原子力显微镜观测CD34阳性细胞的形貌结构

目的用原子力显微镜观测正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面的形貌结构,并比较两者的异同。方法从健康人和M2b型白血病患者各3例骨髓标本中分离出单个核细胞,利用免疫磁柱法纯化CD34+细胞,流式细胞仪检测其纯度。用光学显微镜和原子力显微镜进行观测。结果光学显微镜下两种来源的CD34+细胞形貌相似。原子力显微镜下可观测到细胞表面有许多微绒毛突起,表面粗糙度在不同来源细胞内部呈正态分布,正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面在平均粗糙度、均方根粗糙度方面有显著差别。结论M2b型CD34+白血病细胞较正常CD34+细胞表面皱折程度显著降低。

CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病的影响

背景:单倍体造血干细胞移植与较高的植入功能不良相关,因此经常要求更高的CD34^(+)细胞数量,但现有研究关于异基因造血干细胞移植CD34+细胞剂量和研究终点关系的结论是有争议的。目的:探究CD34^(+)细胞数对单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液疾病临床结果的影响。方法:纳入2019年1月至2021年12月期间于郑州大学第一附属医院造血干细胞移植中心行单倍体造血干细胞移植的恶性血液病患者,总计135例。结合既往研究结果及移植中心经验,以CD34+细胞数5.0×10^(6)/kg为截止点,将队列分为2组。评估两组的移植物植入情况、复发率及非复发死亡率、总生存期和无进展生存期等相关临床指标。结果与结论:①CD34+细胞剂量与血小板的植入相关,高剂量组血小板的植入时间早于低剂量组(14 d vs.16 d,P=0.013)。②两组患者3年总生存期无显著差异(67.5%vs.53.8%,P=0.257);两组间的无进展生存期也无显著性差异(65.6%vs.44.2%,P=0.106),但根据疾病风险指数(DRI)进行分层分析后发现低危患者高剂量组的3年无进展生存期较低剂量组升高(72.0%vs.49.3%,P=0.036)。③高剂量组3年累积复发率小于低剂量组(16.0%vs.33.5%,P=0.05)。④两组100 d内非复发死亡率高剂量组大于低剂量组,但无显著差异(17.3%vs.6.7%,P=0.070);进行分层分析发现,高危患者中高剂量组100 d内非复发死亡率明显高于低剂量组(20.0%vs.3.3%,P=0.046)。⑤综上所述,输注>5.0×10^(6)/kg的CD34^(+)细胞可促进血小板早期植入,可改善移植中低危风险患者的3年无进展生存期,并且降低移植后累积复发率;但在高危患者中,高剂量CD34+细胞导致移植后100 d内的非复发死亡率增高,考虑可能与移植后早期重度急性移植物抗宿主病的发生增多相关,因此考虑对回输高剂量CD34+细胞的患者应加强移植物抗宿主病的监测。

鹿茸对大鼠下肢缺血模型CD_(34)^+、FLK-1^+阳性细胞比例影响

目的:观察鹿茸对大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞比例的影响。方法:将54只SD大鼠随机分为3组:鹿茸组18只、模型组18只、假手术组18只。鹿茸组和模型组均采用左下肢股动脉结扎及分支剔除术,造成大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支。鹿茸组术后按0.571 g·kg-1·d-1剂量灌服,连续14 d。检测各组术前1d、术后第1、3、7、14天5个时间点大鼠外周血酶肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平变化及双荧光阳性细胞(CD34+、FLK-1+)比例。结果:术后模型组外周血酶学指标CK、AST、LDH水平较假手术组均显著上升,术后第7、14天鹿茸组各项酶学指标水平较模型组及术后第1、3天均显著下降(P<0.05)。术后鹿茸组和模型组CD34+、FLK-1+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且鹿茸组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸可增加大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞的比例,改善下肢缺血状态,促进血管新生,其作用可能与其能增加外周血血管内皮祖细胞(EPCs)数量有关。

