芦荟多糖联合Anti-CD3McAbr、hIL-2干预的PBMC对HepG2生长的影响

目的探讨芦荟多糖(AP)的抗肿瘤作用机制。方法采用AP单独及联合Anti-CD3McAbr、hIL-2诱导干预外周血单个核细胞(PBMC)的方法建立效应细胞;采用MTT法测定效应细胞及其上清液对靶细胞HepG2生长的影响;ELISA法测定干预后各组PBMC分泌IFN-γ、TNF-α的水平,测定效应细胞及其上清液对靶细胞上清液中IFN-γ、TNF-α和AKP水平的影响。结果AP单独及其联合Anti-CD3McAbr、hIL-2可提高PBMC分泌IFN-γ水平,对TNF-α水平没有明显影响;效应细胞的上清液对HepG2的生长无明显抑制作用,而效应细胞细胞悬液对HepG2的生长有抑制作用,可升高混合培养后上清液中TNF-α、IFN-γ水平,降低AKP水平。结论AP体外抗肿瘤作用与提高免疫和促进肿瘤坏死因子释放有关。

不同rhIL—2浓度与CD3McAb诱导LAK细胞的协同作用

本研究表明，单纯使用不同浓度的人重组白细胞介－２（ｒｈＩＬ－２）培养诱导ＬＡＫ细胞，ＬＡＫ细胞的增殖与ｒｈＩＬ－２呈效应剂量关系，加入ＣＤ３－ＭｃＡｂ与不同浓度ｒｈＩＬ－２联合培养诱导ＬＡＫ细胞，效应剂量关系无明显差异。５０ｕ／ｍｌ ｒｈＩＬ２与ＣＤ３ＭｃＡｂ联合诱导ＬＡＫ细胞，其刺激指数及杀瘤活性非常显著高于单纯ｒｈＩＬ－２５００ｕ／ｍｌ诱导的ＬＡＫ细胞。

CD3McAb对胎儿脾和胸腺细胞增殖及CD3AK杀伤活性的研究

本文对抗人ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导胎儿脾和胸腺细胸增殖反应的调节作用进行了研究。ＣＤ３ＭｃＡｂ能够促进胎儿脾细胞的增殖，培养１６天时扩增近９０倍，但对胸腺细胞的增殖作用不明显。ＩＬ－２能显著地促进胸腺细胞对ＣＤ３的反应性。相同浓度的ＩＬ－２脾细胞形成的ＣＤ３ＡＫ活性高；而胸腺细胞ＣＤ３ＡＫ活性低，而且两种细胞在一定剂量范围的ＩＬ－２作用下出现的增殖特性和ＣＤ３ＡＫ活性反应不相同。

CIK细胞体外培养的免疫表型

目的探讨体外培养过程中细胞因子激活的杀伤细胞(CIK)免疫表型的动态变化。方法通过向外周血单个粒细胞(PBMC)中加入白细胞介素2(IL-2)、γIL-1α、γ干扰素(γ-IFN)与抗CD3McAb,诱导出CIK细胞。经流式细胞分析法对CIK细胞进行动态表型分析。结果动态表型分析显示,在第14~21天时CD3+CD16+56+细胞为(31·6±5·5)%^(35·8±9·7)%,呈高表达的平台期。结论CIK细胞在体外培养14~21d,CIK细胞CD3+CD16+56+双阳性细胞呈高表达,此时临床应用可取得较好疗效。

