PTL对CD34+CD38-KG-1a细胞被allo-NK细胞杀伤敏感性的影响。结果:PTL对CD34+CD38-KG-1a细胞增殖的抑制呈剂量(2.5~80μmol/L)依赖性。PTL浓度为2.5μmol/L时,PTL组CD34+CD38-KG-1a细胞的增殖抑制率显著高于对照组[(4.89±1.07)%vs 0,P<0.01];PTL杀伤CD34+CD38-KG-1a细胞的IC50为20μmol/L;PTL组CD34+CD38-KG-1a细胞Bcl-2 mRNA[(0.105±0.007)vs(0.307±0.013),P<0.01]与蛋白表达均显著低于对照组。在效靶比为10∶1,20∶1和40∶1时,allo-NK细胞对PTL组CD34+CD38-KG-1a细胞杀伤率逐步升高,且均高于阴性(无PTL处理)对照组[(19.76±1.01)%,(30.14±0.96)%和(51.48±3.15)%vs(12.50±1.42)%,(16.90±0.93)%和(31.70±1.53)%(均P<0.01)];效靶比为40∶1时,allo-NK细胞对PTL组细胞的杀伤效率显著高于阳性(Bcl-2抑制剂ABT-737处理)对照组[(51.48±3.15)%vs(43.08±2.81)%,P<0.05]。结论:PTL能抑制CD34+CD38-KG-1a细胞的增殖并增强其被allo-NK细胞杀伤的敏感性,这可能与PTL下调Bcl-2的表达有关。

CD38抑制剂通过Sirt3/FoxO1途径抑制心肌缺血/再灌注损伤的研究

目的探讨CD38抑制剂减轻心肌缺血/再灌注损伤的作用及机制研究。方法雄性SD大鼠20只给予适应性喂养7 d后,随机分为四组,分别为假手术(A)组、心肌缺血/再灌注(B)组、心肌缺血/再灌注+CD38抑制剂(C)组和心肌缺血/再灌注+CD38抑制剂+Sirt3抑制剂(3-TYP)(D)组。B、C、D组建立心肌缺血/再灌注模型。C组和D组用木犀草素(特异性CD38抑制剂)[100 mg/(kg·d)]连续灌胃2周,D组造模前30 min尾静脉注射3-TYP。记录心电图,检测血清肌钙蛋白T水平、ROS水平,测定心肌病变,检测心肌组织中Sirt3、FoxO1、Bax、Bcl-2蛋白表达水平。结果与A组相比,B组心电图ST段明显抬高;与B组相比,C组ST段回落;与C组相比,D组ST段抬高。与A组相比,B组肌钙蛋白T、ROS水平显著增高(P<0.01);与B组相比,C组肌钙蛋白T、ROS水平则显著降低(P<0.01);与C组相比,D组肌钙蛋白T、ROS水平明显增高(P<0.01和P<0.05)。HE染色显示A组心肌排列整齐,无明显炎症浸润,B组结构紊乱,可见炎症细胞浸润,C组和D组较B组排列明显整齐。TUNEL染色结果显示,与A组相比,B组TUNEL阳性细胞比例显著增加(P<0.01);与B组相比,C组的TUNEL阳性细胞比例明显降低(P<0.01);与C组相比,D组的TUNEL阳性细胞比例则显著增加(P<0.01)。与A组相比,B组Sirt3蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与B组相比,C组Sirt3蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与C组相比,D组Sirt3蛋白表达水平则明显降低(P<0.05)。与A组相比,B组FoxO1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与B组相比,C组FoxO1蛋白和Bcl-2蛋白表达水平则显著升高(P<0.01);与C组相比,D组则显著降低(P<0.01和P<0.05)。与A组相比,B组Bax蛋白表达显著升高(P<0.01);与B组相比,C组则显著降低(P<0.01);与C组相比,D组Bax水平则显著升高(P<0.01)。结论CD38抑制剂可能通过Sirt3/FoxO1途径抑制心肌缺血/再灌注引起的心肌损伤。

