慢性光化性皮炎患者外周血T细胞亚群及皮损白细胞介素-17、叉头状螺旋转录因子3的表达

目的:检测慢性光化性皮炎(Chronic Actinic Dermatitis,CAD)患者外周血辅助性T细胞(T Helper Cells,Th)17、调节性T细胞(Regulatory T Cells,Treg)、Th1、Th2细胞百分比以及皮损中白细胞介素(Interleukin,IL)-17、叉头状螺旋转录因子3(Forkhead Helix Transcription Protein 3,FOXP3)的表达,探究其变化趋势及相关临床意义。方法:外周血T细胞亚群的检测:以大理大学第一附属医院皮肤科符合CAD诊断标准的患者20例为试验1组,以健康体检科符合研究标准的20例健康体检者作为对照1组。通过流式细胞分析仪检测外周血中Th1、Th2、Th17、Treg细胞的百分比,计算Th1/Th2和Th17/Treg值。采用相应统计学方法进行统计分析。皮损IL-17、FOXP3的检测:选取大理大学第一附属医院皮肤科符合CAD诊断标准的患者20例作为试验2组,以手术门诊切痣患者切下的痣组织周围正常皮肤组织20例作为对照2组。通过石蜡切片免疫荧光实验检测CAD皮损和正常皮肤组织中IL-17、FOXP3的表达。采用相应的统计学方法进行统计分析。结果:①试验1组外周血Th1、Th2、Th17、Treg百分比分别为(25.81±6.52)%、(42.79±9.66)%、(12.34±5.15)%、(8.32±3.06)%;对照1组外周血Th1、Th2、Th17、Treg百分比分别为(12.59±2.69)%、(50.88±9.06)%、(12.74±5.09)%、(10.42±2.07)%;②试验1组Th1/Th2和Th17/Treg值分别为0.58(0.48,0.74)和1.65(1.00,2.21);对照组Th1/Th2和Th17/Treg值分别为0.26(0.21,0.31)和1.23(0.82,1.45);③试验2组皮损中IL-17和FOXP3的阳性率分别为(85.91±11.73)%和3.60(1.97,4.83)%;对照1组皮损中IL-17和FOXP3的阳性率分别为(89.85±8.18)%和1.32(0.85,2.79)%。结论:CAD患者非急性发作期外周血中Treg低表达、Th1高表达,皮损中FOXP3高表达,其发病可能与外周血Th17/Treg、Th1/Th2表达失衡及皮损IL-17/FOXP3的表达失衡有关,而Th17/Treg、Th17百分比及皮损中IL-17表达的差异无统计学意义。

免疫性不孕症患者外周血CD4^+CD25^+调节性T细胞、叉头状转录因子3、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4的水平研究

目的探讨外周血CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Treg)、叉头状转录因子3(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)与免疫性不孕的关系,为免疫性不孕的诊断和治疗提供依据。方法用流式细胞仪检测60例免疫性不孕妇女(研究组)和60例正常妊娠的育龄妇女(对照组)外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4水平,并对检测结果进行统计学分析。结果研究组外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4水平值分别为:(3.66±0.59)%、(2.97±0.63)%、(3.17±0.36)%,均低于对照组[(8.17±0.63)%、(7.17±0.53)%、(8.21±0.56)%],两组比较差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论免疫性不孕症患者外周血中CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4的表达水平比正常妊娠的育龄妇女少,CD4+CD25+Treg、Foxp3、CTLA-4表达的降低可能是免疫性不孕的重要原因。

Tim-3靶向CD8^(+)T细胞调控TNF-α/IL-22/STAT3通路加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤

目的探讨T细胞免疫球蛋白和黏蛋白结构域的分子3(Tim-3)对自身免疫性肝炎的影响及其机制。方法将30只小鼠分为3组:空白组、模型组和模型+Tim-3阻断组,每组10只。空白组经尾静脉注射等量生理盐水;其他两组尾静脉注射10 mg/kg刀豆蛋白A建立自身免疫性肝炎小鼠模型,造模成功后模型+Tim-3阻断组每天1次腹腔内注射液0.1 mg/ml Tim-3,注射7 d。HE染色观察小鼠肝组织病理改变;全自动生化分析仪检测血清AST、ALT;酶联免疫吸附法检测IL-22、TNF-α水平;流式细胞分析肝组织CD8^(+)T比例;实时荧光定量PCR检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA相对表达;免疫印迹试验检测肝组织Tim-3、IL-22、TNF-α、STAT3蛋白相对表达。结果空白组小鼠肝脏组织无变化;模型组肝脏组织大面积性肝炎;模型+Tim-3阻断组见显著淋巴细胞浸润与大量空泡。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组ALT、AST、IL-22、TNF-α水平升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组CD8^(+)T细胞比例下降(P<0.05)。与空白组比较,模型组和模型+Tim-3阻断组Tim-3、IL-22、TNFα、STAT3 mRNA及蛋白表达均升高(P<0.05);与模型组相比,模型+Tim-3阻断组Tim-3 mRNA及蛋白表达下降,IL-22、TNF-α、STAT3 mRNA及蛋白相对表达升高(P<0.05)。结论阻断Tim-3可下调CD8^(+)T细胞,促进TNF-α/IL-22/STAT3炎症信号表达,加重自身免疫性肝炎小鼠肝损伤。

支气管哮喘患者外周血CD_~4+ CD_(25)^+调节性T细胞水平及Foxp3 mRNA表达的分析

目的观察支气管哮喘(哮喘)患者外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD2+5调节性T细胞(Treg)水平及叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3)mRNA表达的变化,探讨CD4+CD2+5Treg在哮喘发病中的作用。方法采用流式细胞仪检测78例哮喘患者(急性发作期组30例,慢性持续期组25例,缓解期组23例)和29例健康志愿者(正常对照组)PBMCs中CD4+CD2+5Treg的比例;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测PBMCs中Foxp3mRNA的表达。结果急性发作期组和慢性持续期组PBMCs中CD4+CD2+5Treg的比例及Foxp3mRNA的表达明显低于缓解期组和正常对照组(P<0.05);缓解期组CD4+CD2+5Treg的比例及Foxp3mRNA的表达虽亦低于正常对照组,但差异无统计学意义(P>0.05);急性发作期组CD4+CD2+5Treg的比例及Foxp3mRNA的表达低于慢性持续期组(P<0.05)。结论哮喘患者外周血中具有免疫抑制活性的CD4+CD2+5Treg数量减少,功能下降,可能参与哮喘的发生和发展。

CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞在急性白血病患者外周血的表达

目的初步探讨CD4+CD25+调节性T细胞在急性白血病(AL)患者外周血中的表达及其临床意义。方法流式细胞术分别检测43例AL初诊(A组)、经化疗完全缓解(CR,B组)25例及20例健康志愿者(C组)外周血中CD4+CD25+T细胞所占比例;荧光定量RT-PCR分析各组外周血中叉状头/翅膀状螺旋转录因子(Foxp3) mRNA的表达水平,并逐层分析比较。结果B组CD4+CD25+T细胞比例及Foxp3含量均明显高于A、C组(P<0.01)。A组Foxp3表达明显高于C组(P<0.01)。在AL各亚型之间CD4+CD25+T细胞及Foxp3表达均无显著差异。结论CD4+CD25+调节性T细胞在初治AL或CR患者外周血中比例增加,可能是AL免疫抑制的一个重要原因。