人脐血CD_3AK细胞生物活性及抗瘤作用的实验研究

目的 应用抗CD3单克隆抗体(CD3McAb)和重组人白细胞介素- 2(rhIL- 2)共同诱导人脐血单个核细胞以制备CD3AK细胞,动态观察其体外增殖能力、杀伤活性、免疫表型变化及分泌细胞因子水平。方法 用台盼蓝活细胞计数计算细胞扩增倍数,MTT法测定细胞杀伤活性,间接免疫荧光法分析细胞免疫表型,ELISA双抗夹心法检测肿瘤坏死因子- α(TNF- α)、干扰素 -γ(IFN- γ)、白细胞介素 -6(IL- 6)的水平。结果 脐血CD3AK细胞在第2周增殖能力最强,增殖倍数为78.56;培养至第12天的脐血CD3AK细胞杀伤活性最高,并对多种靶细胞的杀伤作用显著;表型分析脐血CD3AK细胞属异质性细胞群,培养第7、14 天,群体中 CD3+、CD8+、CD25+、CD38+、CD16+及 CD56+ 细胞较培养前显著增加(P<0.01); CD3 AK细胞培养至第 3 天的上清中 TNF -α、IFN -γ、IL -6 水平明显升高。结论 脐血CD3AK细胞是一种具有广谱杀瘤活力且增殖活性强的免疫细胞。本研究为脐血 CD3 AK细胞的免疫治疗提供了实验和理论依据。

淋巴细胞经TCR－CD3活化增殖作用的分析

本文探讨了抗ＣＤ３单抗诱导的淋巴细胞活化增殖及有关影响因素。实验结果表明：①淋巴细胞内钙升高是淋巴细胞活化增殖的重要条件，ＣＤ３ＭｃＡｂ引起的早期胞浆游离钙迅速升高主要由内质网释放钙离子所致，而淋巴细胞增殖不仅需要细胞内钙释放，还需要细胞外钙内流；②ＧＴＰ结合蛋白是淋巴细胞激活过程的一重要环节，经Ｇ蛋白作用物霍乱毒素作用后，淋巴细胞ＤＮＡ合成显著降低；③新霉素和ＰＳＳ可抑制ＰＬＣ和ＰｋＣ的活性，对淋巴细胞ＮＤＡ合成造成剂量依赖性抑制作用。此外，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导的淋巴细胞ＤＮＡ合成需要辅佐细胞的存在，高度纯化的Ｔ细胞对ＣＤ３ＭｃＡｂ的刺激不发生增殖反应。

CD_3 McAb联合rhIL-2激活的骨髓对白血病细胞杀伤净化作用的研究

目的 探讨CD3单克隆抗体 (CD3McAb)联合重组人白细胞介素 2 (rhIL 2 )激活的骨髓对白血病细胞的杀伤及净化作用。方法 用MTT法检测激活骨髓的细胞毒作用 ;半固体集落培养法观察激活骨髓CFU GM水平和对白血病细胞的净化作用 ;采用间接荧光法测定激活骨髓的免疫标记。结果 CD3McAb与rhIL 2联合激活的骨髓对白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0均有明显的杀伤净化作用 ,且优于rhIL 2或CD3McAb单用组 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。rhIL 2和 (或 )CD3McAb对激活骨髓的CFU GM水平无明显影响。CD3McAb +rhIL 2激活的骨髓 ,与活化前及rhIL 2或CD3McAb组相比 ,CD3+ 、CD8+ 、CD1 9+ 、CD2 5+ 、CD38+ 、CD56+ 细胞显著升高。结论 CD3McAb能增强rhIL

A-LAK,CD_3AK细胞体外细胞毒的实验研究

为了研究ＬＡＫ，Ａ－ ＬＡＫ，ＣＤ３ ＡＫ 细胞体外对人肝癌细胞株ＢＥＬ－ ７４０２ 的杀伤活性，我们利用脐带血制备ＬＡＫ，Ａ－ ＬＡＫ，ＣＤ３ＡＫ 细胞，观察其增殖，细胞表面ＩＬ－ ２Ｒ 表达，细胞表型改变及对ＢＥＬ－ ７４０２ 细胞的细胞毒作用。结果表明Ａ－ ＬＡＫ，ＣＤ３ＡＫ 比ＬＡＫ 细胞具有更强的增殖能力和抗瘤活性，临床应用潜力较大。

