CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34^+细胞植入NOD/SCID小鼠的影响

为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血(UCB)CD34+细胞移植的NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确最佳的移植时机,将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于c细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经60Coγ射线照射的NOD/SCID小鼠,观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42天处死小鼠,用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果表明:(1)MSC和UCB CD34+细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度,缩短白细胞和血小板恢复时间;二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度,且输注UCB CD34+细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者。(2)与单纯UCB CD34+细胞移植相比较,不同时相输注MSC均可促进UCB CD34+细胞的植入,三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异。结论:人骨髓MSC与UCB CD34+细胞共移植时,以同时移植效果最佳,此结果为MSC的临床应用提供了实验依据。

外周血CD34^+造血干细胞加适量T细胞输注进行HLA半相合的异体移植

对1例Ph+染色体的急淋患儿进行母子间HLA半相合的异体外周血造血干细胞移植 ,为避免由于HLA不相合所产生的由T细胞介导的严重移植物抗宿主病(GVHD) ,采用了CD34+细胞正性分离去除淋巴细胞 ;同时为避免由于T细胞过度去除而引起宿主抗移植物反应(HVG)导致植入失败 ,在移植次日又加入部分T细胞 ,使病儿接受CD34 +细胞6×106/kg 和CD3 +细胞1.05×107/kg。结果 :随访1年来 ,红系、粒系和巨核系均恢复正常 ,临床上仅出现一过性的IIOaGVHD以及轻微的局限于口唇粘膜的cGVHD。STR位点DNA检验以及染色体检查 :移植后 +180天受体已从供体型嵌合体转为完全供体型 ,病儿获得植入成功。结果表明 ,常规剂量的CD34 +细胞移植加以适量CD3 +T细胞 ,可克服HLA部分不相配的难点 ,减轻GVHD ,同时也可避免由于过度的T细胞去除而出现的HVG。

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨髓/外周血混合采集物中CD34+细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF 5μg/(kg.d),连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞数量。结果表明:rhG-CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为(1.15±0.60)×109/L;骨髓和外周血采集物中的CD34+细胞总量分别是(5.85±2.93)×107和(1.33±0.77)×108;骨髓和外周血混合采集物的CD34+细胞总量是(1.92±0.86)×108。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数(×109/L)与骨髓采集物中CD34+细胞的总量(相关系数:r=0.265,p=0.027)、外周血采集物中CD34+细胞总量(r=0.340,p=0.004)以及混合移植物中CD34+细胞的总量(r=0.398,p=0.001)均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34+细胞的总量均呈正相关关系(p值分别为0.027、0.004和0.001)。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34+细胞总量预测的敏感性是71%,特异性是70%(p=0.007)。结论:rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34+细胞总量即采集效果。

用^(18)F-FDG和^(99)Tc^m-MIBI显像评估冷冻心肌骨髓CD34^+细胞移植后代谢和灌注的变化

目的 用1 8F 脱氧葡萄糖 (FDG)、99Tcm 甲氧基异丁基异腈 (MIBI)评价犬冷冻心肌骨髓CD34+ 细胞移植后心肌代谢和灌注的变化。方法 1 2只杂种犬分为细胞移植组和对照组。用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34+ 细胞并注射到用CO2 冷冻建立的慢性心肌梗死模型区 ,对照组注射伊思考夫改良杜尔贝可培养基 (IMDM)培养液。分别于建立模型前、后 4周和干细胞移植后 8周行1 8F FDG和99Tcm MIBI心肌显像 ,评价细胞移植结果 ,计算冷冻心肌代谢与灌注显像的F值。干细胞移植后 8周取心肌做第 8因子免疫组织化学和病理检查。结果 正常心肌代谢与灌注显像清晰 ,F值接近 0 ,干细胞移植前、后 8周冷冻心肌1 8F FDG与99Tcm MIBI显像的F值分别为 5 . 5 0± 1 . 31 ,5 4 4± 0 . 70与 1 1 7±0. 4 1 ,1 . 5 0± 0 . 5 5 (P <0 . 0 1 ) ;对照组为 5 . 5 3± 0. 80 ,5. 5 4± 1 . 2 9与 5. 0 0± 1 . 5 5 ,5 . 0 8± 1. 4 6 (P >0 . 0 5 ) ,骨髓CD34+ 细胞移植使冷冻心肌的代谢与灌注明显得到恢复。干细胞移植后 8周冷冻区血管密度高于对照组 (P <0 . 0 1 )。结论 骨髓CD34+ 细胞移植后冷冻区存在大量活的心肌细胞。

