丹参注射液对哮喘大鼠气道炎症及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的观察丹参注射液对支气管哮喘(哮喘)大鼠气道炎症和CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)的影响,探讨丹参注射液治疗哮喘的新机制。方法30只Wistar大鼠随机分成正常对照组、哮喘组、丹参治疗组。计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数并分类,应用苏木精-伊红染色行肺组织病理学检查,流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMCs)中CD4+CD25+Tr的比例。结果丹参治疗组BALF细胞总数及淋巴细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞(Eos)百分率较哮喘组均明显减少(P<0.05,P<0.01),与正常对照组比较差异无显著性意义(均P>0.05)。病理组织学显示:丹参治疗组较哮喘组肺组织炎性细胞浸润明显减少。哮喘组PBMCs中CD4+CD25+Tr的比例较正常对照组明显减少(P<0.05),丹参治疗组CD4+CD25+Tr的比例较哮喘组明显增加(P<0.05)。结论丹参注射液可减轻哮喘大鼠气道炎症反应,其机制可能与促进CD4+CD25+Tr的产生有关。

猪瘟病毒感染猪外周血白细胞凋亡及CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞亚群的变化

为了解猪瘟病毒(CSFV)石门株强毒感染对免疫细胞的影响以及免疫细胞的变化动力学,用流式细胞仪对人工感染猪的白细胞凋亡以及CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的动态变化规律进行了检测。结果表明,攻毒后CD4+和CD8+T淋巴细胞比例急剧下降,CD4+T淋巴细胞比例在攻毒后第4 d和第7 d分别由攻毒前的26.87%下降到8.83%和13.86%,CD8+T淋巴细胞比例由攻毒前的28.17%分别下降到14.19%和17.55%。外周血白细胞凋亡的检测结果显示,发病初期感染组凋亡细胞和早期凋亡细胞均显著高于对照组,表明CSFV诱导细胞凋亡是导致免疫细胞减少和免疫抑制的主要原因。

肾移植术后监测CD4^＋T淋巴细胞对防治巨细胞病毒肺炎的临床意义

目的探讨监测CD4+T淋巴细胞对防治肾移植术后巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)肺炎的临床意义。方法2005年1月至2008年3月,监测133例肾移植术后受者外周血CD4+细胞计数的动态变化,根据其变化调整免疫抑制剂(CsA/FK506+MMF+Pred)的用量,观察调整用药对CMV肺炎发病的影响。结果共有36例受者CD4+细胞明显下降,发生在术后45～72(61.5±9.3)d,均给予减少或停用免疫抑制剂处理。133例受者有12例出现CMV肺炎,发病在术后58～118(76.2±11.6)d,其中7例伴有急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。CD4+细胞下降受者CMV肺炎的发病率(27.8%,10/36)明显高于CD4+细胞稳定受者(2.1%,2/97)(P<0.01),在调整用药期间有2例发生急性排斥反应,发生率无明显增加(P>0.05)。12例CMV肺炎病人8例(66.7%,8/12)治愈,4例(33.3%,4/12)死亡。24例未发病受者在调整用药后CD4+细胞迅速上升,在14d恢复到术前水平;8例CMV肺炎治愈者上升较缓慢,在21d恢复;而4例死亡病人持续保持在低水平。结论肾移植术后CD4+细胞的变化与CMV肺炎发病有密切相关性,依据其变化在CMV肺炎发病之前减少或停用免疫抑制剂是安全的,为预防和救治CMV肺炎提供一条新的方法。

外周血CD4^＋T细胞的ATP含量与肝移植后早期感染的相关性

目的探讨CD4+T细胞的ATP含量与肝移植术后早期(术后1个月内)感染的相关性。方法采集85例肝移植患者、60名健康志愿者(对照组)的全血标本,术前、术后1、2、4周及感染当日和经治疗后体温正常3d各1份;用Immu-KnowTM免疫细胞功能测定试剂盒检测CD4+T细胞的ATP值。结果感染组ATP值在术前较低,术后第1周达到低谷,显著低于同期非感染组(P<0.01)。经ROC曲线分析,术后第1周的低ATP值对诊断肝移植术后感染具有较好的敏感度和特异度;当截断值为161μg/L时,其诊断感染的敏感度为85%,特异度为91%。感染当日的ATP含量降低与感染具有良好的相关性,经抗感染治疗体温正常3d后,其ATP值较感染当日明显升高(P<0.01)。结论肝移植术后早期CD4+T细胞的ATP值动态变化与肝移植术后感染具有良好的相关性,监测肝移植术后患者该指标对评估其免疫状态、预防和诊治感染具有一定价值。

