基于组织驻留记忆CD4^(+)T细胞探讨溃疡性结肠炎复发过程中“伏邪”的生物学基础

从组织驻留记忆CD4^(+)T细胞(CD4^(+)TRM)细胞入手,综述其生理病理特点及其在溃疡性结肠炎(UC)复发中的作用,探讨UC复发过程中“伏邪”的生物学基础,为中医药抗UC复发提供新策略。CD4^(+)TRM细胞在UC的发病机制中具有核心作用,参与了UC肠道炎症的反复发作。伏邪是感邪后藏伏于体内不立即发病的邪气,或湿热瘀血等邪气并未随疾病治愈根除而是潜伏于内的病邪,是UC反复发作、迁延难愈的主要病因。伏邪的致病特点与CD4^(+)TRM细胞免疫记忆、感而引动、待机而发的特性暗相契合,因此CD4^(+)TRM细胞可能是UC“伏邪”的生物学基础之一。

过敏性紫癜患儿外周血CD4^+记忆T细胞亚群表达的意义

目的探讨CD4+记忆T细胞亚群在过敏性紫癜(HSP)免疫发病机制中的意义。方法收集初发HSP患儿25例,并将其分为HSP无肾脏损害组(N-HSPN组)15例和紫癜性肾炎组(HSPN组)10例,另选取10例本院健康体检儿童作为正常对照组,抽取患儿急性期、恢复期外周血,用梯度密度离心法分离新鲜单个核细胞(PBMC),用流式细胞仪检测PBMC中CD4+效应记忆T细胞(CD4+Tem)、CD4+中央记忆T细胞(CD4+Tcm)水平。结果 HSP患儿急性期外周血CD4+T细胞水平、CD4+/CD8+比例均较正常组降低(均<0.05),而CD8+T细胞数水平与正常组比较差异无统计学意义(>0.05)。急性期N-HSPN和HSPN组患儿外周血CD4+Tem水平均明显高于正常对照组(均<0.05),而N-HSPN和HSPN组比较差异无统计学意义(>0.05);N-HSPN和HSPN患儿CD4+Tcm的表达与正常组比较差异均无统计学意义(均>0.05)。恢复期NHSPN和HSPN组HSP患儿外周血CD4+Tem水平仍明显升高,与急性期比较差异无统计学意义(均>0.05),但仍然明显高于正常组(均<0.05)。结论 HSP患儿存在CD4+T细胞的异常,CD4+Tem的异常升高可能是HSP发生的一个重要因素;CD4+Tem可能只是参与了HSP血管炎的免疫损伤,而与是否导致HSPN的病理过程无关,不能作为检测HSP肾脏损害的有效指标。

BCG复种或结核菌素复强反应对外周血CD4+记忆T细胞特征的影响

目的探讨复种BCG或结核菌素试验复强反应对外周血CD4^(+)记忆T细胞特征的影响。方法将结核菌素纯蛋白衍生物(TB-PPD)皮试和干扰素释放试验(QuantiFERON-TB Gold in-tube,QFT)均为阴性的健康者(PPD-QFT-)分成2组,其中一组接种BCG(BCG复种组),另一组接种安慰剂(对照组)。12周后,采集受试者外周血进行流式细胞术分析,然后在受试者右臂和左臂皮内分别注射TB-PPD和重组结核杆菌融合蛋白ESAT6-CFP10(EC),48 h观察皮试反应。结果对照组和BCG复种组再次TB-PPD皮试阳性率分别为14.3%和47.9%。对照组、TB-PPD阳转者与TB-PPD阴性反应者比较,其外周血CD27-CD28+CD4^(+)-EM细胞百分含量增加而CD27+CD28-CD4^(+)-CM细胞百分含量降低。BCG复种组、TB-PPD阳转者外周血CD27+CD28-CD4^(+)-EM细胞含量低于TB-PPD阴性反应者。结论成人复种BCG或TB-PPD皮试复强反应可影响外周血CD4^(+)

