白芍总苷胶囊联合注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白治疗幼年特发性关节炎23例及对T淋巴细胞免疫、Th1/Th2漂移及红细胞沉降率的影响

目的分析白芍总苷胶囊联合注射用重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc,益赛普)治疗幼年特发性关节炎(JIA)病儿的临床效果及对T淋巴细胞免疫、Th1/Th2漂移及红细胞沉降率(ESR)水平的影响。方法选取2015年1月至2018年6月郑州儿童医院收治的JIA病儿46例,采用随机数字表法分为对照组与观察组每组23例,对照组单用益赛普治疗,观察组加用白芍总苷胶囊治疗,比较两组疗效,采用幼年关节炎疾病活动性评分表(JADAS27)评定病儿临床症状及体征的改善,并测定病儿治疗前后外周血T淋巴细胞免疫(CD4+、CD8+、CD4+/CD8+)、免疫球蛋白(IgA、IgG、IgM)、Th1、Th2细胞比例、Th1/Th2比值及红细胞沉降率、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平的变化,统计治疗不良反应发生率。结果观察组总有效率86.96%和对照组总有效率65.22%比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗前,两组JADAS27各维度评分比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,观察组各维度评分降低幅度均高于对照组,JADAS27总分(11.17±0.95)分低于对照组(15.87±1.03)分(P<0.05);治疗前,两组T淋巴细胞免疫及实验室各指标比较差异无统计学意义(P>0.05),治疗后,观察组CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、Th2细胞比例高于对照组,IgA、IgG、IgM、Th1细胞比例、Th1/Th2比值及红细胞沉降率、TNF-α均低于对照组(P<0.05);两组治疗期间均无严重不良反应发生(P>0.05)。结论白芍总苷胶囊联合益赛普治疗JIA疗效肯定,可改善病儿临床症状及体征,调节机体免疫,改善Th1/Th2漂移,下调外周红细胞沉降率、TNF-α水平。

CD4^+T淋巴细胞亚群研究进展

在免疫应答期间．外周血T淋巴细胞发育为功能不同的亚群．并通过分泌特殊的细胞因子．影响细胞免疫，调节体液免疫应答。T淋巴细胞按表型不同可分为CD4^＋和CD8^＋两大亚群．它们多数表达T细胞受体．但识别的抗原和所受的主要组织相容性复合体（major histoconapatibility complex, MHC）的限制性不同。现将近年来关于CD4^＋T淋巴细胞亚群的研究进展综述如下。

人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4^+T细胞增殖活性的影响

目的观察人BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BXSB狼疮鼠CD4+T淋巴细胞增殖活性的影响。方法体外分离、纯化BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞,流式细胞技术检测CD4+T细胞BAFF-R表达,MTT法观察不同剂量BAFF-R-IgG4mut融合蛋白对BAFF刺激的CD4+T细胞增殖活性的影响。结果台盼蓝染色分离后的BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞活性率为(93.6±3.2)%;流式细胞技术检测BXSB狼疮鼠脾脏CD4+T细胞表达BAFF-R;100ng/ml、200ng/ml、400ng/ml BAFF-R-IgG4mut蛋白作用于BAFF和CD3抗体刺激的CD4+T细胞后,CD4+T细胞增殖抑制率分别是56.24%、67.07%和75.45%,较单纯BAFF+CD3抗体组差异有统计学意义(P<0.05)。结论 BAFF-R-IgG4mut融合蛋白可体外抑制BXSB狼疮鼠CD4+T细胞增殖活性。