CD4^+CD25^+调节性T细胞及其细胞因子在寻常型银屑病患者的改变

目的探讨寻常型银屑病患者CD4^+CD25^+调节性T细胞及其细胞因子的改变。方法用流氏细胞仪直接免疫荧光法检测寻常型银屑病患者外周血CD4^+CD25^+T细胞的百分率、FoxP3+分子表达、细胞因子白细胞介素(IL)-10、转化生长因子(TGF)-β的表达。结果寻常型银屑病患者CD4^+CD25^+T细胞在进行期组、静止期组、健康对照组结果分别是4.55±1.11、5.26±1.38、6.03±1.96,CD4^+CD25^+FoxP3+T细胞在进行期组、静止期组、健康对照组结果分别是3.85±0.89、4.31±1.26、4.95±1.37。进行期患者明显低于静止期患者和健康对照组(P<0.05);而静止期患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD4^+CD25^+IL-10+细胞、CD4^+CD25^+TGF-β+T细胞在进行期组、静止期组、健康对照组结果分别是11.57±5.64、14.49±8.26、16.35±9.98;2.65±0.97、4.23±1.55、4.83±1.84;进行期患者明显低于静止期患者和健康对照组(P<0.05);而静止期患者与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。CD4^+CD25^+FoxP3+T细胞与PASI呈负相关(r=-0.659,P<0.05);CD4^+CD25^+IL-10+T与PASI呈负相关(r=-0.537,P<0.05);而CD4^+CD25^+TGF-β+T细胞与PASI直线相关(r=-0.184,P>0.05)。结论 CD4^+CD25^+调节性T细胞的比例以及Foxp3的表达、IL-10、TGF-β的表达明显下降,导致调节性T细胞的抑制功能缺陷,进而影响银屑病病情的发展。可以推测,调节性T细胞的数量或功能异常,均将影响银屑病的发病。

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4＋CD25＋调节性T（Treg）细胞表达变化的影响.方法：培养小鼠前胃癌细胞株（MFC）,采用小鼠荷胃癌模型.用褪黑素干预1周后,测量小鼠胸腺、脾质量;并用流式细胞仪检测胸腺、脾Treg细胞;用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测胸腺、脾叉头型转录因子3 （Foxp3）的表达.结果：与正常对照组相比,小鼠胸腺、脾质量各组之间差异无统计学意义.在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠胸腺与脾的Treg细胞均上升,褪黑素干预后降至正常水平;褪黑素还能使小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达下降,脾Foxp3 mRNA反而上调;而小鼠胸腺、脾scurfin蛋白均明显下降.结论：褪黑素能下调荷胃癌小鼠胸腺、脾的CD4＋CD25＋Treg细胞及特异性转录蛋白scurfin及胸腺Foxp3 mRNA,使脾Foxp3 mRNA反而上调.褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中CD4＋CD25＋Treg细胞免疫调节有关.

多发性硬化患者外周血CD4^＋CD25^＋ T细胞变化及其机制探讨

目的探讨多发性硬化(MS)患者外周血CD4+CD25+T细胞数量及叉头样转录因子(FOXP3)表达水平与MS病情的关系。方法选择温州地区MS患者44例(男12例、女32例),均按Poser诊断标准诊断,结合头颅MRI增强扫描排除合并其他神经系统和免疫系统疾病,并统一行EDSS评分;对照组43例(男13例、女30例)为健康查体者。具体方法:流式细胞仪检测外周血CD4+CD25+T细胞数量;免疫磁珠法分离CD4+CD25+T细胞;RT-PCR法检测CD4+CD25+T细胞FOXP3 mRNA表达并进行半定量分析。结果MS患者外周血中CD4+CD25+调节性T细胞数量与对照组比较无明显变化(P>0.05);活化的效应性T细胞数量增加(P<0.05)且活动期增加更为显著(P<0.01)。同一个体疾病活动期外周血CD4+CD25+调节性T细胞数量较非活动期减少(P<0.05)。MS患者外周血中CD4+CD25+T细胞的FOXP3 mRNA表达降低(P<0.05),且活动期降低更明显(P<0.01)。结论此组MS患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞抑制活性降低,FOXP3 mRNA表达减少,活化的效应性T细胞数量增加,且与MS疾病活动性有关。

Notch1通路调控CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)调节性T细胞在肾血管性高血压中的作用