晚期肝癌免疫微环境CD38表达水平与PD-1抑制剂疗效相关性分析

目的 探索晚期肝癌(HCC)患者CD38表达水平与PD-1抑制剂疗效的相关性。方法 选取2019年1月1日至2020年12月31日辽宁省肿瘤医院接受PD-1抑制剂治疗的晚期肝癌患者60例。采用肝穿刺的方法选取晚期肝癌患者的肿瘤组织,取同期行手术治疗的10份HCC癌旁正常组织作为对照。采用生物信息学分析的方法分析CD38的表达与HCC患者预后的关系;采用免疫组化的方法检测HCC及癌旁正常组织中CD38的表达;对使用PD-1抑制剂治疗的HCC患者进行随访观察,对比CD38的表达水平与患者预后的关系;采用单因素分析的方法筛选出影响晚期HCC患者预后的危险因素。结果 KM-plotter数据库显示在HCC(HR=0.73,95%CI:0.54~0.98,P=0.036)及晚期HCC(HR=0.51,95%CI:0.26~1.00,P=0.045)样本中,CD38表达越高,患者的PFS越长。晚期HCC患者中CD38的表达明显低于癌旁正常组织(χ^(2)=10.126,P=0.006);CD38高表达的患者使用PD-1抑制剂的效果优于CD38低表达的患者(χ^(2)=5.833,P=0.016),CD38的表达与PD-1抑制剂的效果之间具有一定的相关性(r=-0.404,P<0.01)。相对于CD38低表达的患者,CD38高表达的患者具有更长的总生存时间[(24.19±3.89)周比(29.56±3.35)周]和无进展生存时间[(14.32±2.13)周比(17.52±3.02)周](P<0.05)。BCLC分期、Child-Pugh分级及CD38的表达可能与患者的PFS相关。结论 晚期HCC患者的CD38表达低,高表达的CD38预示患者PD-1抑制剂效果较好。

CD34^+CD38^-KG1a白血病干细胞对同种异体自然杀伤细胞的抵抗作用及其机制

目的探讨CD34^+CD38^-KG1a白血病干细胞抵抗同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的机制。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34^+CD38^-KG1a细胞和4例健康个体外周血中NK细胞,并采用流式细胞术检测纯度;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞在不同效靶比(5∶1,10∶1,20∶1)下对K562和CD34^+CD38^-KG1a细胞的杀伤作用;聚合酶链式反应-序列特异性引物法分析NK细胞KIR和CD34^+CD38^-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因分型;流式细胞术检测K562和CD34^+CD38^-KG1a细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)-I类链相关分子A/B、人巨细胞病毒UL16结合蛋白(ULBP)1~3和人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子的表达。结果分选的CD34^+CD38^--KG1a细胞和NK细胞纯度分别为(94.25±2.16)%、(91.70±2.05)%。NK细胞在各效靶比下对CD34^+CD38^-KG1a细胞的杀伤率均低于K562细胞(P<0.05)。4例健康个体NK细胞KIR基因型为KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1和KIR3DL2,CD34^+CD38^-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因型为A30、30,B51、78,Cw4、16。K562细胞高表达NKG2D配体,CD34^+CD38^-KG1a细胞几乎不表达NKG2D配体,CD34^+CD38^-KG1a细胞中NKG2D配体表达率显著低于K562细胞(P<0.05);K562细胞中几乎不表达HLA-Ⅰ,CD34^+CD38^-KG1a细胞高表达HLA-Ⅰ,CD34^+CD38^-KG1a细胞中HLA-Ⅰ的表达率显著高于K562细胞(P<0.05)。结论CD34^+CD38^-KG1a细胞明显抵抗同种异体NK细胞的杀伤作用,其机制可能与高表达HLA-Ⅰ分子和低表达NK2D配体有关。