Th1/Th2、CD28、ICOS、PD-1和CTLA-4在桥本甲状腺炎患者外周血中的表达及与甲状腺相关实验室指标的相关性

目的探讨辅助性T淋巴细胞1与辅助性T淋巴细胞2比值(Th1/Th2)、CD28、可诱导共刺激分子(ICOS)、程序性死亡受体1(PD-1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)在桥本甲状腺炎(HT)患者外周血中的表达及与甲状腺相关实验室指标的相关性。方法收集2021年在该院门诊或住院治疗的HT患者40例为HT组,另选择同期健康体检者40例为对照组。采用全自动化学发光免疫分析仪检测血清甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)、促甲状腺激素(TSH)、游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)水平,采用酶联免疫吸附试验检测血清γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4和IL-10水平,采用流式细胞仪检测外周血中Th1与Th2细胞,以及CD3^(+)CD4^(+)T淋巴细胞表面共信号分子CD28、ICOS、PD-1、CTLA-4水平。结果HT组血清FT4和TPOAb水平均明显高于对照组,TSH、FT3水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。HT组外周血中Th1细胞及其相关细胞因子IFN-γ和IL-2水平,以及Th1/Th2明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。HT组外周血CD3^(+)CD4^(+)T淋巴细胞表面CD28、ICOS和PD-1水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组CTLA-4水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。FT4水平与Th1细胞、Th1/Th2水平呈正相关(P<0.05);TSH水平与Th1细胞、Th1/Th2和IL-2水平呈负相关(P<0.05);TPOAb水平与Th1细胞、Th1/Th2、IFN-γ、IL-2、CD28及ICOS水平呈正相关(P<0.05)。结论HT患者外周血中Th1细胞及其相关细胞因子IFN-γ和IL-2水平较健康体检者均明显上调,其CD3^(+)CD4^(+)T淋巴细胞表面CD28、ICOS和PD-1的表达也均明显上调。Th1细胞及其相关细胞因子,以及CD28、ICOS和PD-1可能在HT的发病机制中发挥了重要作用。

HIV-1B亚型Nef core蛋白特异性T淋巴细胞免疫应答研究

研究表明,Nef蛋白通过激活CD4＋T淋巴细胞,提高病毒颗粒的感染性,增加CD4分子和主要组织相容性复合体（MHC）分子的内吞,以及防止受感染细胞凋亡等途径,对HIV复制起到极其重要的促进作用[1]。因此机体对Nef蛋白的免疫反应及其在控制病毒方面的作用成为人们所关注的问题。

细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白对大鼠肝移植急性排斥反应及CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞的影响

目的观察应用细胞毒性淋巴细胞相关抗原4融合蛋白（CTLA4Ig）对大鼠肝移植术后对CD4^＋、CD8^＋T细胞的影响。方法建立大鼠肝移植急性排斥反应模型，随机分为A组：对照组，B组：实验组，CTLA4Ig80μg腹腔注射。检测B7-1和B7-2mRNA的表达，检测CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润，确定排斥反应。结果B组2、3、7dB7—1和B7—2表达均较A组降低（B7—1：0．166±0．012比0．353±0．043；0．375±0．022比0．503±0．058；0．475±0．023比0．799±0．135；P〈0．01；B，7-2：0．170±0．022比0．341±0．040；0．357±0．031比0．475±0．041；0．512±0．103比0．829±0．124；P〈0．01）。B组2、3、7dCD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞浸润均较A组降低（CD4^＋：12．7±3．7比21．0±4．4：15．5±3．8比28．2±5．2；18．6±4．0比35．0±7．0；P〈0．01；CD8^＋：9．3±1．5比16．9±2．9；12．1±2．2比19．9．4-5．3；17．1±3．7比29．0±5．4；P〈0．01）；B组2、3、7dRAI均较A组降低（1．3±0．2比1．9±0．3，P〈0．05；2．0±0．4比2．6±0．5，P〈0．05；2．5±0．7比4．6±1．1，P〈0．01）。B组大鼠的生存期较A组明显延长[（40．9±9．3）d比（9．2±2．1）d，P〈0．01]。结论应用CTLA41g可以诱导大鼠肝脏移植免疫耐受。