目的 探索Notch1通路调控CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)调节性T细胞(Treg)在肾血管性高血压(RVH)中的作用与机制。方法 选择2019年1月至2022年1月在四川省人民医院肾内科诊治为RVH的患者220例(RVH组),以及同期普通非RVH原发性高血压患者220例(原发性高血压组),另选择健康体检者220人为对照组,经倾向性评分匹配后,每组纳入10例。采用流式细胞术测定外周血单个核细胞(PBMC)中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+) Treg比例、白细胞介素-10(IL-10)、转化生长因子β(TGF-β)和细胞增殖抗原Ki-67水平;采用实时荧光定量PCR测定Notch1、Notch配体δ样配体(DDL)1、DDL4、Jagged1、Jagged4的mRNA水平;采用Western-blot法测定Notch1、hes家族bHLH转录因子(Hes)1、Hes5蛋白水平。结果 与对照组比较,RVH组PBMC中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例降低,TGF-β、Ki-67表达水平明显降低,IL-10表达水平升高(均P<0.001);与RVH组比较,原发性高血压组PBMC中CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg比例升高,TGF-β和Ki-67表达水平升高,IL-10表达水平降低(均P<0.001)。实时定量PCR结果显示,RVH组患者PBMC中Notch受体Notch1 mRNA、DLL1、DLL4、Jagged1和Jagged2 mRNA相对表达量也高于对照组和原发性高血压组(P<0.001)。Western-blot结果显示,患者外周CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg加入Notch1信号通路抑制剂后,Hes1与Hes5表达下降,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg占比和TGF-β表达水平上升(均P<0.001)。结论 Notch1信号通路在CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg调节的RVH中起着免疫调控作用,调节Notch1信号通路可明显促进CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg的增殖和分泌抑炎因子的能力。

MDSC、Th2、FoxP3^(+)Treg及炎症因子与HR-HPV感染宫颈病变的关系研究

目的研究髓系来源抑制性细胞(MDSC)、辅助性T细胞2(Th2)和叉头状转录因子-3调节性T细胞(FoxP3^(+)Treg)水平及炎症因子与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染患者宫颈病变的关系。方法以邢台市人民医院2017年1月至2019年12月收治的180例宫颈病变患者作为研究对象,其中宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CINⅠ组)患者39例,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CINⅡ组)患者31例,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CINⅢ组)患者35例,宫颈癌(UCC组)患者37例,宫颈炎(CC组)患者38例,比较5组患者的MDSC、Th2、FoxP3^(+)Treg细胞水平及炎症因子水平之间的差异,采用Logistic回归对宫颈病程的影响因素进行分析。结果5组患者的MDSC、Th2和FoxP3^(+)Treg细胞水平比较差异有统计学意义(P<0.05);经两两比较,患者的MDSC、Th2和FoxP3^(+)Treg细胞水平从高到低依次为UCC组、CINⅢ级组、CINⅡ级组、CINⅠ级组、CC组,差异有统计学意义(P<0.05)。5组患者的白细胞介素(IL)-2、IL-10、IL-17A、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平比较差异有统计学意义(P<0.05),IL-4、IL-6、γ干扰素水平比较差异无统计学意义(P>0.05);经过两两比较,IL-10、IL-17A、TNF-α水平从高到低依次为UCC组、CINⅢ级组、CINⅡ级组、CINⅠ级组、CC组,差异有统计学意义(P<0.05);IL-2从高到低依次为CINⅠ级组、CC组、CINⅡ级组、UCC组、CINⅢ级组,差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,Th2细胞、MDSC细胞、FoxP3^(+)Treg细胞、IL-10、IL-17A、TNF-α、IL-2是影响宫颈癌恶性病变程度的危险因素(P<0.05)。结论MDSC、Th2和FoxP3^(+)Treg细胞均为造成HR-HPV感染患者宫颈病变的重要影响因素,通过MDSC、Th2和FoxP3^(+)Treg细胞及炎症因子的分析,可能对早期宫颈恶性病变做出预测。