自体CIK细胞回输治疗肿瘤患者的护理

CIK细胞是将人体外周血单个核细胞（PBMC）在体外模拟人体内环境，用多种细胞因子（如CD3McAb、IL-2、IFN—y、IL-1a等）共同培养增殖后获得的一群异质细胞。其中CD3＋、CD56＋是CIK细胞群体中主要的效应细胞，兼具有T细胞的抗瘤活性和NK细胞的非MHC限制性，临床应用于术后、放化疗后的各类肿瘤治疗，

抗CD_3McAb诱导外周血单个核细胞活化增殖的观察

目的：观察抗ＣＤ３ＭｃＡｂ诱导人外周血单个核细胞（ＨＰＢＭＣ）活化增殖过程中的影响因素及抗ＣＤ３ＭｃＡｂ激活的杀伤细胞（ＣＤ３ＡＫ细胞）免疫学特性的变化。方法：采用ＭＴＴ法和苔盼蓝染色法、ＩＬ－２依赖细胞株（ＣＴＬＬ细胞）增殖实验、ＴＮＦ－α（双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法）试剂盒以及间接免疫荧光法分别检测ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性、内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α的产生及ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＩＬ－２Ｒ等的表达。结果：抗ＣＤ３ＭｃＡｂ对ＨＰＢＭＣ有很强的丝裂原作用，该作用与其诱导浓度、时间及外源性ＩＬ－２的协同作用密切相关。ＣＤ３ＡＫ细胞可产生内源性ＩＬ－２、ＴＮＦ－α，ＩＬ－２Ｒ表达及ＣＤ８＋细胞百分率显著增多。结论：ＣＤ３ＡＫ细胞具有很强的增殖能力，但需要外源性ＩＬ－２的协同作用，增殖细胞以ＣＤ８＋细胞为主。

抗CD_3McAb和IL─2培养的肝癌TIL的表型变化

目的研究抗CD_3单克隆抗体对肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的表型变化的影响。方法应用间接免疫荧光法检测肝癌TIL的CD3、CD4、CD8、Tac表达。结果初始分离的TIL的CD3+为主，经IL—2培养4周后，CD3、CD4、CD8、Tac表达均升高，1μg／ml抗CD3McAb与IL—2共同培养TIL的CD3、CD4、CD8、Tac的表达升高明显，尤以CD8、Tac表达升高显著。结论抗CD3MCAb与IL—2共同培养肝癌TIL有利于TIL的活化，能增强TIL的抗肿瘤能力。

抗TCR/CD3单克隆抗体的免疫增强作用及其应用

抗ＴＣＲ／ＣＤ３单克隆抗体（抗ＴＣＲＭｃＡｂ，抗ＣＤ３ＭｃＡｂ）对Ｔ细胞具有强活化作用，已成为当今最常用的Ｔ细胞活化剂之一。本文从免疫增强角度着重归纳了抗ＴＣＲ／ＣＤ３ＭｃＡｂ激活Ｔ细胞的条件、机制和效应。

CD_3AK细胞对人肺癌细胞株的细胞毒作用

目的研究ＣＤ３ＡＫ细胞对人肺癌细胞株的细胞毒作用。方法应用抗ＣＤ３单克隆抗体及重组白细胞介素２（ｒＩＬ－２）刺激培养ＣＤ３ＡＫ细胞，体外实验研究ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖及对人肺癌细胞株Ａ５４９、ＳＰＣ－Ａ１细胞的杀伤能力。结果刺激培养４ｄ，ＣＤ３ＡＫ细胞增殖及杀伤能力与ＬＡＫ细胞无差异；培养８ｄ，ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖及杀伤能力明显优于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１）；培养１６ｄＣＤ３ＡＫ细胞仍见增殖，且杀伤作用保持在５０％以上。结论ＣＤ３ＡＫ中细胞作为一种新的肿瘤过继性免疫治疗效应细胞具有潜在的临床应用价值。

