荧光染料R-藻红蛋白标记小鼠抗人CD4单克隆抗体

以R-藻红蛋白(R-PE)标记小鼠抗人CD4单克隆抗体,形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4单抗,用DTT使经SPDP活化后的R-PE巯基化,再与用SMCC活化的CD4单抗交联。使用NEM终止交联反应,经Sephacryl S-300柱在AKTA FPLC快速液相色谱系统(简称AKTA)监测下分离纯化。结果用R-PE标记的抗CD4单抗,检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原的表达,经流式细胞仪(简称FACS)分析表明,R-PE标记的CD4抗体特异性保持完好,荧光强度较高,还可与用FITC标记的其它CD系列单抗配伍成双标或多标试剂。使用SPDP,SMCC异双功能交联试剂和DTT还原剂,成功地偶联了R-藻红蛋白和CD4单克隆抗体,可应用于流式细胞仪检测分析。

抗CD_4单克隆抗体可变区基因克隆及测序

目的 获取抗CD4 单克隆抗体 (McAb)可变区基因 ,为构建抗CD4 嵌合抗体打下基础。方法 从分泌抗人CD4 McAb的杂交瘤细胞系中提取总RNA ,用家族特异性引物进行逆转录多聚酶链反应 (RT -PCR) ,分别扩增出重链可变区 (VH)基因及轻链可变区 (VL)基因。将PCR产物克隆至pGEM -T载体 ,然后转化JM10 9细菌。并用全自动DNA序列分析仪对VH及VL基因序列进行测定。结果 VH基因为 3 5 1bp ,编码 117aa残基 ;VL基因为 3 3 3bp ,编码 111aa残基。根据Kabat分类体系 ,VH隶属小鼠免疫球蛋白 (Ig)重链Ⅱ (A)亚组 ,VL隶属小鼠Igκ链Ⅲ亚组。结论 从推导出的氨基酸序列证实 ,所获取的VH和VL序列均符合小鼠Ig可变区的氨基酸序列特征。

R-藻红蛋白荧光标记小鼠抗人CD4/CD8单克隆抗体

R-藻红蛋白(R-PE)是一种新型荧光标记探针,具有优良的荧光特征。本实验采用异双功能交联试剂SPDP和SMCC分别活化R-PE和CD4/CD8单克隆抗体,再将活化后的R-PE和CD4/CD8单克隆抗体以一定比例混合,使之发生交联反应,交联产物经SephacrylS-300柱分离纯化。结果显示:用R-PE标记的抗CD4/CD8单抗,经流式细胞仪(简称FACS)分析可以检测正常人外周血淋巴细胞表面CD4抗原和CD8抗原的表达,且R-PE标记的抗CD4/CD8单抗特异性保持完好,荧光强度较高,可以形成单色或和用其他荧光染料标记的CD系列单抗组成双色、多色的荧光试剂,应用于流式细胞仪检测分析。

单克隆抗体CD_4、CD_8联合环孢霉素A治疗急性再障的疗效观察

目的观察单克隆抗体CD4、CD8联合环孢霉素A治疗急性再障的临床效果。方法选择急性再障患者48例,用单克隆抗体CD4、CD8联合环孢霉素A治疗12个月,随访5年。结果治疗12个月时48例急性再障中,基本治愈24例,占50%;临床缓解10例,占21%;明显进步4例,占8.3%;无效4例,占8.3%;死亡6例,占12.5%;总有效率79%,5年有效率75%。不良反应少而轻微,未发生糖尿病和血清病反应。结论单克隆抗体CD4、CD8联合环孢霉素A治疗急性再障是一种安全、有效、依从性好的治疗急性再障方案,尤其适合无层流病房的基层医院。

抗CD4抗体可增强恩夫韦地抗HIV-1的效果

据Medscape．com7月7日报道（原载Antimicrob Agent Chemother2006：50：2231—2233），体外实验发现人源化抗CD4单克隆抗体TNX-355可增强融合抑制剂恩夫韦地（T-20）阻断HIV-1病毒进入靶细胞的作用。