炎症性肠病患者外周血CD4^＋CD25^＋Treg细胞及其特异标志物Foxp3表达水平的研究

目的:通过检测炎症性肠病(IBD)不同病期患者以及对照组外周血CD4+CD25+Treg及其特异标志物Foxp3的表达,来分析与IBD疾病活动性关系,探讨CD4+CD25+Treg和Foxp3在IBD发病机制中的作用。方法:52例IBD患者和35例正常对照组分别应用流式细胞术和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血中CD4+CD25+T细胞亚群的百分率测定和外周血单个核细胞Foxp3mRNA的表达水平。结果:IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞比例明显低于疾病缓解期患者和正常对照组(P<0.01);活动期IBD患者中使用激素和/或免疫抑制剂与未使用激素和/或免疫抑制剂结果差异有统计学意义;IBD患者外周血单个核细胞(PBMC)中Foxp3 mRNA表达水平低于缓解期和正常人,差异有显著性(P<0.05);缓解期Foxp3 mRNA水平与正常人差异无显著性(P>0.05);IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞表达率及PBMC中的Foxp3 mR-NA表达水平与疾病活动指数评分呈负相关性。结论:活动期IBD患者外周血CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3 mRNA表达下调,而恢复期其表达回升,且二者呈正相关,并与临床活动评分呈负相关,因此认为CD4+CD25+Treg细胞和Foxp3可能参与疾病的发生发展,与疾病的活动性密切相关。

中药灌肠1号对小鼠结肠炎CD4^＋CD25^＋免疫作用的研究

目的:探讨CD4^+CD25^+调节性T细胞(Tregs)在2,4-二硝基氯苯(DNCB)和醋酸(AA)复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎中的变化规律及中药灌肠1号治疗的作用机制。方法:建立DNCB+AA复合法诱发的小鼠溃疡性结肠炎模型,设立正常对照、模型对照、柳氮磺氨吡啶(SASP)和中药灌肠1号治疗共4组,用流式细胞仪检测各组外周血、肠系膜淋巴结CD4^+CD25^+Tregs细胞的变化以及结肠组织病理学改变。结果:建模后1～2周,模型组外周血和肠系膜淋巴结的CD4^+CD25^+Tregs细胞数量较正常组明显下降,而使用SASP和中药灌肠Ⅰ号治疗后该细胞亚群明显高于模型组。结论:具有较强免疫抑制作用的CD4^+CD25^+Tregs细胞亚群在小鼠实验性溃疡性结肠炎的发病及病情转归中可能具有重要免疫调节作用,中药灌肠1号通过调节Tregs细胞的数量对溃疡性结肠炎发挥治疗作用。

芒果苷对慢性支气管炎大鼠CD4^＋T淋巴细胞的影响

本研究旨在探讨芒果苷对香烟烟熏诱导慢性支气管炎大鼠CD4+T淋巴细胞比例及其产生淋巴因子白细胞介素2(IL-2)、白细胞介素4(IL-4)的影响。大鼠随机分为正常组、模型组与芒果苷200、100 mg/(kg·d)组,香烟烟熏6周建立慢性支气管炎大鼠模型,随后灌胃给药4周。以流式细胞术检测CD4+T淋巴细胞比例;流式分选获得CD4+T淋巴细胞,酶联免疫吸附法(ELISA)测定其IL-2、IL-4水平,实时荧光RT-PCR检测其IL-2、IL-4基因表达;HE染色检测支气管炎症病理形态。实验结果显示,与模型组比较,芒果苷组CD4+T淋巴细胞比例明显降低,IL-2、IL-4基因与蛋白表达水平显著下调,慢性支气管炎症显著减轻。该结果提示,芒果苷可下调CD4+T淋巴细胞比例并减少淋巴因子IL-2、IL-4的产生,此作用可能与其减轻慢性支气管炎症有关。