动员外周血CD34阳性细胞流式细胞术测定中的策略探讨

探索用流式细胞术测定动员外周血中CD34^+细胞的简便有效的方法,以便在干细胞动员中进行有效的动态监测,及时收取干细胞,把握最佳移植效果。将经药物动员的移植供者的外周血用CD34和CD45荧光抗体标记,用红细胞裂解液将红细胞裂解后经流式细胞仪检测。运用恰当的分析窗口、有效的设门分析结合干细胞的生物学特性,确定CD34^+细胞在窗口中的确切位置,统计CD34^+细胞在有核细胞中的比例。结果表明,通过本方法可有效地测定0.05 ％-0.1％的CD34^+细胞的相对含量,在药物动员的第5或6天,多数患者外周血中CD34^+细胞达到峰值,某些患者外周血中CD34^+细胞可超过1％。结论:通过标记中的有效阻断和多参数分析,本方法可对动员外周血中微量的CD34^+细胞进行有效的动态监测,对适时采集干细胞进行移植提供了重要的参考。

CD20阳性细胞和HLA-DR表达对移植肾急性排斥反应预后判断的价值

目的:探讨CD20阳性细胞在移植肾细胞性排斥反应中浸润程度与预后的关系及其在移植物中的作用。方法:2001年至2002年共29例经移植肾活检诊断为细胞性和混合性移植肾急性排斥患者,肾活检组织标本行CD20、人白细胞DR抗原(HLA-DR)免疫组化染色,C4d免疫荧光染色。并对病理结果行半定量分析,根据CD20细胞在肾组织内浸润程度,分为重度浸润组(H组,>50%小管间质面积),中度浸润组(M组,10%～50%),阴性组(N组,<10%),C4d染色按照Banff标准分为阳性组和阴性组,HLA-DR染色分为阳性(>50%)和阴性(<50%)组。分别分析CD20和排斥反应分型、HLA-DR、C4d之间的相关性。所有病例均随访42月,随访内容包括患者急性排斥反应临床资料和治疗反应情况,随访期间肌酐变化和移植肾的预后。结果:29例患者中H组有6例,M组7例,N组16例。H组耐激素发生率高于另外两组(4/6vs2/7vs2/16,P=0.05)。42月时H组移植肾生存率明显低于另外两组(4/6vs1/7vs1/16,P<0.05),M组平均血肌酐高于N组(208.6μmol/Lvs112.3μmol/L,P<0.01)。CD20阳性(H+M组)和C4d染色阳性之间没有一致性(P>0.05)。而H+M组HLA-DR表达明显高于N组(59.5%vs16.3%,P<0.01);HLA-DR阳性与CD20阳性具有很好的一致性(P<0.01)。结论:CD20阳性细胞在肾移植急性排斥反应内浸润的程度与移植肾短期和长期预后有明显相关性。CD20细胞的浸润与体液性排斥反应无明显相关性,但是和肾组织中HLA-DR有一定的相关性,提示CD20细胞在移植物内不产生抗体,推测可能与抗原呈递有关,有待进一步研究。

CD34阳性细胞内部结构观察

目的利用电子显微镜以及原子力显微镜观察比较健康人和初发急性髓细胞白血病患者来源的CD34阳性细胞内部结构。方法将健康人和初发急性髓细胞白血病(M2b)患者各1例骨髓中提纯出来的CD34阳性细胞制成树脂包埋块,利用超薄切片机切成厚度为60nm的薄片,分别进行透射电子显微镜和原子力显微镜观察。结果研究对象纯化前CD34阳性细胞平均比例为(1．63±0．25)％,纯化后的平均比例为(95±2．4)％。电子显微镜和原子力显微镜均可观察健康人和初发急性髓细胞白血病患者的CD34阳性细胞内部结构,不能发现两种来源细胞有特异性差别。当原子力显微镜成像范围在10μm×10μm时,可分辨出核仁和部分细胞质内线粒体等细胞器;当原子力显微镜成像范围在2μm×2μm时,细胞内部结构变模糊,被细小的树脂颗粒所掩盖,不能分辨细胞结构。结论电子显微镜和原子力显微镜均可观察细胞的内部结构,不能发现健康人和初发急性髓细胞白血病患者两组来源的CD34阳性细胞内部有特异性差别,原子力显微镜观测细胞内部结构效果并不优于电子显微镜。