抗CD4单抗-表阿霉素在体外和体内对T源性淋巴瘤的作用

目的:探讨抗CD4单克隆抗体免疫结合物对T源性淋巴瘤细胞的特异性杀伤效应。方法:采用低分子右旋糖苷(DextranT10)作联接桥,将表阿霉素分子偶联到抗CD4单抗上,制备成抗CD4单抗免疫结合物,在体外和体内,经补体非依赖性细胞毒试验、免疫组化试验、CFU-GM集落形成试验、125I-单抗结合物裸鼠体内示踪等方法测定抗CD4免疫结合物对T-源性淋巴瘤细胞的亲合力和特异性杀伤效应。结果:抗CD4-表阿霉素免疫结合物对T源性淋巴瘤细胞(CEM)有较强亲合力和特异性杀伤力(79%),ECT扫描发现125I-抗CD4结合物主要富集在含CEM细胞的实体瘤内。结论:125I-抗CD4单抗标志物和抗CD4-表阿霉素结合物可用于诊断和治疗T-源性淋巴瘤。

抗CD3单克隆抗体对支气管哮喘患者CD4^+CD25^+ T细胞凋亡和自噬的影响

目的探讨抗CD3单克隆抗体对分离培养的支气管哮喘(简称哮喘)患者外周血CD4+CD25+T细胞凋亡和自噬及其分泌的代表性因子转化生长因子β(TGF-β)的影响。方法采用密度梯度离心法及尼龙棉柱法分离32例哮喘患者(哮喘组)及30名健康者(对照组)外周血T细胞,磁性细胞分离器分离得到CD4+CD25+T细胞,分别利用电镜及流式细胞仪观察、检测抗CD3单克隆抗体干预72h的细胞凋亡率、自噬率,用ELISA法检测细胞培养上清液中细胞因子TGF-β的水平。结果抗CD3单克隆抗体干预72h后两组外周血CD4+CD25+ T细胞凋亡率、自噬率及TGF-β均增加(P值均<0.01),但哮喘组凋亡率、自噬率均低于健康对照组(P值均<0.01);两组间TGF-β水平无显著差异(P>0.01)。哮喘组外周血CD4+CD25+ T调节细胞在CD3单克隆抗体的干预下自噬与TGF-β的分泌呈显著负相关(r=-0.38,P<0.01)。结论抗CD3单克隆抗体可促进CD4+CD25+ T细胞凋亡和自噬及TGF-β分泌。

抗CD4人-鼠嵌合抗体的表达和抗增殖效应

目的 制备抗CD4人 鼠嵌合抗体。方法 从分泌抗CD4单克隆抗体的杂交瘤细胞中提取总RNA ,通过RT PCR扩增出VH 和VL 的DNA片段 ,对VH 和VL 进行DNA序列测定和分析 ,证实VH 和VL 具有小鼠Ig可变区完整的结构功能后 ,将VH 亚克隆至重链表达载体pγ1 Expr,VL 亚克隆至轻链表达载体pκ Expr,转化XL2 Blue细菌 ,通过菌落或质粒PCR筛选阳性克隆。通过电转染将VH pγ1、VL pκ共转染至小鼠骨髓瘤细胞X6 3Ag8.6 5 3,通过G418筛选、ELISA和免疫荧光鉴定。结果 得到分泌抗CD4人 鼠嵌合抗体的阳性转染瘤细胞克隆。所得到的嵌合抗体在体外对PHA和IL 2诱导的PBMC增殖具有抑制作用。结论 人 鼠嵌合抗体得到成功表达 。

抗CD4单抗诱导免疫耐受防治自身免疫性心肌炎的研究

目的探讨体内注射CD4单克隆抗体诱导大鼠对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受及这种免疫耐受对自身免疫性心肌炎大鼠的治疗作用。方法分别于第0、7天给予Lewis大鼠体内注射猪心肌肌凝蛋白诱导自身免疫性心肌炎的产生。分别于第-2、-1、0、1天注射CD4单克隆抗体诱导免疫耐受。初次免疫后18d，检测免疫耐受的诱导情况及其对心肌炎大鼠的作用。结果同非治疗组鼠相比较，抗体治疗组鼠心功能明显改善；没有明显的心肌变性、坏死、炎症细胞浸润及纤维化；抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显下降；血清抗心肌肌凝蛋白自身抗体明显降低；血清TH1细胞因子IFN-γ、IL-2的水平显著下调；TH2细胞因子IL-6、IL-10的水平没有改变或者被上调。结论CD4单抗能够诱导机体对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受，通过免疫耐受的诱导阻止了自身免疫性心肌炎大鼠心功能的紊乱和心肌的损伤。