CD34＋/CD38low/-/CD123＋细胞表达水平对急性髓系白血病预后的意义

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+细胞表达水平,并分析CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+表达水平与预后的相关性。方法:采用流式细胞术检测148例初诊AML患者骨髓单个核细胞中CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+表达水平,分析CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+细胞表达水平与完全缓解率、无病生存率和总体生存率相关性。结果:初诊AML患者骨髓细胞中CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+阳性细胞中位表达率为2.8%(0.01%-67%)。AML患者CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+高表达与NPM1野生型呈正相关(x^2=5.194,P=0.023),而与FLT3-ITD突变阳性无相关性(x^2=0.418,P>0.05)。多变量回归分析显示,CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+高表达与较低的完全缓解率(P=0.035)、较差的无病生存(P<0.001)、较短的总生存(P<0.001)相关。结论:CD34^+/CD38^(low/-)/CD123^+表达率与AML患者治疗的反应及生存密切相关,在临床中可做为快速识别患者治疗失败的风险预后指标。

免疫磁珠分选白血病KG1a细胞中CD34^+CD38^-干细胞及其特性研究

目的从白血病KG1a细胞中分选CD34+CD38-干细胞并研究其生物学特性。方法免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞,流式细胞术分析细胞表面膜抗原、细胞周期,甲基纤维素培养体系观察其克隆性;以HL60、K562、CD34+CD38+细胞为对照,甲基偶氮唑蓝法检测柔红霉素对CD34+CD38-细胞的抑制作用;BALB/c裸鼠皮下接种,观察体内成瘤能力。结果分选的CD34+CD38-细胞纯度达95%以上,(69.03±3.25)%处于G0期,克隆形成率为(38.64±2.68)%,明显抵抗柔红霉素;不同浓度柔红霉素作用后,CD34+CD38-、CD34+CD38+、HL60、K562细胞的活性差异有统计学意义(F=961.136,P=0.000);CD34+CD38-在裸鼠皮下成瘤率显著高于CD34+CD38+细胞(P<0.05)。结论免疫磁珠法分选白血病干细胞简单易行,分选的细胞符合白血病干细胞生物学特性。

白藜芦醇对CD34^+CD38^- KG-1a白血病细胞凋亡的诱导作用

目的观察白藜芦醇(RES)诱导CD34+CD38-KG-1a白血病细胞凋亡的效应,初步探讨其作用机制。方法流式细胞术检测急性髓系白血病KG-1a细胞CD34和CD38的表达。以未加药物为对照,台盼蓝计数检测不同浓度(12.5、25.0、50.0、100、200μmol/L)RES对KG-1a细胞和外周血单个核细胞增殖的影响。选择KG-1a细胞抑制率约为50%的RES浓度作为后续实验的干预因素。AnnexinV-FITC/PI染色流式细胞术检测RES诱导KG-1a细胞的凋亡效应,real-time RT-PCR检测RES对KG-1a白血病细胞Bcl家族抗凋亡Bcl-2/Bcl-xl基因和促凋亡基因Bid/Bax表达的影响,分光光度法检测RES对KG-1a细胞Caspase-3活性的影响。结果 KG-1a细胞中CD34+CD38-细胞比例占(90.23±2.57)%。RES能抑制KG-1a白血病细胞生长,呈浓度依赖性。25.0μmol/L RES对KG-1a细胞的抑制率约为50%,而该浓度对正常单个核细胞增殖无抑制作用。25.0μmol/L RES能诱导KG-1a细胞发生早期凋亡(AnnexinV-FITC+PI-)和晚期凋亡(AnnexinV-FITC+PI+)。25.0μmol/L RES作用后的KG-1a细胞,抗凋亡基因Bcl-2和Bcl-xl表达下调,促凋亡基因Bid和Bax表达升高,Caspase-3活性增强。结论 RES能调节Bcl-2家族,诱导CD34+CD38-KG-1a白血病细胞凋亡。