日本血吸虫感染诱导产生的CD4^＋CD25^＋调节性T细胞免疫抑制功能的观察

目的观察日本血吸虫感染小鼠CD4+CD25+T细胞的免疫抑制功能及特征。方法日本血吸虫尾蚴(10±2条)感染BALB/c小鼠,在感染后6周(急性期,10只)和13周(慢性期,10只)取脾脏,制成脾单个核细胞,用免疫磁珠分选出CD4+CD25+T细胞。体外实验,将急性期和慢性期来源的CD4+CD25+T细胞与CD4+CD25-T细胞共培养,3H-TdR掺入法检测细胞增殖情况,ELISA检测细胞培养上清中的细胞因子。体内实验,将CD4+CD25+T细胞被动转移到日本血吸虫辐照致弱尾蚴免疫的小鼠体内,2周后剖杀取脾,用流式细胞仪检测脾组织中白细胞介素4+(IL-4+)、IL-10+和干扰素γ+(IFN-γ+)CD4+T细胞比例,ELISA检测血清抗辐照致弱尾蚴抗原IgG1和IgG2a水平。结果体外实验显示,在血吸虫虫卵可溶性抗原(SEA)刺激下,与单纯CD4+CD25-T细胞培养组(脉冲指数即cpm值为7615±1058)相比,CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T细胞增殖具明显的抑制作用(P<0.01),并且感染慢性期来源的CD4+CD25+T细胞抑制作用(cpm值为2336±490)强于急性期来源的CD4+CD25+T细胞(cpm值为4467±144)(P<0.05);并对IL-4、IFN-γ和IL-2等细胞因子分泌也具有抑制作用,其中急性期来源的CD4+CD25+T细胞对各细胞因子的抑制率分别为32.0%(P<0.05)、66.3%(P<0.01)和63.2%(P<0.01);慢性期来源的CD4+CD25+T细胞对各细胞因子的抑制率分别为28.4%(P<0.05)、60.1%(P<0.01)和58.3%(P<0.01)。体内实验显示,在辐照致弱尾蚴诱导的免疫应答中,转移慢性期血吸虫感染小鼠的CD4+CD25+T细胞对IFN-γ和IgG2a抗体的产生明显抑制作用(P<0.05)。结论日本血吸虫感染诱导的CD4+CD25+T细胞具明显免疫抑制作用,并呈现优势抑制Th1应答的特征。

湿疹患者外周血CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋调节性T细胞和血清IL-4，IL-10，TGF—β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg，CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析，探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry，FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4，IL-10，TGF-β水平进行检测，同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86±1.69，明显低于对照组6．10±2．21；血清IL-4（96．21±20．07pg／ml），IL-10（12．6±1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93±13．10，9．82±1．34pg／ml；TGF-β 15．76±3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39±4．44ng／ml），各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01），患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节，Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用，是湿疹发病和慢性化的重要原因，加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害，提高疗效具有重要临床意义。

呼吸道合胞病毒对哮喘小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的探讨 RSV 感染诱导哮喘发作的新的免疫机制。方法选用40只清洁级 Balb/c 小鼠,随机分组。分别采用不同的方法制备哮喘组(OVA)、哮喘合并 RSV 感染组(OVA/RSV)、单纯 RSV 感染组(RSV)及对照组(NS)动物模型。所有小鼠于末次激发后24 h 取右肺中叶标本作病理切片,观察炎症改变;部分通过mRNA 原位杂交鉴定肺部 RSV 感染情况;同时收集外周抗凝血,通过流式细胞仪分析及酶联免疫吸附试验(ELISA)测定 CD4^+CD25^+调节性 T 细胞占 CD4^+T 细胞的百分比和血浆中 IL-10和 TGF-β_1水平。结果①OVA、RSV 组外周血 CD4^+CD25^+调节性 T 细胞百分率明显降低(P<0.01),OVA/RSV 组降低更加明显。②与 NS 组相比,IL-10水平在 OVA 组明显降低(P<0.005),RSV 组无明显变化(P=0.65),OVA/RSV 组则明显升高(P<0.005)。③TGF-β_1水平在 OVA 组较对照组明显降低(P<0.01),OVA/RSV 组降低更加明显。④各组外周血CD4^+CD25^+调节性 T 细胞百分率与 IL-10、TGF-β_1无相关性(P>0.005)。结论①哮喘小鼠体内 CD4^+CD25^+调节性 T 细胞和 IL-10、TGF-β_1数量和分泌水平降低,可能是导致哮喘发生的原因之一。②在哮喘基础上合并 RSV感染可进一步减少 CD4^+CD25^+调节性 T 细胞数量和 TGF-β_1分泌水平,可能是病毒感染诱发和加重哮喘的原因之一。③外周血中 CD4^+CD25^+调节性 T 细胞仅部分由 IL-10、TGF-β诱导产生,其相互间的变化水平是综合因素影响的结果。[临床儿科杂志,2008,26(10):885-889]