骨髓CD34^+细胞移植促进梗死心肌血管形成的实验研究

目的:研究骨髓CD34+细胞移植对梗死心肌血管再生的作用。方法:用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34+细胞并注射到CO2冷冻建立的慢性心肌梗死模型区,2,4,8周后取标本,应用免疫组化方法检测血管第八因子的表达,计数血管密度,分别于建立模型前、后4周和干细胞移植后8周应用99TCm-甲氧基异丁基异腈(99TCm-MIBI)单光子计算机断层扫描对心肌血流灌注进行评价,计算放射性分布缺损计数(F值)。结果:骨髓CD34+细胞移植2,4,8周后梗死区血管密度(200倍视野下数)分别为(3.2±1.2),(8.2±0.8),(12.7±2.2)条/视野,明显高于对照组(t=5.09,14.07,8.67,P均<0.05)。骨髓CD34+细胞移植前、后8周的心肌灌注显像F值分别为5.44±0.70,1.50±0.55,细胞移植后梗死区心肌血流灌注得到明显改善(t=10.84,P均<0.05)。结论:骨髓CD34+细胞梗死心肌移植可明显促进梗死区血管形成,提高梗死区心肌的血流灌注。

CD34^+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响

目的研究分离骨髓干细胞后CD34+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响。方法回顾性分析自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化病例41例,其中CD34+细胞含量不足5%的27例,CD34+细胞含量超过5%(含5%)的14例。分析上述病例术后2～4周的实验室检测指标。结果在CD34+细胞含量不足5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、白蛋白(Alb)、碱性磷酸酶(ALP)和血小板(PLT)均较术前明显增高(P<0.05)。在CD34+细胞含量超过5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、Alb较术前明显增高(P<0.05)。术前CD34+细胞含量超过5%病例组的PLT平均值[(88.357±38.454)×109/L]明显低于CD34+细胞含量不足5%的病例组[(132.590±127.260)×109/L]。结论自体骨髓干细胞移植可以有效的提升肝硬化患者血清总蛋白和Alb水平,本组病例中CD34+细胞含量的不同并未明显影响术后患者血清总蛋白、Alb的恢复水平。自体骨髓干细胞移植可能影响胆汁的排泌。两组病例脾功能亢进程度不同可能是导致患者CD34+细胞含量差异的原因。

纯化的自体CD34^+细胞移植治疗多发性骨髓瘤的临床观察

目的采用CD34+细胞体外分选技术对多发性骨髓瘤患者进行自体CD34+细胞移植,以降低自体移植后肿瘤复发率。方法对1例多发性骨髓瘤患者采用CliniMACS临床型细胞富集仪,利用磁性分选技术收集CD34+细胞,患者于预处理后,输注分选后的CD34+细胞。结果CD34+细胞体外纯化富集可使回输CD34+细胞中位数达3.9×106/kg,CD34+细胞回收率为35%,纯度达到97.6%;移植后,患者于+14d时,中性粒细胞数>0.5×109/L,+35d时血小板>20×109/L,提示造血重建。结论CD34+细胞移植后获得迅速、稳定的造血重建。体外CD34+细胞纯化富集后移植可望提高多发性骨髓瘤患者自体移植疗效。