Hes1对急性髓系白血病患者骨髓CD34^＋CD38^-细胞的作用及其机制研究

目的:研究Hes1对急性髓系白血病(AML)患者骨髓CD34+CD38-细胞的作用及其机制。方法:收集初治AML患者及正常供者骨髓样本后,通过密度梯度离心法获取单个核细胞,流式细胞术检测CD34+CD38-细胞比例及其细胞周期。通过免疫磁珠法分选CD34+CD38-细胞后,体外集落形成实验(CFC)检测其增殖能力,并通过Realtime PCR检测其Hes1的表达量。构建Hes1过表达逆转录病毒载体,感染正常供者骨髓CD34+细胞后,流式细胞术分析其细胞周期的改变,CFC检测其增殖的改变。结果:AML患者骨髓CD34+CD38-细胞比例明显低于正常对照,流式细胞术结果显示患者来源CD34+CD38-细胞大多数进入静止期,CFC结果显示患者CD34+CD38-细胞体外扩增能力下降。Realtime PCR结果发现患者CD34+CD38-细胞中Hes1表达上调。提高正常供者CD34+细胞中Hes1的表达后,细胞增殖减少,进入静止期。结论:在AML中CD34+CD38-细胞比例下降,进入静止期,与Hes1的表达上调有关。

慢性髓系白血病患者CD34^+ CD38^-细胞水平JunB和CDH13基因启动子区域的甲基化状态研究

慢性髓系白血病(CML)是骨髓造血干细胞恶性增殖的克隆性疾病,在CML患者细胞水平由于JunB和CDH13基因启动子区甲基化而使这2个抑癌基因的表达受损。为了探讨正常人和CML患者CD34+ CD38-细胞水平JunB和CDH13(cadhe rin-13)基因启动子区域甲基化状态及表达水平的差异,应用流式细胞仪分选出CD34+ CD38-细胞,采用甲基化特异性聚合酶链反应(MS-PCR)检测5例正常人和8例CML患者骨髓CD34+ CD38-细胞JunB和CDH13基因启动子区域甲基化状态,用实时定量PCR(RT-PCR)检测JunB和CDH13基因的表达情况。结果表明:JUNB和CDH13基因在正常人骨髓CD34+ CD38-细胞中呈完全性非甲基化状态,CML患者骨髓CD34+ CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区甲基化比例分别为87.5%(7/8)和50%(4/8),明显高于正常人(p<0.05)。CML患者骨髓CD34+ CD38-细胞中JunB和CDH13基因mRNA相对表达水平与正常人的相比明显降低(2-??CT分别为1/5.21和1/10.63)。结论:在CML患者骨髓CD34+ CD38-细胞中JunB和CDH13基因启动子区域都发生了高度的甲基化,它们的mRNA表达水平也明显降低,JunB和CDH13基因启动子区域甲基化在CML的发病机制中起到一定的作用,甲基化检测对CML的靶向治疗及新的治疗方法具有重要意义。

CD34，CD38，CD117抗原在急非淋白血病细胞中的表达

目的：为了解CD34,CD38,CD117抗原在急性非淋巴细胞白血病（ANLL）细胞中的表达情况及其临床意义.方法：采用常规三色直接免疫荧光标记法,使用流式细胞仪测定CD34,CD38,CD117抗原在31例ANLL患者细胞中的表达.结果：检测结果显示,31例中有15 例表达CD34 抗原,阳性均数率（54.3±26.4）%,28例表达CD38抗原,阳性均数率为54.4±26.7%,22例表达CD117抗原,阳性均数率（45.3±16.5）%.结论：CD34抗原,CD38抗原和CD117抗原的表达与ANLL有相关性.

