慢性B淋巴细胞白血病病人骨髓及外周血ZAP-70与CD38表达及意义

目的探讨ZETA相关蛋白(ZAP-70)、CD38在慢性B淋巴细胞白血病(B-CLL)病人骨髓及外周血中的表达及两者相关性,并分析其临床意义。方法采用半定量RT-PCR的方法对19例B-CLL病人及12例正常人骨髓或外周血ZAP-70 mRNA的表达水平进行测定,采用流式细胞术检测CD38的表达水平。结果在19例B-CLL病人中,7例ZAP-70阳性表达,8例CD38阳性表达;对照组ZAP-70、CD38均为阴性表达。结论ZAP-70 mRNA、CD38在B-CLL中表达阳性提示预后不良。ZAP-70可以取代IgVH基因突变状态作为B-CLL有效的预后指标。

CD38基因多态性与慢性髓系白血病发病的相关性

本研究分析CD38基因184位点等位基因在慢性髓系白血病(chronic myeloid leukemia,CML)中的频率分布以及与CML遗传易感性的关系,为CML遗传因素的研究奠定基础。以100例CML患者为病例组,200例非血液系统性疾病、非肿瘤疾病为对照组,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性技术(PCR-RFLP)检测CD38基因184位点的多态性,应用χ2检验和精确概率法比较各基因型频率在病例组与对照组之间的差异,用比值比(oddsratio,OR)及其95%的可信区间(confidence interval,CI)表示各基因型发生白血病的风险度。结果表明,CML组CD38基因位点G/G、G/C、C/C基因型频率与对照组比较差异无统计学意义(p=0.072),而以野生型C/C为参考,CML组变异型G/C基因型频率与对照组比较差异有统计学意义(p=0.032,其OR值为0.517,95%CI为0.283-0.9471);CML组G、C等位基因频率,以C等位基因频率为参考,CML组G等位基因频率高于对照组(p=0.028,OR值为0.597,95%CI为0.377-0.947)。结论:CD38基因184位点G等位基因可能是CML的保护性基因,有可能降低CML的发病风险。

人CD38分子基因的克隆及其在真核细胞中的表达

目的 :克隆并表达人 CD38抗原分子的全长 c DNA。方法 :采用 RT- PCR法 ,从高表达 CD38抗原的 Daudi细胞系中克隆出 CD38全长 c DNA并将其插入 p GEM- T载体中 ,重新设计引物 ,引入酶切位点 ,二次 PCR;从重组 p GEMT载体上扩增CD38抗原分子的 c DNA编码序列 ,再亚克隆到真核表达载体 pc DNA3.1(+) ,用脂质体法转染 COS7细胞。用免疫荧光及 A-PAAP方法检测 CD38抗原的表达。 结果 :克隆的 CD38抗原的全长 c DNA,经酶切鉴定及序列分析表明 ,其序列与文献报道完全一致。免疫荧光及 APAAP方法检测表明 ,CD38抗原分子在 COS7细胞中获得表达。 结论 :成功构建了 CD38真核表达载体 ,并在 COS7细胞中获得表达 ,对研究 CD38分子的功能具有重要的意义。

CD38基因敲除对小鼠脾脏B细胞炎性因子产生的影响

目的分析CD38基因敲除小鼠脾脏中B细胞的数量及B细胞中炎性因子和去乙酰化酶1(SIRT1)的表达水平,探讨CD38基因敲除对B细胞中炎性因子的影响及其潜在机制。方法采用聚合酶链反应(PCR)检测小鼠尾巴CD38和新霉素(Neo)基因的DNA表达水平;磁珠阴选法分选出野生型(WT)C57BL/6和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞,经流式细胞仪鉴定B细胞分选纯度;实时定量PCR检测CD38和炎性因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)基因的mRNA表达水平;蛋白质印迹法检测CD38及SIRT1的蛋白表达水平。结果鉴定CD38-/-小鼠,并成功分选出WT和CD38-/-小鼠脾脏中的B细胞(纯度>95%)。与WT小鼠相比,CD38-/-小鼠脾脏发育障碍,脾细胞总数及其中的B细胞数量均减少(P<0.01),伴炎性因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平下降(P<0.01),SIRT1蛋白表达水平上升(P<0.05)。结论 CD38基因敲除可引起脾脏B细胞数量减少;并可能通过激活SIRT1通路,抑制脾脏B细胞中炎性因子TNF-α和IL-1β的表达。

成都地区自身免疫型糖尿病患者临床特征及CD38基因多态性研究

目的了解成都地区成人迟发自身免疫型糖尿病（LADA）患者的临床特征，CD38基因在内切酶PvU Ⅱ位点多态性及Arg^140Trp突变频率。方法对44例LADA、67例2型糖尿病（T2DM）患者和25例正常人（NC）的临床生化指标、胰岛自身抗体、血浆C肽水平及CD38各基因型、等位基因进行比较。结果LADA的高发年龄段在30～50岁，存在体重肥胖及超重者。LADA和T2DM存在CD38基因B／B、A／B多态，NC组无多态存在，均为B／B。三组中都未发现CD38Arg^140Trp突变。结论本研究尚未发现LADA的发病与CD38基因的多态性和CD38Arg^140Trp突变有关。

表达芯片筛选类风湿关节炎特异表达基因

为了寻找类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)新的特异性表达标记物,应用基因芯片对RA、骨关节炎(osteoarthritis,OA)和强直性脊柱炎(ankylosing spondylitis,AS)患者关节滑膜组织的基因表达谱进行比较,并采用实时定量PCR方法对芯片结果进行验证.全基因组表达芯片的结果显示,与OA滑膜组织及AS滑膜组织相比,在RA患者的滑膜组织中,CD38,ANKRD38,E2F2,CFDP1,CD7,ISG20和IL2RG基因表达异常;实时定量PCR结果证实,RA患者滑膜组织中,CD38、E2F2和IL2RG基因表达明显增高.

miRNA-499a-5p靶向CD38对过氧化氢诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制研究

目的探讨miRNA-499a-5p靶向CD38对过氧化氢(H2O2)诱导的心肌细胞损伤的影响及作用机制。方法体外培养H9c2心肌细胞,采用H2O2诱导心肌细胞损伤模型。实验分为对照组、H2O2组、H2O2+阴性对照(NC)组和H2O2+miRNA-499a-5p组。实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)法分别检测心肌细胞中miRNA-499a-5p和CD38的表达,噻唑蓝(MTT)法检测心肌细胞存活率,试剂盒检测活性氧簇(ROS)水平和乳酸脱氢酶(LDH)活性,Annexin V-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,Western blot检测B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)、磷酸化PI3K(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)和磷酸化Akt(p-Akt)的表达量。双荧光素酶报告基因试验检测miRNA-499a-5p和CD38的靶向关系。结果H2O2组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与对照组相比均明显降低(P<0.05),而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显升高(P<0.05)。H2O2+miRNA-499a-5p组心肌细胞中miRNA-499a-5p、Bcl-2、p-PI3K、p-Akt的表达水平及心肌细胞存活率与H2O2组相比均明显升高(P<0.05),而CD38和Bax的表达水平、ROS水平、LDH活性及细胞凋亡率均明显降低(P<0.05)。双荧光素酶报告基因试验证实了CD38是miRNA-499a-5p的靶基因。结论miRNA-499a-5p能够通过抑制CD38的表达减轻H2O2诱导的心肌细胞损伤,该作用机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。