细胞免疫指标与溃疡性结肠炎严重程度的关系

背景:CD_4、CD_8阳性T淋巴细胞和可溶性白细胞介素-2受体(SIL-2R)作为细胞免疫的主要指标被认为与溃疡性结肠炎(UC)的严重程度有关,但其相关关系各学者意见不一。目的:观察外周血CD_4、CD_8阳性T淋巴细胞和SIL-2R水平与UC严重程度的关系及其在疾病缓解后的变化情况,以评估上述指标在UC临床诊治中的价值。方法:测定24例活动期UC患者的外周血CD_4、CD_8阳性T淋巴细胞和SIL-2R水平,其中10例患者的SIL-2R水平作治疗前后比较。结果:活动期UC患者的SIL-2R水乎显著高于健康对照组(P<0.05),且与疾病严重程度有关;CD_4、CD_8阳性T淋巴细胞水平则与健康对照组无显著差异,与疾病严重程度亦无关。经类固醇激素治疗症状缓解后,患者的SIL-2R水平显著下降(P<0.05)。结论:外周血SIL-2R水平与UC的严重程度和缓解密切相关,CD_4、CD_8阳性T淋巴细胞水平则无参考价值。

TLR7激动剂CL097对实验性自身免疫性葡萄膜炎中Th17细胞活性的促进作用

背景 研究表明,Toll样受体7（TLR7）在自身免疫性疾病中发挥重要作用,但TLR7在实验性自身免疫性葡萄膜炎（EAU）中是否通过树突状细胞（DCs）调控辅助性T淋巴细胞17（Th17）的作用机制鲜见报道.目的 探讨TLR7激动剂CL097处理的小鼠骨髓树突状细胞（BMDCs）对光感受器间维生素A类结合蛋白（IRBP） 1-20-特异性Th17细胞的影响.方法 采用C57BL/6小鼠股骨和胫骨分离小鼠骨髓细胞,将重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（rmGM-CSF）及重组小鼠白细胞介素-4（rmIL-4）加入培养基在体外定向诱导BMDCs,于诱导后第6天在培养基中加入5μg/ml CL097作用8h,对照组加入PBS,采用实时荧光定量PCR技术检测CL097处理组与对照组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β及转化生长因子-β（TGF-β） mRNA的相对表达量.小鼠腹腔内注射百日咳毒素1μg,注射后2h将IRBP1-20与等容积含有结核分枝杆菌HR37RA的完全弗氏佐剂充分乳化后主动免疫C57BL/6小鼠,眼底检查参照Caspi 0 ～4分的标准进行炎症评分.免疫后第13天取眼球制作病理切片,苏木精-伊红染色后行组织病理学检查,并分离小鼠脾脏及淋巴结中IRBP1.20-特异性T细胞,分别与CL097处理组及对照组的BMDCs共培养5d,收集细胞,采用实时荧光定量PCR技术检测2个组细胞中IL-17、γ干扰素（IFN-γ）、维甲酸相关核孤儿受体γt（RORγt）和T细胞中表达的T盒21转录因子（T-bet） mRNA的相对表达量;采用流式细胞仪检测并分析CL097处理组和对照组Th1与Th17细胞比例的变化.结果 EAU模型成功建立.实时荧光定量PCR检测结果显示,CL097处理组BMDCs中IL-6、IL-23、IL-1β mRNA的相对表达量明显高于对照组,差异均有统计学意义（t=4.560,P=0.045; t=5.476,P=0.032; t=17.240,P=0.003）,而TGF-β mRNA相对表达量明显低于对照组,差异有统计学意义（t=10.410,P=0.009）.CL097处理组BMDCs与IRBP1-20-特异性T细胞共培养后,RORγt和IL-17 mRNA相对表达量较对照组明显升高,差异均有统计学意义（t=8.844,P=0.012;t=8.831,P=0.013）,而CL097处理组中T-bet、IFN-γmRNA的相对表达量与对照组比较差异均无统计学意义（t=2.078,P=0.173; t=1.082,P=0.393）.流式细胞仪检测证实,CL097处理组Th17细胞的百分比为（17.750±4.793）％,明显高于对照组的（10.240±3.173）％,差异有统计学意义（t=4.938,P=0.039）,CL097处理组和对照组Th1细胞的百分比分别为（1.123±0.356）％和（1.060±0.384）％,差异无统计学意义（t=2.714,P=0.113）.结论 TLR7激动剂CL097促进BMDCs分泌与Th17细胞极化相关的细胞因子,并促进IRBP1-20-特异性Th17细胞的分化.