膀胱癌患者高表达活化的CD4^+记忆性T细胞和CD8^+T细胞和低表达M0巨噬细胞与临床预后佳有关

目的研究膀胱癌免疫细胞的浸润模式,探索免疫细胞与预后的关系。方法从癌症基因组图谱(TCGA)下载膀胱癌转录本数据及相应临床数据,CIBERSORT软件反卷积法计算22种免疫细胞所占比例,R软件分析各临床分期中免疫细胞浸润模式,Kaplan-Meier生存分析各免疫细胞与预后的关系。结果从TCGA数据库下载基因转录本数据共433例,包含414例膀胱癌组织,19例正常组织。数据矫正后用CIBERSORT软件计算免疫细胞所占比例,筛选后得到膀胱癌组织146例,正常膀胱组织4例。活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最低,M0巨噬细胞在膀胱癌临床Ⅳ期表达量最高,膀胱癌组织活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达利于预后。结论膀胱癌组织活化的CD4^+记忆性T细胞、CD8^+T细胞高表达,M0巨噬细胞低表达,与临床预后好有关。

CD_4^+记忆T细胞与血管炎

系统性血管炎是血管壁的炎症导致组织缺血坏死为特征的一组疾病,临床常见过敏性紫癜、川崎病、抗中性粒细胞胞质抗体相关性血管炎、系统性红斑狼疮等,它们的发病机制复杂,T淋巴细胞亚群介导的免疫损伤也一直为人们关注的热点。CD4+记忆T细胞(CD4+Tm)是细胞表型为CD45RO+CD45RA-的T细胞亚群,它们的产生与分化受多种因素的影响,其功能异常与血管炎的免疫病理过程密切相关。

基于记忆性CD4^(+) T细胞探讨中医药防治溃疡性结肠炎复发的新策略

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是炎症性肠病的一种表型,以结肠和直肠慢性、持续、反复发作的黏膜炎症为主要特征,临床典型表现为腹痛、腹泻、里急后重、黏液脓血便等[1]。本病好发于青少年,主要见于北美和欧洲等发达国家,流行病学资料显示我国UC的患病率约为1.18/10万,且其发病率和患病率逐年增加,目前,UC已被世界卫生组织列为现代难治疾病之一[2]。

记忆性免疫细胞紊乱在系统性红斑狼疮发生发展中的作用及其机制研究进展

系统性红斑狼疮(SLE)是一种复杂的自身免疫性疾病,病情活动和缓解交替出现。记忆性免疫细胞是一类具有免疫记忆的特殊细胞亚群,主要包括记忆性B细胞和记忆性T细胞。SLE中存在多种记忆性免疫细胞亚群紊乱,其中非典型记忆性B细胞在SLE中增多,且与疾病活动度和肾脏损害相关,该细胞亚群紊乱可以通过产生自身抗体、调控Tfh细胞异常分化发挥致病作用。此外,多种记忆性CD4+T细胞亚群在SLE中增加,可促使SLE及其并发症如皮损、狼疮肾炎、神经精神性狼疮、狼疮相关心血管疾患等的发生发展。记忆性CD8+T细胞亚群紊乱参与了SLE疾病活动和特定器官的损害,通过分泌过多的穿孔素和颗粒酶、激活JAK/STAT通路、与CD4+T细胞相互串扰等途径参与SLE的发生发展。

健康个体中SARS-CoV-2反应性记忆T细胞免疫研究

目的 了解健康个体中的SARS-CoV-2反应性CD4+T细胞的记忆表型和功能。方法 使用SARS-CoV-2来源多肽刺激来自参与者的PBMC,通过胞内染色和流式细胞术检测SARS-CoV-2反应性记忆T细胞,并进行记忆表型分析,通过CBA检测SARS-CoV-2来源多肽刺激后的细胞因子分泌水平,初步评估SARS-CoV-2反应性记忆T细胞的功能。结果 40%(6/15)健康个体可检测到SARS-CoV-2反应性CD4+记忆T细胞,记忆表型分析显示其主要由中央记忆型T细胞组成(82.2%),其他记忆细胞占17.8%。与阴性对照相比,SARS-CoV-2来源多肽刺激后,IL-10分泌水平的下降具有统计学意义(P<0.05),IFNγ、TNFα、IL-2和IL-4分泌水平的差异不具有统计学意义。结论 健康个体中存在SARS-CoV-2反应性CD4+记忆T细胞。