CD3单抗诱导小鼠胸腺细胞凋亡的流式细胞仪检测

采用不同浓度抗小鼠ＣＤ３ 复合物单抗刺激幼龄小鼠胸腺细胞，培养后分别在不同时间用流式细胞仪检测胸腺细胞的凋亡情况。结果表明，在ＣＤ３ 单抗诱导幼龄小鼠胸腺细胞４ 小时后，流式细胞仪即可测出凋亡细胞特有的ＡＰ峰。本项研究提示，用ＣＤ３ 单抗刺激未成熟胸腺细胞可以通过内源性的凋亡途径引起细胞死亡。未成熟Ｔ 细胞通过ＴＣＲ－ＣＤ３ 复合物与自身抗原接合激活上述过程可能与克隆清除的形成机制及自我耐受有关。

生物治疗对白血病患者细胞免疫功能的影响

本文检测了２５例正常人和２０例白血病患者的淋巴细胞转化率（ＬＴ）、Ｅ－玫瑰花环形成率（Ｅ-ＲＦ）、白介素－２水平（ＩＬ－２）、自然杀伤细胞（ＮＫ）活性和淋巴细胞因子激活的杀伤细胞活性（ＬＡＫ），以及经ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法治疗前后白血病患者细胞免疫功能的变化。结果表明白血病患者ＬＡＫ活性和细胞免疫功能显著低于正常人（Ｐ＜０．０ｌ）；抗ＣＤ＿３单克隆抗体（ＣＤ＿３ＭｃＡｂ）可显著增强ＬＡＫ细胞活性；经ＩＬ－２／ＬＡＫ为主的生物治疗后患者ＬＴ和Ｅ－ＲＦ明显增高（Ｐ＜０．０５）。证明ＩＬ－２／ＬＡＫ为主的生物治疗方法能够不同程度地逆转白血病患者细胞免疫功能的缺陷。

激活脐血单个核细胞体外抗白血病细胞株活性研究

目的 探讨植物血凝素 (PHA)、白细胞介素 2 (IL 2 )、抗CD3单克隆抗体 (αCD3Ab)激活的脐血单个核细胞 (CBMC)体外对K562的杀伤活性 ,以及外源性刺激因子对CBMC的可溶性白细胞介素 2受体 (sIL 2R)含量的影响。方法 采集CBMC分别与不同刺激因子体外短期培养 ,台盼蓝拒染法测效应细胞的增殖能力 ,ELISA法检测上清液中sIL 2R的含量 ,3 H TdR释放法测定效应细胞体外对K562靶细胞的杀伤活性。结果 脐血PHA CD3AK细胞在体外培养 3d后增殖倍数、活化后上清液中sIL 2R的含量显著高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。PHA CD3AK细胞体外对白血病细胞株K562细胞的细胞毒活性明显高于PHA LAK ,CD3AK和LAK细胞 (P <0 .0 5)。结论 脐血单个核细胞经PHA ,IL 2和αCD3Ab激活后 ,可有效形成PHA CD3AK效应细胞 ,其增殖活性、细胞毒性均高于PHA LAK 。

无血清培养条件下丝裂原和单抗对rIL-2激活的淋巴细胞活性的影响

采用无血清培养体系,探索了PHA-P,PWM、Con-A及CD3McAb对rIL-2激活的正常人外周血淋巴细胞增殖及细胞毒活性的影响,并同合优质新生牛血清的培养体系进行了比较。结果表明,在无血清培养条件下:①rIL-2、rIL-2+PHA-P及rIL-2+CD3McAb激活的淋巴细胞的增殖及细胞毒活性均高于有血清培养;rIL-2+PWM激活的淋巴细胞仅在细胞毒活性方面高于有血清培养。②PHA-P、PWM、Con-A及CD3McAb对rIL-2激活的淋巴细胞的增殖均有促进作用,CD3McAb可增强其对K562及HL60的细胞毒活性,而PHA-P仅能增强其对K562的细胞毒活性。

