CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

慢性阻塞性肺疾病患者血清VEGF水平、外周血CD34^(+)细胞数量与骨骼肌功能障碍的关系

目的检测慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者血清血管内皮生长因子(VEGF)水平、外周血CD34^(+)细胞数量,并分析二者与骨骼肌功能障碍的关系。方法选取北京市门头沟区医院2021年7月至2022年12月收治的96例COPD患者,依据COPD患者骨骼肌功能障碍诊断标准将患者分为骨骼肌功能障碍组52例和无骨骼肌功能障碍组44例;选择同期在医院体检的健康者96例为对照组。测定所有受试者肺功能指标[用力肺活量(FVC)、第一秒用力呼气容积占预计值的百分比(FEV1%)、第一秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV1/FVC)],骨骼肌功能[握力、4m步速、5次起坐试验时间、6min步行距离(6MWD)],血清C-反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)水平;酶联免疫吸附法、流式细胞仪分别检测血清VEGF水平、CD34^(+)细胞数量;分析COPD患者血清VEGF、CD34^(+)细胞数量、骨骼肌功能的相关性,COPD患者发生骨骼肌功能障碍的影响因素,血清VEGF、CD34^(+)细胞数量预测COPD患者发生骨骼肌功能障碍的价值。结果与对照组相比,无骨骼肌功能障碍组FVC、FEV1%、FEV1/FVC、握力、4m步速、6MWD降低(P<0.05),5次起坐试验时间较长、CRP、WBC水平升高(P<0.05),骨骼肌功能障碍组BMI、FVC、FEV1%、FEV1/FVC、握力、4m步速、6MWD降低(P<0.05),5次起坐试验时间较长、CRP、WBC水平升高(P<0.05);与无骨骼肌功能障碍组相比,骨骼肌功能障碍组BMI、握力、4m步速、6MWD降低(P<0.05),5次起坐试验时间较长(P<0.05)。对照组、无骨骼肌功能障碍组、骨骼肌功能障碍组血清VEGF水平依次升高,CD34^(+)细胞数量依次降低(P<0.05)。COPD患者血清VEGF水平与CD34^(+)细胞数量呈负相关(P<0.05);血清VEGF水平与握力、4m步速、6MWD呈负相关(P<0.05),与5次起坐试验时间呈正相关(P<0.05);CD34^(+)细胞数量与握力、4m步速、6MWD呈正相关(P<0.05),与5次起坐试验时间呈负相关(P<0.05)。BMI低水平、VEGF高水平、CD34^(+)细胞数量低水平是COPD患者发生骨骼肌功能障碍的危险因素(P<0.05)。血清VEGF、CD34^(+)细胞数量、两者联合预测COPD患者发生骨骼肌功能障碍的曲线下面积分别为0.900、0.835、0.935。结论COPD患者血清VEGF水平明显增加,外周血CD34^(+)细胞数量明显下降,二者水平变化与骨骼肌功能障碍的发生具有相关性。

影响外周血CD34^+细胞纯化的相关因素

背景:造血干细胞具有良好的自我复制和更新的能力,CD34+细胞具备有造血干细胞的标志。目的:分析影响外周血CD34+细胞纯化的因素。方法:90例患者,经粒细胞集落刺激因子5μg/(kg·d)动员1～3d后,应用COBE血细胞分离机采集外周血单个核细胞液80～100mL,经CliniMACS免疫磁珠分选技术纯化CD34+细胞。结果与结论:90例CD34+细胞平均数为(1.73±1.15)×107,经流式细胞仪分析,CD34+细胞阳性率大于80%。COBE血细胞分离机单次收集的循环血量在980～1100mL时,利于CD34+细胞收集(P=0.005);动员后白细胞浓度在(16～21)×109L-1时,利于CD34+细胞收集(P<0.05);中间细胞和淋巴细胞总比例超11%时,利于CD34+细胞收集(P<0.05);单个核细胞液血小板小于2100×109L-1时,利于CD34+细胞的收集(P<0.05);年龄小于16岁,CD34+细胞数高(P=0.003);CD34+细胞抗体的温度、磁性标记及细胞处理时离心力的大小,均有影响。结果提示,经CliniMACS免疫磁珠细胞分选技术纯化的CD34+细胞能满足临床需要,实验稳定性好,重复性好;注重相关因素的影响,可提高纯化的CD34+细胞数量。