益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144的影响

目的观察益气养阴活血中药对糖尿病肾病大鼠Notch/Hes1通路与血管内皮CD34、CD144作用机制。方法采取左肾切除术+高脂高糖饲料喂养联合腹腔注射STZ复制早期糖尿病肾病大鼠模型,将建模成功的大鼠随机分为模型组、西药贝拉普利组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组,设正常对照组,药物干预8周。观察24 h尿白蛋白、HE染色肾组织病理、免疫组化肾组织Hes1、Western blot法检测CD34、CD144的表达。结果与正常组比较,模型组24 h尿白蛋白、Hes1、CD34、CD144的含量比较均有明显差异(P<0.05);与模型组比较,中药高剂量组、中剂量组能降低24 h尿蛋白(P<0.05),中药各剂量组均能明显降低肾组织Hes1、CD34含量(P<0.05),中药高剂量组均能明显降低肾组织CD144含量(P<0.05);与西药组比较,中药各剂量组均能降低CD34(P<0.05),中药低剂量组降低CD144(P<0.05)。病理观察模型组大鼠出现肾小球硬化、萎缩,系膜基质增多、系膜出现增厚增宽并可见结节样增生等改变;中药高、中剂量组对上述病理改变有积极改善。结论益气养阴活血中药可以降低模型大鼠肾组织Hes1和CD34、CD144,发挥对肾功能的保护作用,延缓DN的发展。

急性髓系白血病患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达及其临床意义

目的:探讨初诊急性髓系白血病(AML)患者白血病细胞CD34和CD38抗原表达与预后的关系,阐明CD34和CD38抗原表达在预测AML患者预后中的作用。方法:收集初诊AML患者94例,采用流式细胞术检测AML患者白血病细胞CD34和CD38抗原的表达,依据CD38抗原表达将患者分为CD34+CD38-组(n=36)和CD34+CD38+组(n=58)。2组患者诱导方案均为IA方案。比较2组患者完全缓解率(CRR)、复发率、中位总生存时间(OS)、中位无病生存时间(DFS)和生存率。结果:CD34+CD38-组患者CRR为77.8%,CD34+CD38+组为86.2%,2组患者诱导治疗后CRR比较差异无统计学意义(P>0.05);CD34+CD38-组患者总复发率和1年内复发率(53.8%和36.0%)均高于CD34+CD38+组(27.9%和14.3%)(P<0.05);CD34+CD38-组患者中位OS(13.60个月)小于CD34+CD38+组(20.33个月)(P<0.05);CD34+CD38-组患者中位DFS(12.87个月)小于CD34+CD38+组(33.93个月)(P<0.05)。CD34+CD38-组患者1年和2年生存率(52.8%和38.9%)低于CD34+CD38+组(75.9%和48.3%)(P<0.05)。结论:白血病细胞CD34+CD38-抗原的表达为初诊AML患者提供一个新的预后指标,表达CD34+CD38-抗原患者预后不良。

NET-1、Ki67和CD34在胃癌组织中的表达及其临床病理意义

目的探讨胃癌组织中NET-1、Ki67和CD34表达的临床病理学意义。方法应用免疫组化二步法检测86例胃癌组织中NET-1、Ki67和CD34的表达,对三指标均阳性病例进行免疫组化三重标记法双染方法,原位检测三指标的表达特点和毗邻关系。所有病例随访60月以上。结果胃癌组织中NET-1、Ki67和CD34高表达分别为56.98%、74.42%和62.79%,三指标阳性表达呈显著正相关(P<0.01)。三指标高表达分别与肿瘤临床分期呈正相关(均P<0.05),与患者生存率呈负相关(均P<0.05),其3、5年生存率均显著低于相应的低表达组或阴性组(P<0.05,P<0.01)。NET-1、Ki67高表达分别与肿瘤分化呈负相关(均P<0.01)。NET-1、CD34高表达分别与癌浸润深度、淋巴结转移呈正相关(均P<0.05)。结论NET-1、Ki67和CD34在胃癌组织中高表达与癌细胞增殖、癌血管形成和预后差有关。