CD4^(+)T细胞的记忆形成与维持机制

在全球新冠疫情愈发严重的当下,记忆细胞在抗病毒感染中的优势使其受到了广泛的关注。最新的研究发现,CD4^(+)记忆T细胞(memory T cell,TM)的分化与效应应答需要特定抗原提呈细胞与微环境中细胞因子的辅助。它们严密地调控着胞内的转录因子及能量代谢。该文总结并讨论了调控CD4^(+)TM生成、维持及再次应答的关键机制。在不同疾病背景下精准调控CD4^(+)TM的数量与功能将会是未来的一个巨大挑战。

健脾消瘿汤合优甲乐对脾气亏虚型桥本甲状腺炎患者甲状腺激素、甲状腺自身抗体和CD4+CD45RO+记忆性T细胞的影响

目的:探讨健脾消瘿汤联合优甲乐对脾气亏虚型桥本甲状腺炎(HT)患者甲状腺激素、甲状腺自身抗体和CD4+CD45RO+记忆性T细胞的影响。方法:选择2020年5月~2021年11月期间我院收治的HT患者60例,采用随机数字表法分为对照组(优甲乐治疗,30例)和研究组(健脾消瘿汤联合优甲乐治疗,30例),两组均治疗12周后观察临床疗效,并对比两组治疗前后中医证候积分、甲状腺激素、甲状腺自身抗体和CD4+CD45RO+记忆性T细胞的变化。结果:研究组临床总有效率较对照组高(P<0.05)。研究组治疗后促甲状腺激素(TSH)水平、中医证候总积分、CD4+CD45RO+记忆性T细胞在外周血单个核细胞(PBMC)中的百分比、甲状腺球蛋白抗体(TGAb)、甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)均低于对照组(P<0.05),游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平高于对照组(P<0.05)。结论:脾气亏虚型HT患者采用健脾消瘿汤联合优甲乐治疗,可改善其甲状腺激素水平,调节甲状腺自身抗体水平和CD4+CD45RO+记忆性T细胞在PBMC中的百分比,进一步提高临床疗效。

天疱疮患者皮损中CD4^+定居记忆T细胞的浸润及其临床相关性分析

目的探讨天疱疮皮损局部CD4+定居记忆T(TRM)细胞的浸润及其临床相关性。方法2017年9月至2018年12月在上海交通大学医学院附属瑞金医院皮肤科收集天疱疮患者20例,健康对照15例。采用流式细胞仪检测天疱疮患者皮损和健康对照皮肤CD4^+TRM细胞的表达。比较天疱疮患者不同部位皮损处CD4+TRM细胞的浸润情况,分析CD4^+TRM细胞比例与病情控制所需时间的关系。符合正态分布的资料采用t检验,不符合正态分布者采用非参数检验;采用Pearson相关系数分析CD4^+TRM细胞比例和天疱疮疾病面积指数(PDAI)评分、循环中抗桥粒芯糖蛋白(Dsg)抗体滴度的相关性。结果20例天疱疮患者中16例为寻常型天疱疮,4例为落叶型天疱疮。所有患者均有皮肤累及,14例皮损组织取材于躯干部位,6例取材于四肢部位。健康对照组年龄、性别和取材部位与天疱疮组差异无统计学意义(均P>0.05)。天疱疮患者皮损局部CD3^+T细胞(72.75%±8.22%)显著高于健康对照组(31.33%±8.72%,t=14.24,P<0.001),CD4^+TRM细胞比例(44.05%±14.27%)亦显著高于健康对照组(12.60%±5.12%,t=9.10,P<0.001)。天疱疮患者躯干部CD4+TRM细胞比例(49.57%±12.32%)显著高于四肢(31.17%±9.75%,t=3.23,P<0.05)。皮损局部CD4+TRM细胞比例与PDAI呈正相关(r2=0.246,P=0.026);而与血清中循环抗Dsg1(r^2=0.137,P>0.05)和抗Dsg3(r2=0.162,P>0.05)抗体滴度无显著相关性。系统糖皮质激素治疗过程中4周内不能控制的患者皮损处CD4^+TRM细胞比例显著高于4周内可以控制的患者(t=3.22,P<0.05)。结论天疱疮患者皮损局部CD4+TRM细胞比例显著增高,可能与病情严重程度和疾病治疗反应相关。