病毒逃逸细胞毒性T淋巴细胞免疫杀伤的机制

病毒蛋白等经胞质中的蛋白酶体降解成抗原多肽，与主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex，MHC）分子共同组成MHC-抗原肽复合体，经高尔基复合体（Golgi complex，GC）呈递至细胞表面，被T淋巴细胞受体（T cell receptor，TCR）识别，激活特异CTL等一系列反应。CTL杀伤反应是控制病毒感染的有效免疫防御机制，MHCI类分子限制性CD8^＋CTL是抗病毒感染的重要效应细胞，能够识别由MHCI途径呈递的病毒抗原肽。

淋巴瘤相关抗原肽刺激所获细胞毒性T细胞克隆的特征

目的研究抗肿瘤细胞毒性T淋巴细胞(CTL)克隆识别靶细胞的肽特异性和人类白细胞抗原(HLA)限制性,以及其赖以识别抗原肽的T细胞受体(TCR)基因表达序列的分子特征。方法利用体外CTL刺激扩增体系,应用免疫球蛋白重链可变区(IgHV)框架区上的B淋巴瘤相关抗原九肽(IgHV1QLVQSGAEV和IgHV3SLYLQMNSL)负荷的抗原递呈细胞(APC),刺激正常HLAA0201供者的外周血单个核细胞(PBMC),每周1次共4次,用流式细胞仪检测体外培养细胞的免疫表型的变化,并用肽/主要组织相容性基因复合体(MHC)四聚体方法检测肽特异性的CTL增殖情况。应用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测CTL与不同的靶细胞共同孵育时释放干扰素γ(IFNγ)的能力。应用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)和T细胞受体(TCR)基因指纹谱型图方法检测培养前后的淋巴细胞的克隆变化,并用直接测序的方法得到CTL克隆的TCR基因序列。结果B淋巴瘤相关抗原肽4次刺激体外培养的PBMC后CD8+CTL大量增殖,CD4/CD8明显下降(0.10vs1.43,P<0.05)。IgHV1QLVQSGAEV/HLAA0201四聚体和CD8双阳性的肽特异性CTL数量(49.38%)比刺激前(0.04%)明显上升。ELISA检测IFNγ的分泌表明其识别靶细胞是肽特异性和HLA限制性的。TCR基因指纹谱型图显示抗原肽反复刺激获得的CTL的TCR表达集中于个别基因家族,呈克隆性增殖。结论应用IgHV基因框架区来源的B淋巴瘤相关抗原九肽可以使特异性CTL克隆增殖,这些克隆以肽特异性和HLA限制性的方式识别靶细胞。了解这些CTL的作用和TCR识别相关抗原肽的分子结构,将有助于确定体内T细胞和B细胞相互调节的机制。