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在MDS患者骨髓CD34阳性细胞中的表达

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34^+细胞表面胰岛素样生长因子I型受体(IGF-IR)的表达状况。方法:采用流式细胞术检测18例正常对照及100例MDS患者CD34^+细胞表面IGF-IR的表达。结果:100例MDS患者骨髓CD34^+细胞IGF-IR的平均表达率为(41.0±28.1)%,明显高于正常对照中的IGF-IR表达率(4.3±1.8)%(P<0.0001),其中22例高危组患者CD34^+细胞IGF-IR表达率较低危组(78例)明显增高[(66.5±27.8)%vs(34.5±24.9)%](P<0.0001);23例有染色体异常患者的CD34^+细胞的IGF-IR表达率较染色体正常组患者(77例)明显增高[(56.0±30.9)%vs(36.9±26.2)%](P<0.01)。结论:IGF-IR在MDS患者CD34^+细胞中过度表达,提示IGF-IR可能参与MDS的起源、发生及发展。IGF-IR在高危组及染色体异常组增高更明显,提示IGF-IR可能与细胞的恶性克隆增殖有关,有望为MDS患者的预后与转归的评估提供依据。

CD34阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用

ＣＤ３４阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用尉达民，赵昕，祝阳北京医科人学第三医院血液科安秀云，王良绪自体外周血干细胞移植（Ａｕｔｏ－ＰＢＳＣＴ）需要多次分离外周血干细胞。达到足够重建造血功能的干细胞量。ＣＦＵ－ＧＭ集落培养是测定造血干细胞数的常规方...

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。

人脐血CD34＋细胞移植对局灶性脑缺血大鼠神经功能恢复的影响

目的:CD34+造血干细胞具有自我更新、多向分化及重建长期造血和免疫的生物学功能,针对心肌缺血性损伤、肢体血管闭塞引起的组织缺血等治疗有显著的疗效。由于中枢神经系统缺血性损伤临床治疗康复效果不佳,观察人脐带血CD34+细胞移植对大鼠大脑中动脉栓塞后神经功能恢复的影响及CD34+细胞的存活、迁移以及向神经细胞分化的情况。方法:实验于2002-05起在天津市中国医学科学院中国协和医科大学血液学研究所进行。①实验材料:雄性SD大鼠由解放军军事医学科学院第四研究所提供,体质量250～350g,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。人脐带血由天津脐血干细胞库提供,产妇及家属对实验知情同意,并符合医学伦理学标准。②实验方法:将大鼠随机分为3组:CD34+细胞移植组:用线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉栓塞模型后24h移植CD34+细胞;生理盐水组:左侧大脑中动脉栓塞后24h后注射等量的生理盐水;假手术组:仅行左侧大脑中动脉栓塞。③实验评估:采用改良神经功能损害评分观察大鼠神经功能恢复情况,应用免疫组织化学和免疫荧光双标记技术检测BrdU标记的CD34+细胞存活、迁移及其GFAP蛋白和NeuN蛋白的表达。结果:①CD34+细胞移植组与其它各组在移植完成24h改良神经功能损害评分差异无显著性(P>0.05);移植后1周到第4周,各组动物均有神经功能不同程度的恢复,CD34+细胞移植组神经功能恢复明显优于另两组(P<0.05)。②CD34+细胞移植组与另两组比较,大鼠脑梗死体积无明显变化。③移植的CD34+细胞可在大鼠脑组织中存活,部分CD34+细胞同时表达GFAP蛋白或NeuN蛋白,并向缺血区域迁移。结论:CD34+细胞可在大鼠脑缺血区域中存活、迁移并向星形胶质细胞或神经元分化,同时促进神经功能恢复。