α-干扰素治疗慢性乙型肝炎可促进记忆性CD4^+T细胞群扩增

目的:探讨α-干扰素对慢性乙型肝炎患者记忆性CD4+T细胞变化的影响及其机制。方法:100例慢性乙型肝炎患者相应的治疗时间采集全血标本,分离外周血单个核细胞,采用FC500流式细胞仪收集和分析外周血记忆性CD4+T细胞亚群。结果:1.在IFN-α治疗过程中,可引起CD4+TCM、CD4+TEM和CD4+TIM细胞比例的规律性变化,即CD4+TCM与CD4+TIM变化规律基本相反,而CD4+TIM与CD4+TEM变化规律基本一致,说明用药时CD4+TCM向CD4+TIM和CD4+TEM转化。2.用药36周时CD4+TCM的增加与CD4+T细胞一致,而停药后CD4+TCM的减少与CD4+T细胞也一致,说明IFN-α导致了CD4+TCM细胞的增殖,从而使CD4+T细胞数量增加。结论:慢性乙型肝炎病毒感染患者用IFN-α治疗时,可引起CD4+TCM、CD4+TEM和CD4+TIM的规律性变化,使得效应CD4+TEM细胞增加;同时,记忆性CD4+T细胞数量增加,其增加原因可能与CD4+TCM细胞数量的增加有关。

去白细胞滤器提取人幼稚CD4^+T细胞诱导CD4^+记忆干性T细胞的应用

目的:探讨从一次性去白细胞滤器中回收幼稚CD4+T细胞,观察其增殖分化为CD4+记忆干性T细胞的能力。方法:分离一次性去白细胞滤器中的外周单个核细胞,并与直接从健康人外周血中分离的单个核细胞进行细胞成分比较。免疫磁珠分离法纯化滤器中的幼稚CD4^+T细胞,观察其增殖与分化能力,分析诱导后的子代细胞的表型特征。结果:与正常人外周血中分离的单个核细胞相比,一次性去白细胞滤器中富集大量淋巴细胞而含有少量的单核细胞。分离得到的幼稚CD4^+T细胞可增殖分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+T细胞,表型分析发现该类细胞高表达CD45RO(93.2±0.9)%、CD62L(95.3±0.5)%和CD95(99.3±0.1)%,表达中等水平的CD45RA(65.6±1.8)%,具有CD4^+记忆干性T细胞的特征。结论:一次性去白细胞滤器中回收的幼稚CD4^+T细胞可以制备CD4^+记忆干性T细胞,可为将来基因工程改造治疗性T细胞提供实验方法。

CD4^+记忆性T细胞产生的细胞学机制

在免疫应答中,初始T细胞增殖并分化为效应T细胞,其中很少一部分分化为T记忆细胞(Tm),后者具有介导再次免疫应答的作用。最近研究表明,CD4+Tm既可由活化的效应T细胞分化而来,也可以直接由初始T细胞分化而来。在此过程中,与效应T细胞竞争树突状细胞(DC)提呈的抗原信息、与DC接触的时间长短以及TCR信号的强弱均可影响CD4+Tm的形成。研究CD4+Tm形成的细胞学机制对了解机体免疫学功能,制备更有效的疫苗,研究肿瘤和自身免疫病的机制及治疗方案等均有重要的理论意义和实用价值。