萸连丸对溃疡性结肠炎小鼠脾脏CD4^(+)T细胞BCL-6/Blimp-1,PD-1/PD-L1表达的调节作用

目的:探讨萸连丸对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)小鼠脾脏CD4^(+)T细胞转录因子B细胞淋巴瘤因子6/B细胞诱导成熟蛋白1(BCL-6/Blimp-1),程序性死亡受体-1/程序性死亡受体配体-1(PD-1/PD-L1)表达的调节作用。方法:将40只BALB/c雄性小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、萸连丸500 mg/kg组以及美沙拉嗪300 mg/kg组。除正常对照组小鼠外,其余小鼠采用DSS复制慢性溃疡性结肠炎模型,造模成功后,各组灌胃给予药物或生理盐水,观察小鼠体质量、结肠长度、结肠质量、肠质量指数、结肠黏膜病理形态及病理组织学损伤评分;ELISA法检测结肠组织中白细胞介素-7(IL-7)、IL-9、IL-23含量;流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)Blimp-1^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)及CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平;Western blot法检测结肠组织中BCL-6、Blimp-1蛋白表达。结果:与正常对照组相比,模型对照组结肠组织中IL-7、IL-9、IL-23含量明显升高(P<0.05),小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)、CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平显著升高(P<0.01),CD4^(+)Blimp-1^(+)细胞水平显著降低(P<0.01),BCL-6蛋白表达明显上调(P<0.05),Blimp-1蛋白表达显著下调(P<0.01);与模型对照组相比,萸连丸500 mg/kg组小鼠体质量和结肠长度明显增加、肠质量指数明显降低(P<0.05),结肠组织中IL-7、IL-9、IL-23含量显著降低(P<0.01),小鼠脾脏中CD4^(+)BCL-6^(+)、CD4^(+)PD-1^(+)、CD4^(+)PD-L1^(+)细胞水平明显降低(P<0.05),CD4^(+)Blimp-1^(+)细胞水平明显升高(P<0.05),BCL-6蛋白表达明显下调(P<0.05),Blimp-1蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论:萸连丸可能通过调节小鼠CD4^(+)T细胞表面BCL-6/Blimp-1,PD-1/PD-L1表达水平改善溃疡性结肠炎。

CD8^+调节性T细胞诱导移植免疫耐受的研究进展

免疫耐受是器官移植临床研究的终极目标,是改善移植患者预后生存的关键。调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)在诱导免疫耐受过程中发挥着重要作用,如何诱导供体产生特异性Tregs是诱导免疫耐受突破的关键。尽管近20年来已经证实CD8^+Tregs在移植诱导免疫耐受中发挥重要的作用,但其特性仍然存在很大的争议。本文拟对CD8^+Tregs移植免疫耐受研究进展作一综述,探讨其在诱导肝移植免疫耐受中的潜力。

氧化苦参碱调控CTLA-4和PD-1缓解小鼠类风湿关节炎的作用

目的 观察氧化苦参碱(oxymatrine,OMT)通过免疫负调控机制对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)的缓解作用。方法 将DBA/1J小鼠随机分为正常组、模型组、OMT组和地塞米松组,每组9只。采用胶原和佐剂等体积混合背部皮下多点注射诱导DBA/1J小鼠,构建CIA小鼠模型。OMT组和地塞米松组分别用氧化苦参碱和地塞米松进行腹腔注射,正常组注射同等剂量的生理盐水。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测脾淋巴细胞叉头样转录因子P3(forkhead box protein3,Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白-4(cytotoxic T-lymphocyte-associated protein-4,CTLA-4)和程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1,PD-1)的mRNA表达水平。采用苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)观察关节滑膜组织的异位生发中心。采用免疫组织化学法和Western blot检测Foxp3及CTLA-4和PD-1的表达。结果 OMT可缓解CIA小鼠关节肿胀度并降低其关节评分,增加脾淋巴细胞和关节组织Foxp3及CTLA-4的表达,降低PD-1的表达(P均<0.05),并减少炎性细胞大面积浸润。结论 OMT可能经增加调节性(Foxp3+)T细胞CTLA-4的表达但降低PD-1的表达而缓解RA。