佐剂关节炎大鼠滑膜组织HIF-1α和VEGF及CD34表达上调促进血管新生

目的观察佐剂关节炎大鼠滑膜组织缺氧诱导因子1α(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)及CD34的表达,探讨类风湿性关节炎血管新生的机制。方法 30只大鼠随机均分为正常对照组和模型对照组,模型对照组采用Freund完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后19 d,采用反转录PCR检测滑膜组织HIF-1α、VEGF的mRNA表达,Western blot法检测HIF-1α、VEGF的蛋白表达,免疫组织化学染色检测大鼠肺组织HIF-1α、VEGF、CD34表达。结果与正常对照组比较,模型对照组关节炎症明显,滑膜组织CD34表达增加,VEGF、HIF-1αmRNA和蛋白表达显著增加;滑膜组织VEGF mRNA表达与足趾肿胀度呈正相关,HIF-1α蛋白表达与关节炎指数呈正相关,VEGF mRNA、HIF-1α蛋白表达量与CD34呈正相关。结论佐剂关节炎大鼠滑膜组织VEGF、HIF-1α、CD34过表达与滑膜血管新生有关。

胃肠道间质瘤CD117、CD34和DOG1免疫组化染色的最适修复方法

免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)染色是一种通过利用已知抗原或抗体来特异性标记待测组织中蛋白的方法,是目前病理诊断中不可或缺的重要手段。胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumors,GIST)是一种常发生于胃肠道的间叶源性肿瘤[1]。近年来发现,联合应用CD117、CD34和DOG1等一系列抗体的免疫组化检测,在GIST的诊断和用药中扮演着至关重要的角色[2-5]。由于甲醛固定、石蜡包埋后组织中抗原决定簇存在一定程度的交联封闭,因此组织中的抗原不能与目标抗体进行有效结合,影响免疫组化的染色结果,导致结果不稳定[6-7]。

B淋巴细胞白血病骨髓B细胞CD34^+CD38^+和CD34^+CD38^(low/-)细胞亚群的临床意义

本研究比较发病时免疫表型为CD34+CD38+和CD34+CD38low/-两组B淋巴细胞白血病(B-ALL)的生物学特性,并探讨其临床意义。选取54例初发B-ALL并经多参数流式细胞术检测为CD34+的B-ALL患者,根据CD38表达不同将其分为CD34+CD38+组(n=35)和CD34+CD38low/-组(n=19)。利用实时定量PCR的方法分别进行BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因的检测。随访标本利用7色流式细胞术检测微量残留病(MRD),平均随访时间12个月(1-28个月),平均随访间隔2个月(1-5个月)。结果表明,两组患者发病时WBC,血小板和血红蛋白水平及BCR-ABL,TEL-AML1和WT1基因阳性表达的比例均无统计学差异(P>0.05)。在诱导缓解后,CD34+CD38+组微量残留病阳性(MRD+)为28.57%(10/35),CD38low/-组MRD+为68.42%(13/19),CD34+CD38low/-组MRD+的检出率明显高于CD34+CD38+组(P<0.01)。在复发率上,CD34+CD38+组有2例,分别在第94天和第245天复发,复发率为5.71%(2/35)。CD34+CD38low/-组有7例复发,复发率为36.84%(7/19),中位复发时间263 d(46-468 d),两组间具有明显统计学差异(P<0.01)。本研究以16岁为年龄分界点,CD34+CD38+组16岁以上患者为8人(8/35),CD34+CD38low/-组16岁以上患者为10人(10/19),两组间有统计学差异(P<0.05)。结论:CD34+CD38low/-患者在成人中比例较高,且CD34+CD38low/-组在治疗后更易出现MRD+和复发。