CD4^(+)记忆T细胞抗结核分枝杆菌感染及功能异常机制的研究进展

结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)感染引起的传染病。抗结核病疫苗设计的关键在于使机体获得长期保护以抵御MTB的再次感染。CD4^(+)记忆T细胞在适应性免疫反应中发挥重要作用,不仅参与细胞免疫应答,而且参与体液免疫的调节。然而,在MTB慢性感染的过程中,CD4^(+)记忆T细胞数量及功能均受损。本研究主要综述了CD4^(+)记忆T细胞的分类及各类记忆细胞的功能,并介绍它们之间的协同作用;此外,着重综述了近几年关于CD4^(+)记忆T细胞抗MTB感染作用及功能异常机制的研究进展,为抗MTB药物及疫苗的研发和效果评价提供参考。

清肠温中方对溃疡性结肠炎小鼠组织驻留记忆CD4^(+)T细胞的调控作用

目的探究清肠温中方对溃疡性结肠炎(UC)小鼠组织驻留记忆CD4^(+)T细胞(CD4^(+)TRM细胞)的调控作用,为中医药治疗UC提供新的理论依据。方法将SPF级健康雌性C57BL/6小鼠随机分为空白组、模型组、清肠温中方低剂量组、清肠温中方中剂量组、清肠温中方高剂量组。空白组小鼠全程自由进食饮水,模型组和清肠温中方低、中、高各剂量组均采用自由饮用2.5%(w/v)DSS溶液7 d复制UC模型,同时模型组给予去离子水灌胃,清肠温中方各剂量组给予相应浓度的中药干预1周,期间每日观察小鼠一般情况,测量体重、检测便潜血、记录粪便性状,计算疾病活动指数(DAI)。干预结束后留取结肠组织,制备单细胞混悬液,流式细胞术检测CD4^(+)TRM细胞的水平,应用RT-qPCR测定葡萄糖转运蛋白Glut1、Glut2、Glut4 mRNA及糖酵解相关因子HK2、PKM2、G6PC、LDHA、LepR、HIF-1αmRNA的含量。结果与空白组比较,UC小鼠呈现明显的肠道炎症,表现出不同程度的便血、腹泻、体重下降等,清肠温中方各剂量组小鼠体重较模型组明显升高(P<0.05);模型组小鼠DAI较空白组升高明显(P<0.05),清肠温中方各剂量组小鼠DAI下降明显(P<0.05)。机制方面,模型组小鼠结肠固有层CD4^(+)TRM细胞含量均明显高于空白组(P<0.05),而经清肠温中方干预后,CD4^(+)TRM细胞含量显著降低(P<0.05);模型组小鼠的Glut1、Glut2、Glut4、LepR、HIF-1α、HK2、PKM2、G6PC、LDHA mRNA水平较空白组升高(P<0.05)或有升高趋势,清肠温中方组所检测的mRNA较模型组降低(P<0.05)或有降低趋势。结论清肠温中方可能通过抑制糖酵解代谢,从而调控CD4^(+)TRM细胞免疫稳态,达到治疗UC的目的。