miR-21-5p靶向JAK/STAT信号通路抑制Th1细胞极化

目的探讨miR-21-5p对1型辅助性T细胞(Th1细胞)极化相关信号通路的调控作用。方法提取小鼠脾单个核细胞,用免疫磁珠阴性分选试剂盒分离初始(naive)CD4^(+)T细胞,用抗小鼠CD3ε,CD28和白细胞介素4(IL-4)单克隆抗体及小鼠IL-12和IL-2混合因子诱导体系诱导初始CD4^(+)T细胞向Th1细胞极化,同时转染miR-21-5p模拟物或模拟物对照,分别命名为Th1诱导组、诱导+模拟物对照组和诱导^(+)miR-21-5p模拟物组,72 h后用流式细胞术检测CD4和干扰素γ(IFN-γ)双阳性(CD4^(+)IFN-γ^(+))细胞百分比;用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测Th1细胞极化相关关键转录因子和细胞因子mRNA表达水平;Western印迹法检测Th1细胞极化相关通路关键蛋白及其磷酸化水平。结合双荧光素酶报告系统验证miR-21-5p作用靶标关键细胞因子IFN-γ、信号通路受体IL-12受体β_(1)(IL-12Rβ_(1))和信号转录与转录激活因子1(STAT1)的表达。结果经免疫磁珠分选获得高表达CD62L的初始CD4^(+)T细胞。与Th1诱导组和诱导+模拟物对照组相比,诱导+miR-21-5p模拟物组CD4^(+)IFN-γ^(+)细胞百分比显著降低(P<0.01);Th1细胞极化相关Janus激酶(JAK)/STAT信号通路关键转录因子STAT1(P<0.01)、STAT4(P<0.05)和T盒21转录因子(T-bet)(P<0.01)mRNA表达显著下调,IFN-γ(P<0.01)和IL-12Rβ_(1)(P<0.05)mRNA表达水平亦显著下调,同时STAT1和STAT4蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.01)。结合双荧光素酶报告系统结果表明,miR-21-5p模拟物可分别特异性靶向结合IFN-γ(P<0.01),IL-12Rβ_(1)(P<0.01)和STAT1(P<0.05)基因的3′-非翻译区,而对应靶向位点突变后miR-21-5p模拟物不影响其表达。结论miR-21-5p可靶向下调IFN-γ,IL-12Rβ_(1)和STAT1表达,抑制IL-12和IFN-γ介导的JAK/STAT信号通路活化,从而抑制Th1细胞极化。

核转录因子FOXP3在肺癌组织中的表达及意义

目的:检测核转录因子FOXP3在不同病变肺组织中的表达,分析CD4+CD25+调节性T细胞在不同病变肺组织中的浸润情况,并进一步探讨不同病理类型的肺癌组织中FOXP3表达的异同。方法:使用RT-PCR及W estern b lotting方法,检测21例肺癌、7例支气管扩张、5例炎性假瘤、3例结核球以及15例病灶旁手术切除正常肺组织共153份标本中FOXP3 mRNA及蛋白的表达。结果:肺癌、肺良性病变及病灶旁正常肺组织FOXP3mRNA及蛋白的表达阳性分别为41/63、8/45、0/45(P<0.05),肺癌与肺良性病变组织均有FOXP3 mRNA及蛋白表达,分析其平均吸光度A值之间有显著差异(P<0.01)。病灶旁正常肺组织FOXP3 mRNA及蛋白无表达。不同病理类型肺癌组织中均有FOXP3 mRNA及蛋白的表达,分析其平均吸光度A值之间无显著差异(P>0.05)。结论:FOXP3可作为CD4+CD25+调节性T细胞的一种标志物。肺癌与肺良性病变组织均有FOXP3 mRNA及蛋白表达,FOXP3在肺癌组织中表达强于肺良性病变组织。