PAI-1、u-PA、VEGF、CD34在动脉粥样硬化鼠急性脑缺血中的表达及意义

目的:探讨PAI-1、u-PA、VEGF、CD34在动脉粥样硬化大鼠急性脑缺血中的表达及意义。方法:将大鼠随机分成正常饮食组(A组)和高脂饮食组(B组),分别制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)模型;观察大鼠神经病学评分,HE染色法检测脑缺血区病理改变,免疫组化法检测缺血区PAI-1、u-PA、VEGF、CD34表达,并应用流式细胞仪计数外周血CD34+血管内皮祖细胞(EPC)。结果:脑缺血后再灌注24h,PAI-1、u-PA、VEGF的表达增高,B组PAI-1、VEGF表达较A组明显,u-PA相反;再灌注48h后,外周血CD34+EPC计数B组(0.89%)较A组(1.11%)降低(P<0.05),脑缺血区CD34+细胞B组也少于A组。结论:PAI-1、u-PA及VEGF高表达促进了动脉粥样硬化的形成并加重急性脑缺血/再灌注损伤,CD34+低表达及EPC减少使血管再生能力降低。

补肝肾益气血方对^(60)Co γ射线所致小鼠骨髓损伤p53、p21^(WAF1)、caspase-3、CD_(34)蛋白表达的影响

目的:探讨补肝肾益气血方对辐射损伤的防护作用及其机理。方法:设正常对照组、病理模型组、补肝肾益气血方高、低剂量组、阳性药物组5组。补肝肾益气血组给予补肝肾益气血方,阳性药物组给予复方阿胶浆,其余给予生理盐水。灌胃10天后,以^(60)Co γ射线全身照射小鼠造成辐射损伤,运用免疫组化法观察补肝肾益气血方对辐照小鼠骨髓p53、p21^(WAF1)、caspase-3、CD_(34)等蛋白表达的影响。结果:该方能抑制受照鼠骨髓有核细胞p53基因突变,降低p53蛋白表达,促进p21^(WAF1)表达,显著降低Caspase-3表达,增加CD_(34)表达。结论:补肝肾益气血方对^(60)Co γ射线所致小鼠骨髓损伤有较好保护作用,其作用机理主要为能促进受损骨髓造血机能恢复和改善造血微环境。

非小细胞肺癌中TGF-β_1与肿瘤相关纤维母细胞α-SMA及CD34表达的相关性和意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)中肿瘤相关纤维母细胞蛋白的表达与癌侵袭的关系及TGF-β1是否与其蛋白表达改变有关。方法采用免疫组织化学ElivisionTM plus法检测60例NSCLC及相应癌旁非肿瘤组织中纤维母细胞α-SMA、CD34和TGF-β1的表达,并结合临床病理进行分析。结果 TGF-β1蛋白在NSCLC组表达明显高于癌旁非肿瘤组(P<0.05),与TNM分期、肿瘤分化、淋巴结转移、肿块大小有关(P<0.05);α-SMA在NSCLC间质中的表达高于癌旁非肿瘤组(P<0.05);与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、肿块大小有关(P<0.05);CD34在NSCLC间质中的表达明显低于癌旁非肿瘤组(P<0.05);NSCLC组织中,TGF-β1与α-SMA表达呈正相关(r=0.435,P=0.001),与CD34表达呈负相关(r=-0.386,P=0.003),α-SMA与CD34表达呈负相关(r=-0.329,P=0.011)。结论与癌旁非肿瘤组织中纤维母细胞相比,NSCLC间质中纤维母细胞CD34表达缺失,而转变表现为α-SMA(+)的肌纤维母细胞的特征,联合检测两者将可能作为肿瘤相关纤维母细胞较特异的标记;肿瘤相关纤维母细胞与NSCLC的侵袭转移密切相关;NSCLC中肿瘤细胞可能通过分泌TGF-β1作用于肿瘤间质,促进CD34(+)纤维母细胞转变为α-SMA(+)肌纤维母细胞。