脐血CD34^+细胞的分离与纯化

脐血造血干细胞的分离是进行干细胞移植、体外扩增培养的关键。研究采用明胶自然沉降法、Fi-coll分层法分离脐血MNC后,用MACS分离纯化CD34+细胞,计数并用流式细胞仪进行纯度分析。结果显示:每份脐血的采集量平均为95±52 ml,3 g/dl明胶自然沉降法所获MNC密度平均为(5.76±0.67)×107/ml;CD34+细胞密度平均为(5.53±1.16)×105/ml,较Ficoll分层法高(P<0.01)。因此,3 g/dl明胶自然沉降法是一种较理想的分离MNC的方法,用明胶沉降法和MACS相结合是分离脐血CD34+细胞的理想方法。

纯化的自体CD34^+细胞移植治疗多发性骨髓瘤的临床观察

目的采用CD34+细胞体外分选技术对多发性骨髓瘤患者进行自体CD34+细胞移植,以降低自体移植后肿瘤复发率。方法对1例多发性骨髓瘤患者采用CliniMACS临床型细胞富集仪,利用磁性分选技术收集CD34+细胞,患者于预处理后,输注分选后的CD34+细胞。结果CD34+细胞体外纯化富集可使回输CD34+细胞中位数达3.9×106/kg,CD34+细胞回收率为35%,纯度达到97.6%;移植后,患者于+14d时,中性粒细胞数>0.5×109/L,+35d时血小板>20×109/L,提示造血重建。结论CD34+细胞移植后获得迅速、稳定的造血重建。体外CD34+细胞纯化富集后移植可望提高多发性骨髓瘤患者自体移植疗效。

免疫磁珠法纯化小鼠CD34^+造血干细胞

目的探讨免疫磁珠法(MiniMACS)能否用于纯化小鼠骨髓CD34+造血干细胞。方法应用免疫磁珠纯化小鼠骨髓CD34+细胞,流式细胞仪(FACS)评估纯化效率,检测纯化后的细胞活力。结果纯化后CD34+细胞纯度81.5%(范围76.80%~85.38%),回收率47.54%(范围40.50%~54.31%),纯化前后细胞活力不受影响(P=0.169)。结论应用MiniMACS纯化小鼠骨髓可获得高纯度CD34+细胞,并不影响细胞活力。

自体外周血纯化CD34^+细胞移植治疗进展型多发性硬化

目的评价自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗进展型多发性硬化(PMS)的安全性和疗效。方法2002-09—2006-03期间15例PMS患者在首都医科大学宣武医院接受了自体外周血纯化CD34+细胞移植。单独使用粒细胞集落刺激因子(G-CSF)动员造血干细胞,全部回输采集物进行CD34+细胞纯化。预处理采用BEAM(卡氮芥、依托泊甙、阿糖胞苷、马法兰)方案。中位随访期为21(3～45)个月,移植前后应用扩充神经功能残疾量表(EDSS)、年平均发病次数进行疗效评价。结果分选后中位CD34+细胞纯度为93.2(78.6～97.7)%,中位回收率为67.0(22.4～79.8)%,相当于减少了4个对数级的T细胞。无移植相关死亡,造血重建时间与其自体外周造血干细胞移植(APBSCT)相当,未出现严重的毒性反应及并发症。患者移植后12个月EDSS评分(3.95±2.55)较移植前(5.64±0.71)降低(P<0.05),年平均发病次数移植后(0.45±0.82)较移植前(1.31±0.71)减少(P<0.05)。移植后45个月疾病无活动者生存率为(47.01±17.87)%,EDSS评分无进展者(包括稳定和改善)生存率为(57.69±20.24)%。结论自体外周血纯化CD34+细胞移植治疗PMS安全有效。

CD34^+细胞纯化移植治疗高危或复发的急性淋巴细胞性白血病

为尽可能将采集的自体外周血造血干细胞中肿瘤细胞污染的程度减少到最低、尽可能去除引起移植物抗宿主病(GVHD)的效应细胞 -T细胞 ,以避免父子/母子之间半相合移植后发生严重GVHD可能 ,2例Ph( + )染色体的高危急淋和1例复发急淋被进行自体/异体CD34+ 细胞纯化移植。移植治疗后 :3例病儿全部获得血液系统恢复 ,2例异体移植仅出现轻度的I°-II°GVHD ,STR位点DNA检验以及染色体检查证实均植入成功。病情转归 :1例自体移植于移植后16个月复发 ;1例异体移植于87天感染病毒性多发性神经根炎死亡 ;1例异体移植目前为移植后17个月 ,多次复查骨穿 ,均提示处于缓解状态 ,Ph染色体和bcr/abl基因仍为阴性。结果表明 ,CD34 +细胞移植可以克服异体移植时HLA部分不相配的难点 ,减轻GVHD ;自体CD34+ 细胞移植虽然减少了植入的污染细胞 ,但由于缺乏移植物抗白血病反应 ,移植后仍然有体内白血病细胞复发可能 ,仍然需要维持治疗。

