多发性骨髓瘤患者外周血CD34阳性细胞计数对普乐沙福干细胞动员效果的预测价值

目的探讨多发性骨髓瘤(MM)患者外周血CD34阳性细胞计数对普乐沙福干细胞动员效果的预测价值。方法回顾性分析2019年12月至2021年2月广西医科大学第一附属医院使用普乐沙福进行干细胞动员的12例MM患者临床资料。分析普乐沙福动员前后外周血CD34阳性细胞计数的变化及干细胞采集情况。结果共有12例患者纳入研究,国际分期系统(ISS)分期Ⅱ~Ⅲ期,诱导方案以VRD为主。不论在普乐沙福前用何种方案进行干细胞动员,患者在使用普乐沙福后CD34阳性细胞计数均升高,使用普乐沙福前后中位CD34阳性细胞计数分别为3.63/μl(0.72~13.53/μl)和32.11/μl(8.52~53.68/μl),差异有统计学意义(Z=-0.40,P<0.001),中位升高倍数为11.50倍(1.61~23.71倍)。12例患者中有1例动员失败,该患者在使用普乐沙福前外周血CD34阳性细胞计数<1/μl,使用普乐沙福后CD34阳性细胞计数虽然提高了11.83倍,但仍<10/μl。Pearson相关分析结果显示,在使用普乐沙福前CD34阳性细胞计数<4/μl的患者中,使用普乐沙福前后CD34阳性细胞计数呈正相关(r=0.80,P=0.032)。结论MM患者外周血CD34阳性细胞计数对普乐沙福干细胞动员效果有一定的预测价值。

原子力显微镜观测CD34阳性细胞的形貌结构

目的用原子力显微镜观测正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面的形貌结构,并比较两者的异同。方法从健康人和M2b型白血病患者各3例骨髓标本中分离出单个核细胞,利用免疫磁柱法纯化CD34+细胞,流式细胞仪检测其纯度。用光学显微镜和原子力显微镜进行观测。结果光学显微镜下两种来源的CD34+细胞形貌相似。原子力显微镜下可观测到细胞表面有许多微绒毛突起,表面粗糙度在不同来源细胞内部呈正态分布,正常人及表达CD34抗原的白血病细胞表面在平均粗糙度、均方根粗糙度方面有显著差别。结论M2b型CD34+白血病细胞较正常CD34+细胞表面皱折程度显著降低。

鹿茸对大鼠下肢缺血模型CD_(34)^+、FLK-1^+阳性细胞比例影响

目的:观察鹿茸对大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞比例的影响。方法:将54只SD大鼠随机分为3组:鹿茸组18只、模型组18只、假手术组18只。鹿茸组和模型组均采用左下肢股动脉结扎及分支剔除术,造成大鼠下肢缺血模型,假手术组仅暴露股动脉但不结扎股动脉及其分支。鹿茸组术后按0.571 g·kg-1·d-1剂量灌服,连续14 d。检测各组术前1d、术后第1、3、7、14天5个时间点大鼠外周血酶肌酸激酶(CK)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)水平变化及双荧光阳性细胞(CD34+、FLK-1+)比例。结果:术后模型组外周血酶学指标CK、AST、LDH水平较假手术组均显著上升,术后第7、14天鹿茸组各项酶学指标水平较模型组及术后第1、3天均显著下降(P<0.05)。术后鹿茸组和模型组CD34+、FLK-1+双荧光阳性细胞比例较假手术组均显著升高(P<0.05),且鹿茸组升高较模型组更为显著(P<0.05或P<0.01)。结论:鹿茸可增加大鼠缺血下肢CD34+、FLK-1+阳性细胞的比例,改善下肢缺血状态,促进血管新生,其作用可能与其能增加外周血血管内皮祖细胞(EPCs)数量有关。