人CD34^+脐血干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤

目的探讨人脐血来源的CD34+干细胞治疗脊髓损伤的可行性,为脊髓功能障碍性疾病的临床治疗打下基础。方法用密度梯度离心及免疫磁珠法分离出人CD34+脐血干细胞,在含有B27、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、人重组干细胞因子(rhSCF)的营养液中培养,用核荧光染色剂Hoechst33258标记细胞;制作大鼠脊髓横断模型,造成大鼠下肢瘫痪,在脊髓损伤3d移植荧光标记的CD34+脐血干细胞,观察移植后的动物行为变化、脊髓组织形态学变化等。结果脊髓损伤大鼠移植CD34+脐血干细胞5~6d可见瘫痪大鼠的后肢肌力开始恢复,10~15d后可出现爬行,3~4周后后肢活动活跃;对照组瘫痪的肢体未见恢复。脊髓移植区肉眼可见有增生的组织充填,镜下有大量神经胶质原纤维酸性蛋白、神经元特异性烯醇化酶阳性的细胞,移植区Hoechst33258荧光标记阳性细胞增生。结论移植的CD34+脐血干细胞可在移植部位增殖,并使脊髓横断大鼠运动功能恢复,有望成为治疗脊髓损伤的有效手段。

不同时相移植人骨髓间充质干细胞对人脐血CD34^+细胞植入NOD/SCID小鼠的影响

为了观察不同时相移植人骨髓间充质干细胞(MSC)对脐血(UCB)CD34+细胞移植的NOD/SCID小鼠造血重建的影响,明确最佳的移植时机,将体外培养扩增的人骨髓MSC分别于c细胞移植同时、移植前48小时及移植后48小时输入经60Coγ射线照射的NOD/SCID小鼠,观察共移植后42天内小鼠外周血白细胞和血小板变化,并于移植后42天处死小鼠,用FACS检测外周血、骨髓和脾脏人源细胞含量。结果表明:(1)MSC和UCB CD34+细胞同时输注可明显降低外周血白细胞和血小板下降幅度,缩短白细胞和血小板恢复时间;二者不同时输注均不降低白细胞和血小板下降幅度,且输注UCB CD34+细胞后48小时输注MSC时外周血血小板恢复时间明显晚于同时输注者。(2)与单纯UCB CD34+细胞移植相比较,不同时相输注MSC均可促进UCB CD34+细胞的植入,三个共输注组间促进骨髓各系造血植入效应无明显差异。结论:人骨髓MSC与UCB CD34+细胞共移植时,以同时移植效果最佳,此结果为MSC的临床应用提供了实验依据。

CD34^+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响

目的研究分离骨髓干细胞后CD34+细胞含量对自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化疗效的影响。方法回顾性分析自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化病例41例,其中CD34+细胞含量不足5%的27例,CD34+细胞含量超过5%(含5%)的14例。分析上述病例术后2～4周的实验室检测指标。结果在CD34+细胞含量不足5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、白蛋白(Alb)、碱性磷酸酶(ALP)和血小板(PLT)均较术前明显增高(P<0.05)。在CD34+细胞含量超过5%的病例中,患者术后的血清总蛋白、Alb较术前明显增高(P<0.05)。术前CD34+细胞含量超过5%病例组的PLT平均值[(88.357±38.454)×109/L]明显低于CD34+细胞含量不足5%的病例组[(132.590±127.260)×109/L]。结论自体骨髓干细胞移植可以有效的提升肝硬化患者血清总蛋白和Alb水平,本组病例中CD34+细胞含量的不同并未明显影响术后患者血清总蛋白、Alb的恢复水平。自体骨髓干细胞移植可能影响胆汁的排泌。两组病例脾功能亢进程度不同可能是导致患者CD34+细胞含量差异的原因。