不同时间移植人脐血CD34^+细胞可影响心肌梗死大鼠心功能及血管内皮细胞生长因子的分泌

背景:干细胞移植可以改善心脏功能,改善预后。目的:观察不同时间经静脉移植人脐血CD34+细胞对心肌梗死大鼠心功能及细胞因子分泌的影响。方法:结扎冠状动脉左前降支制备Wistar大鼠心肌梗死模型,于梗死后1,5,10,30d经尾静脉注入0.5mL人脐血CD34+细胞(实验组)或磷酸盐缓冲溶液(对照组)。结果与结论:与对照组相比,梗死后5,10d实验组大鼠左室射血分数明显升高(P<0.05),左室收缩末内径明显减小(P<0.05),左室后壁增厚率更高(P<0.05),毛细血管密度明显增加(P<0.05),且以梗死后10d移植大鼠心功能改善效果最明显(P<0.05)。梗死后10d实验组心肌局部血管内皮细胞生长因子最高(P<0.05)。说明大鼠心肌梗死后5,10d经静脉移植脐血CD34+细胞可明显改善心功能,梗死后10d移植血管内皮细胞生长因子分泌更多,血管生成更多,对心功能的改善更明显;同时说明脐血单个核细胞移植可能是通过增加血管内皮细胞生长因子分泌,提高毛细血管密度来改善心功能的。

CD34^+细胞自身移植治疗儿童难治型系统性红斑狼疮

目的探讨治疗儿童难治型系统性红斑狼疮 (SLE)积极、有效的方法。方法对 2例病程分别为 5年和 7年 ,狼疮肾Ⅲ级和Ⅳ级 ,主要表现为持续性血小板减少、蛋白尿和浆膜炎的患儿进行CD34+ 细胞分选的自身干细胞移植。首先经惠尔血动员、CS 30 0 0血细胞分离机获取单个核细胞 ,通过CliniMACSCD34+ 细胞分选仪分别得到了 1.7× 10 6/kg及 1.0× 10 6/kgCD34+细胞 ,采集物中分别尚存 2× 10 5/kg和 1× 10 4/kg的CD3+ 细胞。用CTX 5 0mg/kg·d× 4d +ATG(FresenniusS 5mg/kg·d× 3d)预处理。结果两患者分别于 +9d和 +7d获粒细胞重建 ,自 +15d起血小板维持于正常水平。现已分别随访 13月和 6月 ,原发病症状完全消失 ,自身免疫相关抗体全部转阴 ,但细胞免疫功能仍未恢复 ,CD4细胞仍处于低水平。结论CD34+ 细胞分选的自身干细胞移植治疗儿童难治型红斑狼疮近期疗效满意。

不同时期移植人脐血CD34^+细胞对大鼠脊髓损伤修复的对比研究

目的研究不同时期移植人脐血CD34+细胞修复大鼠脊髓损伤的效果和机制。方法免疫磁珠法从人新鲜脐血中分离得到CD34+细胞。雌性Wistar大鼠96只,以IMPACTOR MODEL-Ⅱ脊髓损伤打击器建立T10脊髓损伤模型,随机均分为免疫抑制剂应用组、损伤后急性期移植组和损伤后亚急性期移植组,对各组后肢功能恢复情况进行BBB评分,损伤中心行双重免疫荧光染色、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色和血管明胶墨汁灌注观察。结果损伤后第8~56天,细胞急性期移植组的BBB评分高于其余2组(P<0.05);TTC染色示组织活力降低区域比例小于其余2组(P<0.01);明胶墨汁灌注示脊髓损伤中心血管密度大于其余2组(P<0.01);亚急性期移植组的细胞存活密度大于急性期移植组(个/视野:7.51±1.00 vs 5.51±0.89,t=6.051,P<0.01),2组均未观察到移植细胞的神经分化。结论人脐血CD34+细胞急性期移植可通过提高脊髓损伤中心血管密度促进微循环恢复,增加组织活力,促进大鼠脊髓损伤后肢体功能恢复。