CD34阳性细胞内部结构观察

目的利用电子显微镜以及原子力显微镜观察比较健康人和初发急性髓细胞白血病患者来源的CD34阳性细胞内部结构。方法将健康人和初发急性髓细胞白血病(M2b)患者各1例骨髓中提纯出来的CD34阳性细胞制成树脂包埋块,利用超薄切片机切成厚度为60nm的薄片,分别进行透射电子显微镜和原子力显微镜观察。结果研究对象纯化前CD34阳性细胞平均比例为(1．63±0．25)％,纯化后的平均比例为(95±2．4)％。电子显微镜和原子力显微镜均可观察健康人和初发急性髓细胞白血病患者的CD34阳性细胞内部结构,不能发现两种来源细胞有特异性差别。当原子力显微镜成像范围在10μm×10μm时,可分辨出核仁和部分细胞质内线粒体等细胞器;当原子力显微镜成像范围在2μm×2μm时,细胞内部结构变模糊,被细小的树脂颗粒所掩盖,不能分辨细胞结构。结论电子显微镜和原子力显微镜均可观察细胞的内部结构,不能发现健康人和初发急性髓细胞白血病患者两组来源的CD34阳性细胞内部有特异性差别,原子力显微镜观测细胞内部结构效果并不优于电子显微镜。

胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(IGF-IR)在MDS患者骨髓CD34阳性细胞中的表达

目的:探讨骨髓增生异常综合征(MDS)患者CD34^+细胞表面胰岛素样生长因子I型受体(IGF-IR)的表达状况。方法:采用流式细胞术检测18例正常对照及100例MDS患者CD34^+细胞表面IGF-IR的表达。结果:100例MDS患者骨髓CD34^+细胞IGF-IR的平均表达率为(41.0±28.1)%,明显高于正常对照中的IGF-IR表达率(4.3±1.8)%(P<0.0001),其中22例高危组患者CD34^+细胞IGF-IR表达率较低危组(78例)明显增高[(66.5±27.8)%vs(34.5±24.9)%](P<0.0001);23例有染色体异常患者的CD34^+细胞的IGF-IR表达率较染色体正常组患者(77例)明显增高[(56.0±30.9)%vs(36.9±26.2)%](P<0.01)。结论:IGF-IR在MDS患者CD34^+细胞中过度表达,提示IGF-IR可能参与MDS的起源、发生及发展。IGF-IR在高危组及染色体异常组增高更明显,提示IGF-IR可能与细胞的恶性克隆增殖有关,有望为MDS患者的预后与转归的评估提供依据。

CD34阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用

ＣＤ３４阳性细胞测定在造血干细胞测定中的应用尉达民，赵昕，祝阳北京医科人学第三医院血液科安秀云，王良绪自体外周血干细胞移植（Ａｕｔｏ－ＰＢＳＣＴ）需要多次分离外周血干细胞。达到足够重建造血功能的干细胞量。ＣＦＵ－ＧＭ集落培养是测定造血干细胞数的常规方...

免疫磁性分离法纯化外周血CD34阳性细胞

有关造血干细胞的研究是目前实验血液学和临床血液学的核心内容。随着分子生物学、细胞生物学、免疫学、生物化学及实验动物学的不断更新发展，人们对造血干细胞也就有了更深刻的理解。造血干细胞目前在形态还不能与淋巴细胞分开，故早期对造血干细胞的性能研究是在分离单个核细胞的基础上进行的。随着各种技术的迅猛发展，近几年对造血干细胞的研究多是在对其分离纯化的基础上进行的。细胞表面CD34抗原是分子量为110～120KD的高度糖基化Ⅰ型膜蛋白，是目前公认的一个造血干祖细胞标志，利用免疫磁珠(MACS)或流式细胞仪分离出CD34阳性细胞及其亚群可得到较纯的造血干祖细胞。

流式细胞术CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征分型诊断中的作用

为探讨流式细胞术(FCM)CD34+细胞计数在骨髓增生异常综合征(MDS)分型诊断中的应用价值。采用多参数FCM设门技术检测MDS患者骨髓CD34+细胞计数,与形态学分型诊断比较。结果显示:对照组和MDS组形态学原始细胞计数分别为0.43±0.64%和2.50±3.68%,FCM CD34+细胞计数分别为0.45±0.24%和1.85±2.60%,MDS组原始细胞计数和CD34+细胞计数均显著高于对照组(P<0.01)。对照组原始细胞计数和CD34+细胞计数无明显差异(P>0.05),MDS组的形态学原始细胞计数明显高于FCM CD34+细胞计数(P<0.05)。88例MDS患者中,71例FCM分型诊断结果与形态学分型诊断结果一致,符合率为80.7%。除13例有粒细胞分化异常或骨髓明显稀释标本外,其细胞形态学和FCM分型的符合率达94.7%。FCM CD34+细胞计数可用于无明显粒系分化异常的MDS分型诊断。