肝癌微环境中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与T细胞免疫的关系

目的了解肝细胞癌组织CD4+CD25+调节性T细胞(以下简写Treg)与肿瘤微环境T细胞免疫的关系。方法对52例肝癌组织和癌旁组织用CD4、CD25双重酶标免疫组化染色和用CD8En Vision法染色,对癌组织中Treg细胞和CD4+T、CD8+T、CD4+T/CD8+T比值进行相关性分析。结果肝癌以及癌旁组织中Treg细胞单个高倍视野平均数分别为7.6308±2.8368、5.1654±1.6718;两组比较有显著差异,P=0.000;肝癌组织中Treg细胞的数量与其浸润性CD4+T淋巴细胞的数量以及CD4+T/CD8+T比值呈显著负相关,r=-0.538,P=0.014;r=-0.545,P=0.000,而与浸润性CD8+T淋巴细胞的数量分布无明显相关性,r=-0.403,P=0.078。结论Treg在肝癌微环境中可能通过细胞接触的方式抑制CD4+T淋巴细胞的增殖来抑制肿瘤局部免疫,使肿瘤细胞逃避免疫监视。因此除去或减少肝癌微环境中的Treg细胞有利于提高肿瘤的免疫治疗效果。

结核抗原特异性CD4^＋中央型记忆T细胞的检测及分布特性研究

目的比较活动期肺结核患者和纯蛋白衍生物(purified protein derivative,PPD)试验阳性健康人记忆T细胞的产生和分布特性。方法取乙二胺四乙酸(ethylene diaminete traacetic acid,EDTA)抗凝静脉血,Ficoll进行密度梯度离心获取PBMCs。采用卡介苗刺激后,通过CD4、CD154、CCR7、CD45RA4种抗体共染色,用流式细胞仪检测结核抗原特异性CD4+记忆T细胞。结果以CD4+CD154+双阳性区设门,研究结核抗原特异性CD4+记忆T细胞,结果显示,肺结核患者CD4+CD154+CD45RA-CCR7+中央型T淋巴细胞亚群分布频率显著降低(P<0.05),CD4+CD154+CD45RA+CCR7+初始T细胞亚群的比例明显增高(P<0.05)。结论肺结核患者CD4+中央型记忆T淋巴细胞亚群的产生存在异常,可能与免疫功能低下和结核病发病密切相关。

CD4^＋CD25^＋CD127^low识别人外周血CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的优势

目的:探索可用于检测人外周血中CD4+CD25+Treg细胞的最佳标记物。方法:以52名健康人和47名非血液系统肿瘤患者为研究对象,采用多色免疫荧光素标记和多参数流式细胞术同时检测外周血中CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞,并以经典指标CD4+CD25high和CD4+CD25+FoxP3+为标准,分析和比较CD4+CD25+CD127low作为识别CD4+CD25+Treg细胞的可行性及其优势。结果:健康人和肿瘤患者外周血CD4+CD25high、CD4+CD25+FoxP3+和CD4+CD25+CD127lowT细胞占CD4+T细胞百分比分别为(1.769±0.682)和(2.958±1.392);(2.905±1.772)和(5.128±2.227)以及(5.396±1.306)和(7.175±2.565)。三者呈相同的趋势,即肿瘤患者组>健康人组,且三者之间呈显著正相关(P<0.05)。用两种不同标记法高纯度分选CD4+CD25high和CD4+CD25+CD127lowT细胞群后,FoxP3阳性率分别为90.9和92.7。结论:CD4+CD25+CD127low三标记法可以帮助识别CD4+CD25+Treg和部分激活的CD4+T细胞,提高CD4+CD25+Treg细胞的可检出数量,并且不影响细胞活性度,是反映CD4+CD25+Treg细胞更理想的指标。