miR-149-5p对变应性鼻炎小鼠Notch1表达和Treg/Th17免疫平衡的影响

目的:探讨miR-149-5p对变应性鼻炎(AR)小鼠神经源性位点缺口同系物蛋白1(Notch1)表达和调节性T细胞(Treg)/辅助性T细胞17(Th17)失衡的影响。方法:12只BALB/c小鼠,3只为正常组,余9只小鼠采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝[Al(OH)3]建立AR模型,再随机均分为模型组(仅造模)、miR-149-5p激动剂对照组(鼻内滴注miR-149-5p agomir阴性对照)及miR-149-5p激动剂组(鼻内滴注miR-149-5p agomir);采用行为学评分考察各组各组小鼠过敏症状、苏木精/伊红染色(HE)分析各组小鼠鼻黏膜病理学变化、实时荧光定量PCR(q PCR)检测各组小鼠鼻黏膜组织miR-149-5p,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分析各组小鼠血清免疫球蛋白E(Ig E)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)水平,采用蛋白印迹法检测各组小鼠鼻黏膜组织Notch1、维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)及叉头状螺旋转录因子3(Foxp3)蛋白表达;利用miRDB网站预测miR-149-5p与Notch1 3’-UTR结合位点,构建Notch1 3’-UTR区野生型(WT)和突变型(MUT)荧光素酶报告载体,转染293T细胞,设置NC+Notch1(MUT)组、miR-149-5p agomir+Notch1(MUT)组、NC+Notch1(WT)组及miR-149-5p agomir+Notch1(WT)组,采用双荧光素酶实验分析并计算荧光素酶相对活性。结果:与模型组比较,miR-149-5p激动剂组小鼠行为学评分明显下降,鼻黏膜炎症反应减轻,上皮结构趋于完整,miR-149-5p的表达显著增加,血清中Ig E、IL-6水平下降,IL-10水平升高,Foxp3蛋白的表达增加,Notch1和RORγt蛋白的表达减少(P <0. 05或P <0. 01);miRDB网站预测miR-149-5p与Notch1 3’-UTR存在互补位点,双荧光素酶实验结果显示,miR-149-5p agomir+Notch1(WT)组的荧光素酶相对活性较NC+Notch1(WT)组降低(P <0. 05)。结论:miR-149-5p可能通过靶向Notch1调节Foxp3和RORγt蛋白表达,影响Treg/Th17细胞平衡,从而改善AR小鼠鼻部过敏症状。

缺氧诱导因子-1α及Foxp3在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的检测结直肠癌组织中叉头状螺旋转录因子Foxp3调节性T细胞和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达水平,探讨两者表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系以及联合检测的临床意义。方法收集2014年1月至2015年1月结直肠患者临床资料,应用免疫组织化学染色检测60例结直肠癌组织和癌旁组织中Foxp3和HIF-1α的表达。结果结直肠癌组织中Foxp3的阳性表达率68.3%(41/60)明显高于癌旁组织阳性表达率21.7%(13/60),两者差异有统计学意义(P<0.01),且Foxp3表达水平与肿瘤的分期、浸润深度和淋巴结转移有相关性(P<0.05);结直肠癌组织中HIF-1α的阳性表达率63.3%(38/60)明显高于癌旁组织阳性表达率18.3%(11/60),两者差异有统计学意义(P<0.01),且HIF-1α表达水平与肿瘤的分期、分化程度和淋巴结转移有相关性(P<0.05)。结直肠癌组织中Foxp3和HIF-1α的表达呈显著正相关性(r值0.409、P<0.01)。结论联合检测Foxp3和HIF-1α在结直肠癌组织中的表达,有助于判断结直肠癌转移潜能及评估结直肠癌患者的预后。

Runx3对银屑病患者Th1/Th2细胞平衡的影响及其作用机制

目的检测Runx3在银屑病患者和健康人外周血CD4^+T细胞中转录水平的表达,分析其对Th1/Th2细胞平衡的影响及在银屑病发病中可能的作用机制。方法选取40例银屑病患者(银屑病组)和35例健康人(健康对照组),应用密度梯度离心法分离其外周血CD4^+T细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测Runx3转录水平的表达。将体外培养的银屑病患者的CD4^+T细胞随机分为空白对照组(未经任何处理组)、阴性对照组(对照siRNA转染组)和Runx3 siRNA组(Runx3 siRNA转染组)。采用Western blot检测沉默效果,流式细胞仪分析Th1、Th2细胞数目,酶联免疫吸附试验检测Th1和Th2细胞相关特异性分泌因子的表达水平,同时采用qRT-PCR和Western blot检测Runx3对Th1/Th2细胞转录因子表达的影响。结果银屑病组患者CD4^+T细胞Runx3 mRNA的表达水平显著高于健康对照组(P<0.01)。与阴性对照组比较,Runx3 siRNA组银屑病患者CD4^+T细胞中Runx3蛋白表达水平下降(P<0.01),同时Th1细胞数目下降(P<0.05),而Th2细胞数目上调(P<0.05),且Th1/Th2细胞比值显著降低(P<0.05);白细胞介素-2(IL-2)、干扰素-γ(IFN-γ)表达水平显著下降(P<0.01),IL-4、IL-10表达水平显著升高(P<0.05);Th1型特异性转录因子T-bet的表达显著降低(0.73±0.06 vs 0.96±0.17)(P<0.01),同时Th2型特异性转录因子GATA3的表达显著升高(1.27±0.11 vs 1.01±0.14)(P<0.05)。结论 Runx3在银屑病患者外周血CD4^+T细胞中表达上调,并且可能通过调控Th1/Th2细胞相关特异性转录因子的表达引发Th细胞失衡,从而参与银屑病的病理发病进程。