3种流式细胞术计数脐血CD34^+细胞方法的比较

目的 比较 3种流式细胞术 (FCM )计数CD34 + 细胞的方法。方法 对CD34 + cellquantitation (CCQ)和ISHAGE两种方法进行了改良 ,并与ProCOUNT方法比较。结果 改良CCQ(iCCQ)和改良ISHAGE(iISHAGE)避免了CD45 dim/SSClow细胞的损失 (11.0± 9.6 %) ;iCCQ计数值高于iISHAGE和ProCOUNT(均 0 .0 0 1<P <0 .0 0 2 ) ,iISHAGE和ProCOUNT的间接计数结果未见显著性差异。ProCOUNT的间接计数结果显著高于直接计数结果 (P <0 .0 0 1)。结论 (1)流式细胞计数法应设立同型对照以减少非特异性染色的干扰 ;(2 )用已知数量荧光微粒作为内参照可避免血球计数仪带来的误差。

流式细胞仪ProCOUNT方法计数CD34^+细胞

目的 评价流式细胞仪ProCOUNT法计数CD34+ 细胞的方法及其临床应用。方法 用核酸染料设阈值。根据已知的干 /祖细胞特点 :表达CD34抗原、CD4 5弱阳性或阴性、核酸染料着色强及侧向散射光低表达 ,用多参数设门策略精确识别干 /祖细胞。结果 ProCOUNT方法批内精密度为 15 .8% (CD34+ /有核细胞 =0 .0 35 % )和 9.3% (CD34+ /有核细胞 =2 .785 ) ,平均回收率 91.8%。 12例标本中CD34+ 细胞平均为 1.99% ,结果为 75 11/μl。 结论 ProCOUNT法操作简便 ,精密度高 ,能准确计数CD34+ 细胞 ,适合临床常规应用。

E6流式细胞仪检测CD34^+细胞百分比和绝对计数方法的建立

目的应用E6流式细胞仪建立检测CD34^+细胞百分比和绝对计数的方法并进行验证。方法收集2019年1月至2019年12月在深圳市儿童医院血液肿瘤科因重型β-地中海贫血行异基因造血干细胞移植的患儿89例,以移植患儿供的骨髓或外周血为研究对象,应用E6流式细胞仪建立ISHAGE法检测CD34^+细胞百分比,应用"流式直接体积法"计算CD34^+细胞的绝对计数,并结合白细胞手工计数对CD34^+细胞绝对计数的结果进行验证。结果结合白细胞手工计数对CD34^+细胞的绝对计数结果的正确性进行验证,Pearson相关分析结果显示:供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞绝对计数流式结果与CD34^+细胞绝对计数计算结果高度相关(r=0.93,R2=0.87,P<0.0001);两次供者外周血干细胞或骨髓干细胞白细胞计数和单个核百分比结果高度一致;同样,两次供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞流式计数百分比和绝对计数结果亦高度一致。结论应用E6流式细胞仪的"流式直接体积法"计算CD34^+细胞绝对计数结果准确,可以作为造血干细胞移植术前计算供者外周血干细胞或骨髓干细胞CD34^+细胞数目的可靠依据。

应用流式细胞仪检测脐血CD34^+细胞的绝对值计数

【目的】应用流式细胞仪技术(FCM)精确测定 CD34^+细胞的绝对值计数,以指导脐血输注标本的选择,评价脐血的造血潜能。【方法】收集脐血100份,应用 FCM 测定 CD34^+细胞的绝对值计数,统计分析其与脐血常规、分娩方式及新生儿体重的关系。【结果】脐血 CD34^+细胞的绝对值均数为(48.5±27.9)/μL,与脐血白细胞有显著相关性,与红细胞、血小板无相关性。与新生儿体重有显著相关性。各分娩方式之间 CD34^+细胞的绝对值均散无差异。【结论】选择脐血白细胞计数较高、高出生体重儿及 CD34^+细胞绝对值计数高(>100/μL)的脐血进行输注或移植将更有效。