PHA-CD3AK细胞的制备及其对恶性肿瘤的疗效

目的:探讨植物血凝素(PHA)、抗CD3单克隆抗体(anti-CD3McAb)和rhIL-2共同诱导的PHA-CD3AK(PHA-CD3McAb actinated killer cell)细胞的临床应用质量控制,及其对恶性肿瘤的疗效。方法:选取陕西省友谊医院肿瘤生物诊疗科53例中晚期肿瘤患者(宫颈癌9例,肺癌6例,肾癌6例,非霍奇金淋巴瘤5例,肝癌5例,胃癌7例,食道癌5例,恶性黑素瘤5例,直肠癌5例),分离患者外周血单个核细胞,加入PHA、anti-CD3McAb、rhIL-2体外诱导制备自体PHA-CD3AK细胞。质量控制检测细胞数量和活细胞比例、细胞毒活性、内毒素和感染源,流式细胞术检测免疫表型。将检测合格的自体PHA-CD3AK细胞静脉回输至患者体内,每2d回输1次,每疗程6次,共2个疗程,观察治疗效果和不良反应。结果:制备的PHA-CD3AK细胞符合预期免疫活性细胞质控的各项要求。治疗后患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞和CD16+56+细胞(NK细胞)比例分别为(49.36±9.21)%、(34.85±4.35)%、(29.20±5.12)%和(21.15±6.50)%,较治疗前均显著升高(均P<0.05)。大部分患者治疗后全身症状明显改善(43/53),其中完全缓解6例、部分缓解14例、微效10例、稳定14例、进展9例,总有效率达56.6%,临床受益率达83.0%。所有患者治疗后相关化验指标均未出现异常变化,也未出现明显的全身毒性反应。结论:PHA-CD3AK细胞制剂质量控制指标切实可行,其对恶性肿瘤的疗效确切,并能有效提高患者的免疫功能。

抗CD3单抗促进肿瘤细胞凋亡的研究

目的 研究抗CD 3单抗活化T细胞后促进肿瘤细胞发生凋亡的作用。方法 应用流式细胞术并结合AnnexinⅤ FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况并对凋亡因子Fas抗原 (CD 95 )和Apo 2 .7进行定量分析。结果 加入抗CD 3单抗后可明显诱导肿瘤细胞的凋亡产生 (AnnexinⅤ FITC/PI染色 ) (P <0 .0 5 ) ,凋亡因子Fas抗原 (CD 95 )表达也明显增高 (P <0 .0 5 ) ,而Apo 2 .7仅略增高 (P >0 .0 5 )。结论 加入抗CD 3单抗活化的T细胞可明显促进肿瘤细胞发生凋亡 ;介导凋亡发生主要通过Fas抗原 (CD 95 )

CD3AK 细胞和 LAK 细胞治疗晚期恶性肿瘤的临床和实验研究

将５１例晚期恶性肿瘤患者（男性２３例，女性２８例）分成两组，其中一组（３１例）以ＣＤ３ＭｃＡｂ（ＣＤ３单克隆抗体）和小剂量ＩＬ－２（５００ｕ／ｍｌ）共同诱导的ＣＤ３ＡＫ细胞治疗，另一组（２０例）输注大剂量ＩＬ－２（１０００ｕ／ｍｌ）诱导的常规ＬＡＫ细胞治疗，以探讨降低ＩＬ－２用量、提高杀伤细胞细胞毒活性的可能性。结果显示ＣＤ３ＡＫ组患者生活质量改善、症状缓解均优于ＬＡＫ组。ＣＤ３ＡＫ组ＰＲ＋ＭＲ率较ＬＡＫ组高２９．０％，Ｓ＋Ｐ率和死亡率分别较ＬＡＫ组低１２．４％和９．６％。同时比较了ＣＤ３ＡＫ细胞与ＬＡＫ细胞的体外增殖和细胞毒活性，结果表明ＣＤ３ＡＫ细胞增殖率高于ＬＡＫ细胞（Ｐ＜０．０１），靶细胞抑制率二者在０．０５水平无显著差异。提示ＣＤ３ＭｃＡｂ在刺激杀伤细胞活性，尤其在提高其增殖能力方面，具有显著的作用，ＣＤ３ＡＫ／ＩＬ－２能更有效地治疗晚期恶性肿瘤。