T淋巴细胞免疫功能重建对小鼠肝癌转移的影响

目的研究T淋巴细胞免疫功能重建对小鼠肝癌转移程度的影响,进一步探讨免疫对肝癌转移的影响因素,寻找肝癌转移的免疫干预手段。方法建立T淋巴细胞免疫功能重建的模型。将裸鼠分成高、低转移的T淋巴细胞免疫功能重建组和未重建组。取淋巴结通过病理切片观察转移程度。计算成瘤时间和生长速度的差异,检测肿瘤细胞株组织相容性复合物(MHC)Ⅰ、Ⅱ表达。应用Th1—Th2-Th3基因芯片检测不同转移潜能小鼠体内T淋巴细胞相关基因的差异。结果进行T淋巴细胞免疫功能重建后裸鼠外周血CD 3、CD4、CD 8和CD4/CD 8比例均高于未重建组;高、低转移潜能的肝癌细胞在裸鼠体内平均成瘤时间为(7.7±0.6)d,正常Balb/c小鼠为(11.5±1.3)d。高、低转移潜能肝癌细胞的肿瘤生长速度具有明显的差异。免疫重建后的裸鼠肿瘤淋巴结远处转移显著降低(P<0.0 5)。高转移组肿瘤细胞的M H C Ⅰ表达明显低于低转移组(P<0.0 5)。高转移组T淋巴细胞Th1/Th2相关基因的表达低于低转移组。结论免疫功能重建可以在一定程度上影响小鼠肝癌的转移。肿瘤M H C分子表达的改变和机体淋巴细胞T h 1/T h 2 相关基因的表达降低可能是影响肝癌转移潜能的原因。

小分子化合物J2抑制小鼠角膜移植术后排斥反应的研究

目的探讨新型药物J2抗同种异基因小鼠角膜移植术后排斥反应的作用及其机制。方法实验研究。采用随机分组设计的研究方法。建立以C57BL／6小鼠为供体，BALB／c小鼠为受体的角膜移植实验模型，其中供体38只，受体100只，随机分为A、B、C、D四组，每组25只。A组为BALB／c小鼠自体原位角膜移植，B、C及D组均采用C57BL／6-BALB／c同种异体角膜移植，术后采用腹腔注射给药，自手术当日开始，A组、B组给予安慰剂，C组给予CsA10mg／kg体重，D组给予J215mg／kg体重，每天1次，连续给药12d。观察各组植片生存指数变化，苏木素-伊红染色及冰冻切片免疫组织化学观察角膜植片病理改变；分别在术后1、2、3及4周行逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测角膜植片中细胞因子的表达。各组间植片存活时间差异采用One—Way ANOVO分析进行比较，两组之间比较采用SNK法。结果B组角膜植片平均存活时间为（18．88±4．19）d，D组发生排斥时间明显延迟为（33．62±6．80）d，两组比较差异有统计学意义（q=8．33，P=0．00），而D组与C组比较差异无统计学意义（q=0．85，P=0．60）。组织学检查证实，术后21d，B组见大量细胞浸润，而D组与C组植片未见明显的细胞浸润。免疫组织化学检测显示安慰剂组角膜植片大量CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞浸润，J2组与CsA组植片仅有少量的CD4^＋和CD8^＋T淋巴细胞浸润。RT—PCR结果显示，在正常小鼠角膜未见IL-10和IFN-γ基因表达；异基因移植组从第1周开始表达各种基因，第3周表达明显增强；而J2组与CsA组从第1周开始表达，第2、3周表达减弱，第4周表达强于前3周。结论J2通过拮抗CD4与主要组织相容性抗原（MHC）Ⅱ分子结合抑制CD4^＋T淋巴细胞激活，从而具有抗小鼠角膜移植排斥作用。

LAG-3分子与免疫调节

淋巴细胞活化基因-3（1ymphocyte activation gene 3，LAG．3）表达在活化的T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞（natural killer cell，NK）和浆细胞样树突状细胞（plasmacytoid dendritic cells，pDCs）[1-2]，编码的膜蛋白包含四个免疫球蛋白超家族（Ig supeffamily，IgSF）结构域，和CD4分子在结构和染色质定位方面非常相似 [3]，但以更高的亲和力与主要组织相容性复合体Ⅱ类分子（major histo-compatibility complex class Ⅱ，MHCII）结合[4]，并负调控T细胞功能[5-6]。