自体外周血纯化CD34^+细胞移植治疗进展型多发性硬化

目的评价自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗进展型多发性硬化(PMS)的安全性和疗效。方法2002-09—2006-03期间15例PMS患者在首都医科大学宣武医院接受了自体外周血纯化CD34+细胞移植。单独使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员造血干细胞,全部回输采集物进行CD34+细胞纯化。预处理采用BEAM(卡氮芥、依托泊甙、阿糖胞苷、马法兰)方案。中位随访期为21(3～45)个月,移植前后应用扩充神经功能残疾量表(EDSS)、年平均发病次数进行疗效评价。结果分选后中位CD34+细胞纯度为93.2(78.6～97.7)%,中位回收率为67.0(22.4～79.8)%,相当于减少了4个对数级的T细胞。无移植相关死亡,造血重建时间与其自体外周造血干细胞移植(APBSCT)相当,未出现严重的毒性反应及并发症。患者移植后12个月EDSS评分(3.95±2.55)较移植前(5.64±0.71)降低(P<0.05),年平均发病次数移植后(0.45±0.82)较移植前(1.31±0.71)减少(P<0.05)。移植后45个月疾病无活动者生存率为(47.01±17.87)%,EDSS评分无进展者(包括稳定和改善)生存率为(57.69±20.24)%。结论自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗PMS安全有效。

脐血中CD34^+CD38^+细胞含量对急性白血病患者移植后造血重建的影响

为了探讨非亲缘脐血移植中CD34+ CD38+ 细胞回输量对造血重建的影响 ,采用流式细胞术分析复苏后的CD34+ CD38+ 细胞数 ,并对 2 0例急性白血病患者的体重、中性粒细胞 (ANC)和血小板 (Plt)恢复时间进行测定。结果表明 :2 0例接受的CD34+ CD38+ 细胞输入量为 (9.85 - 32 5 .71)× 10 4/kg ,其ANC恢复 >5× 10 8/L的中位时间为 18 5 (11- 32 )天。在 19例患者中Plt恢复 >2× 10 10 /L的中位时间为 4 5 (12 - 118)天。CD34+ CD38+ 细胞输入量与ANC和Plt恢复时间存在相关 ,r值分别为 - 0 .5 77(P <0 .0 1)和 - 0 .5 0 3(P <0 0 5 )。结论 :CD34+ CD38+细胞含量与造血恢复时间相关 ,足量输入CD34+ CD38+

外周血干细胞移植中标本放置时间对CD34^+细胞及单个核细胞计数结果的影响

目的探讨标本放置温度及时间对外周血CD34+细胞及单个核细胞(MNC)计数结果的影响。方法抽取10例健康供者或自体外周血干细胞(APBSCT)移者经粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员第5天EDTA-K2抗凝静脉血,各分装2管,分别在室温和4℃条件下保存,对每份外周血标本分别于0、1、2、4、6、8、10、12、24h计数MNC和CD34+细胞。结果室温放置的标本中,MNC和CD34+细胞计数随着标本放置时间的延长而逐渐减低,放置到8h时,CD34+细胞计数和0h相比差异有统计学意义(t=5.04,P<0.05);放置到12h时,MNC计数和0h相比差异有统计学意义(t=3.68,P<0.05)。4℃条件下,标本放置到24h,MNC和CD34+细胞计数结果和0h相比差异均无统计学意义(t分别为0.50、1.24,P>0.05)。结论为确保检测结果的准确性,室温放置的标本CD34+细胞计数应在采血后8h内完成,MNC计数可在采血后10h内完成,外周血标本最好放置于4℃条件下保存。

自体外周血CD_(34)^+造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤

[目的]探讨自体外周血CD+ 造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤的可行性。[方法]应用CliniMACS系统分选纯化患者外周血CD+ 造血干细胞 ,用流式细胞仪检测分选纯化结果。选马法兰200mg/m2 作为预处理方案。[结果]分选纯化结果 ,单个核细胞数为3.7136×108,活性率96.6% ,CD+ 细胞数3.68018×108,即5.52×106/kg。移植后患者骨髓像获得完全缓解。移植相关并发症少且易于控制。[结论]自体外周血CD+ 造血干细胞移植治疗多发性骨髓瘤是安全、有效、可行的。