rhG-CSF动员的骨髓和外周血干细胞混合移植物首次采集时供者外周血单核细胞计数反映混合采集物中CD34^＋细胞含量

本研究探讨人重组粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员的骨髓和外周血干细胞混合移植健康供者首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量与骨髓/外周血混合采集物中CD34+细胞数量的关系。对70名亲缘健康供者均皮下注射rhG-CSF 5μg/(kg.d),连续5天。第4天和第5天分别采集骨髓和外周血干细胞。首次干细胞采集时用EX2100血细胞分析仪检测供者外周血细胞计数,同时应用流式细胞仪测定骨髓和外周血混合采集物中的CD34+细胞数量。结果表明:rhG-CSF动员的70例供者首次干细胞采集时外周血单核细胞的数量为(1.15±0.60)×109/L;骨髓和外周血采集物中的CD34+细胞总量分别是(5.85±2.93)×107和(1.33±0.77)×108;骨髓和外周血混合采集物的CD34+细胞总量是(1.92±0.86)×108。Pearson和Spearman分析显示首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数(×109/L)与骨髓采集物中CD34+细胞的总量(相关系数:r=0.265,p=0.027)、外周血采集物中CD34+细胞总量(r=0.340,p=0.004)以及混合移植物中CD34+细胞的总量(r=0.398,p=0.001)均存在显著的相关性;多因素分析表明,首次干细胞采集时供者外周血单核细胞计数与骨髓采集物、外周血采集物以及混合移植物中CD34+细胞的总量均呈正相关关系(p值分别为0.027、0.004和0.001)。首次干细胞采集时供者外周血单核细胞数量对混合移植物中CD34+细胞总量预测的敏感性是71%,特异性是70%(p=0.007)。结论:rhG-CSF动员的骨髓和外周血混合移植健康供者首次干细胞采集时外周血单核细胞计数可有效预测输注给受者的CD34+细胞总量即采集效果。

用^(18)F-FDG和^(99)Tc^m-MIBI显像评估冷冻心肌骨髓CD34^+细胞移植后代谢和灌注的变化

目的 用1 8F 脱氧葡萄糖 (FDG)、99Tcm 甲氧基异丁基异腈 (MIBI)评价犬冷冻心肌骨髓CD34+ 细胞移植后心肌代谢和灌注的变化。方法 1 2只杂种犬分为细胞移植组和对照组。用免疫磁珠法从犬肋骨骨髓分离CD34+ 细胞并注射到用CO2 冷冻建立的慢性心肌梗死模型区 ,对照组注射伊思考夫改良杜尔贝可培养基 (IMDM)培养液。分别于建立模型前、后 4周和干细胞移植后 8周行1 8F FDG和99Tcm MIBI心肌显像 ,评价细胞移植结果 ,计算冷冻心肌代谢与灌注显像的F值。干细胞移植后 8周取心肌做第 8因子免疫组织化学和病理检查。结果 正常心肌代谢与灌注显像清晰 ,F值接近 0 ,干细胞移植前、后 8周冷冻心肌1 8F FDG与99Tcm MIBI显像的F值分别为 5 . 5 0± 1 . 31 ,5 4 4± 0 . 70与 1 1 7±0. 4 1 ,1 . 5 0± 0 . 5 5 (P <0 . 0 1 ) ;对照组为 5 . 5 3± 0. 80 ,5. 5 4± 1 . 2 9与 5. 0 0± 1 . 5 5 ,5 . 0 8± 1. 4 6 (P >0 . 0 5 ) ,骨髓CD34+ 细胞移植使冷冻心肌的代谢与灌注明显得到恢复。干细胞移植后 8周冷冻区血管密度高于对照组 (P <0 . 0 1 )。结论 骨髓CD34+ 细胞移植后冷冻区存在大量活的心肌细胞。

外周血CD34^+造血干细胞加适量T细胞输注进行HLA半相合的异体移植

对1例Ph+染色体的急淋患儿进行母子间HLA半相合的异体外周血造血干细胞移植 ,为避免由于HLA不相合所产生的由T细胞介导的严重移植物抗宿主病(GVHD) ,采用了CD34+细胞正性分离去除淋巴细胞 ;同时为避免由于T细胞过度去除而引起宿主抗移植物反应(HVG)导致植入失败 ,在移植次日又加入部分T细胞 ,使病儿接受CD34 +细胞6×106/kg 和CD3 +细胞1.05×107/kg。结果 :随访1年来 ,红系、粒系和巨核系均恢复正常 ,临床上仅出现一过性的IIOaGVHD以及轻微的局限于口唇粘膜的cGVHD。STR位点DNA检验以及染色体检查 :移植后 +180天受体已从供体型嵌合体转为完全供体型 ,病儿获得植入成功。结果表明 ,常规剂量的CD34 +细胞移植加以适量CD3 +T细胞 ,可克服HLA部分不相配的难点 ,减轻GVHD ,同时也可避免由于过度的T细胞去除而出现的HVG。