CD3E蛋白真核表达及全人源CD3单克隆抗体的制备

目的:高效真核表达和纯化获得CD3E蛋白,制备全人源CD3抗体。方法:构建CD3E链胞外区真核表达质粒,利用293F悬浮细胞表达系统表达并纯化获得高纯度蛋白。选取人源化抗体转基因小鼠CAMouse-HG76进行免疫,通过细胞融合的方法获得杂交瘤细胞,再利用ELISA法和流式细胞分析法筛选CD3特异性单克隆抗体。结果:成功构建重组表达载体pcDNA3.4-CD3E-mFc,真核细胞表达并纯化获得纯度为85%的融合蛋白。免疫小鼠后效价高达1∶102400。杂交瘤细胞筛选获得3株CD3特异性单克隆抗体。结论:本研究成功获得了CD3E融合蛋白和CD3单克隆抗体,为后续建立ELISA检测方法、全人源治疗性抗体药物及相关研究提供基础。

基于WGCNA鉴定子宫颈鳞状细胞癌CD8^(+)T细胞浸润相关的生物标志物

目的应用生物信息学的方法构建促进子宫颈鳞状细胞癌(CSCC)中CD8+T细胞浸润的相关基因共表达网络,并鉴定出相应的预后生物标志物。方法应用加权基因共表达网络分析(WGCNA)和PPI网络探索TCGA数据库中CSCC的基因表达数据,并筛选出与CD8+T细胞浸润相关hub基因,系统分析hub基因的免疫特征及预后价值。结果通过WGCNA和PPI网络分析鉴定出10个hub基因(CCL5、CCR5、CD2、CD3D、CD3E、CD8A、CXCR3、IFNG、PDCD1、PRF1)。在TISIDB数据库中查询10个基因与免疫细胞之间的相关性,发现这些基因的表达与免疫细胞,尤其是CD8^(+)T细胞显著正相关。通过Kaplan-Meier分析、单因素和多因素Cox回归分析验证后选择CD3E作为CSCC预后生物标志物。基因集富集分析(GSEA)显示CD3E在细胞黏附分子、趋化因子信号通路、细胞因子-细胞因子受体相互作用和T细胞受体信号通路显著富集。结论通过生物信息学验证,CD3E被确定为CSCC免疫治疗的潜在生物标记物和免疫治疗靶点。