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的：研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4＋CD25＋调节性T（Treg）细胞表达变化的影响.方法：培养小鼠前胃癌细胞株（MFC）,采用小鼠荷胃癌模型.用褪黑素干预1周后,测量小鼠胸腺、脾质量;并用流式细胞仪检测胸腺、脾Treg细胞;用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测胸腺、脾叉头型转录因子3 （Foxp3）的表达.结果：与正常对照组相比,小鼠胸腺、脾质量各组之间差异无统计学意义.在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠胸腺与脾的Treg细胞均上升,褪黑素干预后降至正常水平;褪黑素还能使小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达下降,脾Foxp3 mRNA反而上调;而小鼠胸腺、脾scurfin蛋白均明显下降.结论：褪黑素能下调荷胃癌小鼠胸腺、脾的CD4＋CD25＋Treg细胞及特异性转录蛋白scurfin及胸腺Foxp3 mRNA,使脾Foxp3 mRNA反而上调.褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中CD4＋CD25＋Treg细胞免疫调节有关.

CD4^＋CD8^＋在肺气虚证大鼠肺和皮肤中的表达及其生物学意义

研究CD4、CD8在肺气虚证大鼠肺和皮肤中的表达,旨在探讨"肺主皮毛"的免疫学基础。采用气熏法制造肺气虚证模型,实验设为模型组和正常对照组。采用S-P免疫组化方法检测皮肤和肺组织中CD4和CD8的表达。结果表明肺气虚证大鼠肺脏和皮肤CD8+细胞均升高(P<0.05);皮肤CD4+细胞发生迁移,但数量没有变化(P>0.05),肺CD4+细胞数量没有变化,二者免疫功能均下降,从免疫学角度证实肺主皮毛理论具有一致性。

脓毒症患者CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和Thl7细胞检测的临床意义

目的探讨脓毒症患者外周血辅助性T细胞（THelper，Th）17及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（Treg细胞）表达的变化和检测的临床意义。方法将2008—01—2010—11在我医院ICU住院的脓毒症患者40例按照疾病严重程度分为三组：脓毒症组14例、严重脓毒症组15例和脓毒症休克组11例。再将脓毒症患者根据28d预后分为死亡组（D，n＝11）和存活组（S．n=29）。所有人选的40例脓毒症患者在入选当天行流式细胞术检测血中Thl7细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例。比较脓毒症组、严重脓毒症组和脓毒症休克组患者血中Thl7细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的比例变化，以及生存组和死亡组上述指标的差异。分析CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和Thl7细胞免疫平衡紊乱与病情严重程度的关系。同时选取20例健康人为对照组。结果健康对照组Thl7细胞表达率为（0．91±0．38）％，CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率为（0．39±0．23）％；脓毒症患者较正常对照组这两项指标明显升高，差异有统计学意义（P〈0．05）。其中脓毒症组分别为（2．09±0．53）％和（1．72±0．59）％；严重脓毒症组为（3．90±0．80）％和（2．72±0．22）％；脓毒性休克组为（1．85±0．35）％和（3.55±0．51）％。Thl7表达率严重脓毒症组最高，与其他两组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。而脓毒症休克组与脓毒症组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率脓毒症休克组最高，严重脓毒症组次之，脓毒症组最低，三组间两两比较差异有统计学意义（P〈0．05）。死亡组血中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达率明显高于存活组[（3．03±0．91）％和（2．43±0．79）％，P〈0．05]，Thl7细胞表达率明显低于存活组[（2．01±0．66）％和（2．97±1．15）％，P〈0．05]。结论Thl7细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞在脓毒症的免疫发病机制中可能起着重要作用。检测脓毒症患者外周血．thl7细胞和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞能够反映机体的细胞免疫状态，对评估患者预后有重要临床价值。

白三烯受体拮抗剂对哮喘气道重塑及Th17细胞／CD4^＋CD25^＋调节性T细胞表达的影响

支气管哮喘的气道重塑是气道炎症反复作用的结果,白三烯是气道重塑中的重要炎症介质之一。影响气道重塑的因素较多,近年来Th17细胞和CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+treg细胞)在气道重塑中的作用日益受到重视。白三烯受体拮抗剂是治疗哮喘的有效药物,能在一定程度上抑制气道重塑,但其作用机制及对Th17细胞/CD4+CD25+treg细胞表达的影响机制尚不十分清楚。因此,阐明Th17细胞/CD4+CD25+treg细胞平衡在气道重塑中的表达变化、白三烯受体拮抗剂干预气道重塑的具体作用途径和生物效应及对Th17细胞/CD4+CD25+treg细胞表达的影响,将为以后哮喘患儿的预防和治疗提供新的靶点。