COPD患者肺组织悬液DC细胞、CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞介导的免疫应答水平分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)患者树突细胞(dendritic cell,DC)、CD4^(+)叉头状转录因子-3(forkhead transcription facter3,Foxp3)T细胞介导的免疫应答变化及其临床转归。方法以2019年1月至2020年12月沧州市人民医院收治的120例COPD患者作为观察组,COPD稳定期患者78例,加重期患者42例,同时挑选我院健康体检的120例正常志愿者为对照组。采用流式细胞仪检测患者的非组织悬液中的CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平,分别对比分析观察组与对照组、稳定期组与加重期组、生存组与死亡组患者的CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平。通过线性相关分析CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平与患者生存情况以及严重程度的相关性。通过ROC曲线分析CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平对于不良预后的预测效能。结果与对照组相比,观察组患者的CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平更低,差异均具有统计学意义[%:(2.32±0.36)比(1.45±0.25),(4.09±1.02)比(2.15±0.78),t值分别为21.74和16.55,P值均<0.05]。与加重期患者相比,稳定期患者的CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC水平更高,差异具有统计学意义[%:(0.26±0.08)比(2.09±0.85),(1.41±0.52)比(2.55±0.96),t值分别为18.86和8.44,P值均<0.05]。与死亡组相比,生存组患者的CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平更高,差异具有统计学意义[%:(0.37±0.12)比(2.01±0.77),(1.88±0.28)比(2.29±0.56),t值分别为20.07和4.94,P值均<0.05]。通过线性相关性分析,患者的严重程度与生存情况与CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平呈现负相关(r=-0.37,-0.46,-0.46,-0.59,P值均<0.05)。ROC曲线分析表明CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞以及成熟DC细胞水平对于不良预后具有预测效能(P<0.05)。结论COPD患者DC细胞、CD4^(+)Foxp3^(+)T细胞与疾病的进展以及患者的预后呈现相关性。

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白对类风湿关节炎患者外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞亚群的调节作用

目的观察活动期类风湿关节炎（RA）患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞数量和比例的变化，探讨重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白（TNFRⅡ-FC）对调节性T细胞亚群的调节作用。方法①选择40例活动期中重度RA患者，按随机、双盲、平行、安慰剂对照的原则分为TNFRⅡ-Fc＋甲氨蝶呤联合治疗组和甲氨蝶呤对照治疗组，共治疗12周，采用流式细胞术分析并比较2组患者治疗前后外周血CD4^＋D25^＋FOXP3^＋调节性T细胞的表达比例，并同期选择40名健康体检者作平行比较。②比较2组患者治疗不同时期疼痛视觉模拟评分法（VAS）、28个关节疾病活动指数（DAS28）、健康评估问卷（HAQ）平均分。计量资料组间比较采用配对t检验。结果①活动期RA患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例显著低于健康对照组[（5．4±1．4）％与（7．5±1．5）％，P〈0．01]；TNFRⅡ-Fc^＋甲氨蝶呤联合治疗12周后，CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例显著高于治疗前[（7．0±1．2）％与（5．2±1．6）％，P〈0．01]。联合治疗组CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋细胞比例增高的幅度显著高于甲氨蝶呤治疗组[（7．0±1．2）％与（5．6±0．7）％，P〈0．01]。②治疗12周后，联合治疗组VAS评分、DAS28评分、HAQ平均分均优于甲氨蝶呤组，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TNFRⅡ-Fc联合甲氨蝶呤治疗的疗效优于单纯甲氨蝶呤治疗，TNFRⅡ-Fc可提高活动期RA患者血中CD4^＋D25^＋调节性T细胞比例，可能是其治疗RA的一个重要机制。