化疗后恰当时机使用G-CSF能显著提高自体外周血干细胞移植物中CD34^+细胞的含量

本研究旨在观察COAEP化疗后选择不同时机使用G-CSF对动员自体外周血干细胞(PBSC)产率的影响。选择39例恶性淋巴瘤(NHL和HD)或多发性骨髓瘤(MM)患者,接受相同的动员化疗方案(COAEP),包括CTX400mg/m2d1,VLB2mg/m2d1,Ara-C60mg/m2×d1-5,VP-16 60mg/m2×d1-5,prednisone40mg/m2×d1-5。历史对照组(12例)在化疗后外周血白细胞降至最低点首次回升时使用G-CSF(filgrastim)。试验组(27例)在外周血白细胞稳定回升(白细胞在首次回升后仍会出现波动2-3天)时使用G-CSF。G-CSF以5μg/kg每天1次皮下注射直至最后1次PBSC采集前。2组患者开始使用G-CSF后每日进行血常规检查,当白细胞总数大于10.0×109/L,单个核细胞(MNC)大于1.0×109/L时使用COBE血细胞分离机,以自动干细胞分离程序采集PBSC。结果表明,2组病例都使用了烷化剂(累积剂量无统计学差异),试验组获得26.4×106/kg CD34+细胞,显著高于历史对照组3.1×106/kg CD34+细胞(p=0.0031)。结论 :化疗后选择恰当的时机使用G-CSF能显著提高移植物中CD34+细胞含量。

H-2半相合小鼠CD34^+细胞和TK^+T细胞移植建立急性GVHD模型(英文)

目的建立H-2半相合小鼠CD34+细胞和TK+T细胞混合移植急性GVHD模型。方法自亲代雄性代鼠骨髓分离CD34+细胞,同时取脾脏T细胞转染tk基因,两者移植雌性F1受鼠,每只输入CD34+细胞和TK+T细胞分别为1.0×105和1.0×107。单纯照射组和CD34+细胞组作对照。结果CD34++TK+T细胞组均发生急性GVHD,生存时间13.3±1.2天,受鼠死亡前外周血白细胞1.76±0.25×109/L,病理表现与单纯照射组明显不同。单纯照射组小鼠生存时间6.5±0.8天,与CD34++TK+T细胞组比较,P <0.05。CD34+细胞组和CD34++TK+T细胞组小鼠外周血检查可见Y染色体。结论H-2半相合CD34+细胞和TK+T细胞混合移植能建立急性GVHD模型。

造血干细胞移植中单个核细胞计数与CD34^+细胞计数的比较

目的探讨造血干细胞移植中单个核细胞(MNC)计数与CD34+细胞细胞计数之间的比较。方法 2006年4月-2012年8月,32例患者(男18例,女14例,中位年龄32岁)在我院进行外周血造血干细胞移植。25例自体、7例异基因(5名父系供者,2名同胞供者,男5例,女2例,中位年龄28岁)接受统一的动员方案,用全自动血细胞分离机以MNC程序进行外周血造血干细胞(PBSC)采集。32例患者均进行MNC计数及CD34+细胞计数,进行相关分析,比较两种计数指标对造血重建的影响。结果①32例受者输入MNC的中位数为6.75(2.92-18.76)×108/Kg,输入CD34+细胞的中位数5.03(2.35-15.14)×106/Kg;②32例受者造血重建均达到了100%。。结论 MNC作为造血干细胞含量的计数依据,其植活率和植活速度与CD34+细胞作为依据的病例相似,结果表明:MNC计数完全可代替CD34+细胞计数,可作为造血干细胞移植中造血干细胞含量的指标。