CyFlow Space流式细胞仪CD34^+细胞绝对计数分析

目的比较在Partec CyFlow Space流式细胞仪上采用不同设门方法计数CD34+造血干细胞结果的差异。方法采集经骨髓动员的患者外周静脉血标本30例,在分别采用同型对照设门法和国际血液治疗与移植工程协会(ISHAGE)推荐设门法设置流式细胞仪后进行标本测定。结果两种设门法标本计数结果具有相关性(r=0.990),但ISHAGE设门法的计数结果低于同型对照设门法(P<0.05)。回收试验显示,ISHAGE设门法计数不同细胞浓度标本的预期值与回收值的相关系数为0.9989;对3种细胞浓度重复检测的变异系数为2.2%～3.8%。结论两种设门法计数CD34+细胞的相关性较好,但ISHAGE设门法更能反映造血干细胞的特点,具有良好的准确度和精密度,且无需同型对照抗体,节约试剂,更适合临床常规使用。

双平台ISHAGE法与单平台绝对计数法在脐带血CD34+细胞检测的比较分析

目的评估双平台血液治疗和移植工程国际联合会(ISHAGE)法与单平台绝对计数法在脐带血CD34+细胞检测的优缺点。方法选择30份健康新生儿的脐带血标本。采用流式细胞术双平台ISHAGE法与单平台绝对计数法,对其分别进行深低温冷冻前后CD34+细胞检测,并采用Spearman相关性和配对t检验对CD34+细胞百分率、细胞活率和CD34+细胞回收率进行分析。结果 Spearman相关性分析结果:双平台ISHAGE法与单平台绝对计数法所得的CD34+细胞百分率和细胞活率高度相关性(R2=0.949 1、0.796 2),而冷冻前后CD34+细胞回收率无相关性(R2=-1.833)。配对t检验分析结果:双平台ISHAGE法与单平台绝对计数法检测冷冻前脐带血CD34+细胞百分率分别为(0.27±0.14)%、(0.28±0.16)%(t=1.01,P> 0.05),CD34+细胞回收率分别为(102.83±23.11)%、(80.50±23.08)%(t=10.62,P <0.05),细胞活率分别为(96.80±1.85)%、(96.95±1.94)%(t=1.13,P> 0.05)。结论双平台ISHAGE法与单平台绝对计数法检测深低温冷冻前脐带血CD34+细胞百分率和细胞活率具有高度相关性,但在冷冻后CD34+细胞回收率方面单平台绝对计数法要优于双平台ISHAGE法。

监测外周血CD34^(+)细胞计数预测普乐沙福联合G-CSF自体干细胞动员的效果

目的探讨外周血CD34阳性(CD34^(+))细胞计数对普乐沙福自体干细胞动员效果的预测价值。方法回顾性分析2021年5月—2023年7月中山大学附属第七医院使用人粒细胞集落刺激因子(G-CSF)联合普乐沙福进行自体干细胞动员的13例患者临床资料,分析普乐沙福动员前后外周血CD34^(+)细胞计数的变化及干细胞采集情况。结果共有13例患者纳入研究,包括淋巴瘤10例和多发性骨髓瘤3例。多发性骨髓瘤患者中1例为新诊断,另2例为复发患者;淋巴瘤患者中3例为套细胞淋巴瘤,6例为弥漫大B细胞淋巴瘤(包括1例复发),1例为B细胞淋巴瘤(不能明确类型)。本研究纳入的患者均使用G-CSF动员,在使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数均升高,使用普乐沙福前中位CD34^(+)细胞计数为13.3(2.5~76.1)/μL,使用普乐沙福后中位CD34^(+)细胞计数为73.6(10.4~208.70)/μL,升高4.18(1.99~13.60)倍。13例患者中有2例患者在使用普乐沙福前外周血CD34^(+)细胞计数<5/μL,均动员失败。Spearman相关分析结果显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数与使用普乐沙福前CD34^(+)细胞数呈正相关(rs=0.769,P=0.003)。多元线性回归分析显示,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数能较好地预测采集结果(P=0.004)。结论监测外周血CD34^(+)细胞计数可预测普乐沙福自体干细胞动员效果,使用普乐沙福后CD34^(+)细胞计数越多,CD34^(+)细胞采集量越大。