痹痛定联合来氟米特对类风湿关节炎患者外周血记忆性CD4^+ T细胞表达CXCR4的影响

目的分析痹痛定胶囊联合来氟米特片对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者外周血记忆性CD4^+T淋巴细胞表达CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4,CXCR 4)的影响。方法选取2017-04/2017-09月就诊于武汉市中医院风湿疼痛科门诊及住院RA患者60例,根据患者用药情况分为治疗组、对照组、空白组,每组20例,治疗组服用痹痛定胶囊和来氟米特片,对照组服用来氟米特片,两组治疗时间为12周,空白组为初次确诊尚未给予药物的RA患者,选取同期健康体检者为正常组(n=20)。评估RA患者的临床28个关节的疾病活动度评分(disease activity score 28joints,DAS 28)并检测其红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C反应蛋白(c-reactive protein,CRP)、抗环瓜氨酸肽抗体(antibodies against cyclic citrullinated peptide,anti-CCP)、类风湿因子(rheumatoid factor,RF)等实验室指标;分离各组清晨空腹采集的外周血单个淋巴细胞,通过流式分析仪检测RA患者外周血记忆性CD4^+T淋巴细胞表达CXCR4比例。对4组记忆性CD4^+T淋巴细胞(CD45RO+CD4^+T细胞)表达CXCR4比例及其与RA疾病活动度的关系进行比较分析。结果RA患者3个组CXCR4CD45RO+CD4^+T淋巴细胞表达水平高于正常健康组(P<0.05),治疗组、对照组较空白组的表达有所下降组间比较差异具有统计学意义(P<0.05),且治疗组与对照组下降比例比较有显著差异(P<0.05);CXCR4CD45RO+CD4^+T细胞表达与DAS28、ESR、CRP、anti-CCP均呈正相关(P<0.05),与RF无相关性(P>0.05)。结论 RA患者外周血高表达记忆性CXCR4+CD4^+T淋巴细胞,其表达与疾病活动度及炎症生化指标相关,痹痛定胶囊联合来氟米特片对RA患者表达记忆性CXCR4+CD4^+T淋巴细胞有抑制作用。

CXCR4嗜性SHIVKU-1病毒静脉感染中国恒河猴初步研究

目的了解SHIVKU-1静脉途径感染中国恒河猴的感染特点及进展规律。方法两只健康中国恒河猴,静脉感染SHIVKU-1病毒,定期采样检测血浆病毒载量、CD4+/CD8+比值、CD4+T细胞绝对数变化和血清中抗SHIVKU-1特异性IgG抗体水平。多色流式技术分析外周血、腹股沟淋巴结和十二指肠粘膜固有层CD4+T淋巴细胞记忆细胞亚群变化。结果两只实验猴成功感染SHIVKU-1病毒,一直到感染后3个月均保持稳定水平的病毒载量。外周血CD4+T淋巴细胞下降明显,CD4+/CD8+T细胞比值严重倒置。CD4+Tcm细胞比例在经历了感染早期的下降后,大幅升高,尤其是外周血和淋巴结。CD4+Tem则在粘膜固有层中增加明显。结论 SHIVKU-1静脉途径成功感染了中国恒河猴,为SHIV/中国恒河猴疾病及评价模型的建立奠定了良好的基础,为今后使用此模型评价抗病毒药物或疫苗提供了条件。

SHIV_(SF162p3)病毒感染急性期复制水平与慢性期CD4^+ T细胞亚群分布及频度相关性分析

目的研究B亚型强毒株SHIVSF162p3感染恒河猴后,在感染慢性期肠道组织、外周血及淋巴结中T淋巴细胞亚群的频率及其与急性期病毒复制强度的相关性。方法使用SHIVSF162p3通过静脉及黏膜途径感染12只中国恒河猴,real-time RT-PCR监测血浆病毒载量。感染慢性期取外周血、淋巴结以及通过内窥镜手术取十二指肠肠道黏膜组织,分离淋巴细胞,使用多色流式细胞术检测分析各组织中CD4+T细胞各亚群频率。结果与健康猴相比,SHIVSF162p3感染慢性期3种淋巴组织中CD4+T均有所下降且减少的主要部分是Tcm亚群,而CD4+Tcm下降在肠道组织中最为显著。与CD4+T细胞比较,慢性期CD4+Tcm的下降与急性期病毒载量峰值的相关性更高。从组织学来看,慢性期肠道组织CD4+Tcm与病毒载量峰值相关性最高,外周血次之;淋巴结的关联性不大。结论 B亚型强毒株SHIVSF162p3在急性感染期首先攻击肠道组织和外周血中CD4+Tcm细胞,造成靶细胞的严重损毁。病毒复制率越高损毁越严重,且持续至病毒感染慢性期,可能是这两种淋巴组织中CD4+T细胞下降的主要原因。而淋巴结中CD4+Tcm的下降则主要与外周血和淋巴结间的淋巴细胞循环相关。