纯化的自体CD34^+细胞移植治疗恶性血液病临床对照观察

目的 分析CD34+ 纯化自体造血干细胞移植治疗恶性血液病的临床疗效。方法 11例病人进行了CD34+ 纯化自体造血干细胞移植 ,8例患者进行了未分选的自体造血干细胞移植 ,动员方案为CTX+Vp 16联合G CSF。CD34+ 细胞分选采用CliniMACS系统。结果 分选后CD34+ 细胞纯度达到(88.99± 6 .88) % ,回收率达到 (6 9.0 6± 17.0 7) %。 11例分选患者感染率为 (5 / 11例 ) ,复发率为 (1/ 11例 ) ,死亡率为 (3/ 11例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间为 (11± 1)天 ,血小板 >2 0× 10 9/L为(13± 3)天 ,8例未行CD34+ 分选患者的感染率 (4/ 8例 ) ,复发率为 (3/ 8例 ) ,死亡率为 (5 / 8例 )。外周血中性粒细胞 >0 .5× 10 9/L时间 (11± 1)天和血小板 >2 0× 10 9/L(14± 4 )天。结论 利用CliniMACs系统体外进行外周血CD34+ 细胞的富集与纯化纯度、回收率均满意 ,自体移植后造血功能重建顺利 ;与对照相比造血重建时间、感染率无显著差别 。

免疫磁珠法分离和纯化重症肌无力患者骨髓CD34^+造血干细胞

目的 分离和纯化重症肌无力 ( MG)患者骨髓 CD3 4+造血干细胞。方法 采用免疫磁珠法 ( Mini MACS)分离和纯化 CD3 4+ 细胞 ,用流式细胞仪对其进行评估并检测纯化后细胞活力。结果 骨髓分离纯化前、后CD3 4+细胞的百分率分别为 ( 2 .65± 0 .65 ) %、( 85 .3 7± 7.47) % ( P<0 .0 0 1 ) ;CD3 4+细胞分离纯化前、后细胞活力未受影响 ( P >0 .0 5 )。结论 Mini MACS可有效地分选 MG患者 CD3 4+骨髓造血干细胞 ,且细胞活力不受影响。

妊娠及围产因素对子代脐带血CD34^(+)造血干细胞的影响分析

目的分析妊娠及围产因素对子代CD34^(+)造血干细胞数量和脐带血有核细胞总数的影响。方法选择乌鲁木齐市妇幼保健院2021年5月至2022年5月收集的120例健康产妇的新生儿脐带血标本,其中男性60例,女性60例;新生儿体质量2500~4000 g。采用XE-2100全自动血液分析仪对子代脐带血中的有核细胞进行计数。采用流式细胞分析仪分析CD34^(+)造血干细胞。收集新生儿及相应产妇的临床资料,主要包括孕母年龄、孕母血型、孕母身体质量指数(BMI)、孕母过敏史、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、分娩方式、产次、孕周、新生儿性别、新生儿体质量、胎盘质量、是否胎膜早破、是否羊水污染、是否脐带绕颈等信息,分析其对脐带血CD34^(+)造血干细胞影响。结果妊娠期因素主要有孕母年龄、孕母血型、孕母BMI、孕母过敏史、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、分娩方式、产次和孕周。围产期因素主要包括新生儿性别、新生儿体质量、胎盘质量、胎膜早破、羊水污染、脐带绕颈。根据临床信息分组进行组间比较发现,孕母血型、孕母BMI、孕母过敏史、妊娠期糖尿病、妊娠期高血压、分娩方式、产次、新生儿性别、新生儿体质量、胎盘质量、是否胎膜早破、是否羊水污染、是否脐带绕颈等因素与脐带血有核细胞总数和CD34^(+)造血干细胞数量无相关性(P>0.05),而孕母年龄和孕周均与CD34^(+)造血干细胞数量呈正相关(P<0.05)。结论子代脐带血中CD34^(+)造血干细胞数量与孕母年龄和孕周密切相关,孕母的年龄越大或孕周越大则CD34^(+)造血干细胞数量越多,这为脐血库筛选脐带血入库时提供了更多的理论依据。

纯化CD34^+造血干细胞治疗多发性骨髓瘤的进展

多发性骨髓瘤(MM)是一种克隆增殖性疾病,占血液系统肿瘤的10%,全身恶性肿瘤的1%.主要病理特征是异常浆细胞浸润骨骼和软组织,产生M蛋白,引起骨骼破坏,贫血,肾功能损坏和免疫功能异常.此病多发于中老年,男性多见.近年来随着人口的老龄化,MM的发病有逐年递增的趋势[1,2].

免疫磁珠法纯化自体外周血CD34^+造血干细胞移植治疗重症肌无力2例(附文献复习)

目的探讨免疫磁珠法纯化自体外周血CD34+造血干细胞移植治疗难治性重症肌无力的临床疗效。方法对难治性重症肌无力2例进行免疫磁珠法纯化的CD34+细胞移植,动员得CD34+细胞分别为1.7×106个/kg,2.4×106个/kg;纯化后CD34+细胞分别为1.02×106个/kg,1.68×106个/kg。纯度和回收率分别为:83.13%、60.04%:92.45%、70.15%。采用氟达拉滨、抗胸腺细胞球蛋白和环磷酰胺组成预处理方案。结果2例患者均造血重建,肌无力症状1例消失,1例明显改善。结论免疫磁珠法纯化的自体外周血CD34+造血干细胞移植可使患者造血功能得到较快重建,临床症状改善,效果显著。

应用单克隆抗体-免疫磁珠分离系统分离纯化再生障碍性贫血骨髓CD_(34)^+细胞

目的 分离、纯化再生障碍性贫血 (简称AA)患者骨髓CD3 4+ 细胞 ,探讨其发病机制。方法 对4 2例AA患者 ,以常规方法进行骨髓液采集和有核细胞分离 ,用单克隆抗体 免疫磁珠分离系统 (MACS)分离、纯化骨髓CD3 4+ 细胞 ,用碱性磷酸酶 抗碱性磷酸酶 (APAAP)法作CD3 4+ 细胞的纯度检测。结果 骨髓CD3 4+ 细胞纯度达 95 %～ 99% ,AA患者骨髓CD3 4+ 细胞多呈单个、散在分布 ,着色较淡 ;而对照组骨髓CD3 4+ 细胞多呈均匀或丛簇状分布 ,着色较深。结论 应用MACS分离AA骨髓CD3 4+ 细胞 ,特异性强、纯度高 ,是研究AA骨髓CD3 4+ 细胞功能、形态的最直接、客观。

监测外周血CD34^(+)细胞计数预测普乐沙福联合G-CSF自体干细胞动员的效果

目的探讨外周血CD34阳性(CD34^(+))细胞计数对普乐沙福自体干细胞动员效果的预测价值。方法回顾性分析2021年5月—2023年7月中山大学附属第七医院使用人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合普乐沙福进行自体干细胞动员的13例患者临床资料,分析普乐沙福动员前后外周血CD34^(+)细胞计数的变化及干细胞采集情况。结果共有13例患者纳入研究,包括淋巴瘤10例和多发性骨髓瘤3例。多发性骨髓瘤患者中1例为新诊断,另2例为复发患者;淋巴瘤患者中3例为套细胞淋巴瘤,6例为弥漫大B细胞淋巴瘤(包括1例复发),1例为B细胞淋巴瘤(不能明确类型)。本研究纳入的患者均使用G-CSF动员,在使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数均升高,使用普乐沙福前中位CD34^(+)细胞计数为13.3(2.5~76.1)/μL,使用普乐沙福后中位CD34^(+)细胞计数为73.6(10.4~208.70)/μL,升高4.18(1.99~13.60)倍。13例患者中有2例患者在使用普乐沙福前外周血CD34^(+)细胞计数<5/μL,均动员失败。Spearman相关分析结果显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数与使用普乐沙福前CD34^(+)细胞数呈正相关(rs=0.769,P=0.003)。多元线性回归分析显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数能较好地预测采集结果(P=0.004)。结论监测外周血CD34^(+)细胞计数可预测普乐沙福自体干细胞动员效果,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数越多,CD34^(+)细胞采集量越大。