CD40-CD40L共同表达于人内皮细胞及人动脉粥样斑块中

目的 :探讨CD4 0和CD4 0L在人脐静脉内皮细胞及动脉粥样硬化斑块中是否可共同表达。方法 :CD4 0及CD4 0L在内皮细胞表面的表达分别采用荧光技术、RT -PCR、流式细胞仪和Westernblotting检测。人的动脉粥样硬化斑块中CD4 0及CD4 0L的表达采用免疫组化方法。结果 :人内皮细胞能连续表达CD4 0及CD4 0LmRNA和蛋白 ,并且细胞因子IL - 1β、IL - 6、TNF -α、INF -γ能明显刺激内皮细胞表达CD4 0、CD4 0L。人动脉粥样斑块中能共同表达CD4 0及CD4 0L ,而动脉壁的其它部分不表达。CD4 0L主要表达在斑块的肩部和底部 ,CD4 0在斑块中表达广泛。结论 :人内皮细胞表面及粥样斑块中能共同高表达CD4 0和CD4 0L ,提示CD4 0及CD4 0L相互作用在动脉粥样硬化形成及发展中起重要作用。

阻断CD40-CD40配体系统对动脉粥样硬化的影响

目的探讨阻断CD40-CD40配体系统对动脉粥样硬化的影响。方法18只载脂蛋白E基因敲除小鼠随机分为阳性对照组(n=10)和抗CD40配体抗体组(n=8),并以近交系C57BL/6小鼠作为正常对照。测定血脂、可溶性血管细胞粘附分子1和可溶性细胞间粘附分子1浓度。观察主动脉组织病理形态学改变,免疫组织化学法测定斑块部位巨噬细胞、平滑肌细胞和CD4+T细胞百分率。Western杂交分析测定基质金属蛋白酶9的蛋白表达。结果抗CD40配体抗体治疗可明显降低可溶性血管细胞粘附分子1和可溶性细胞间粘附分子1浓度(P<0.01),对血脂无明显影响(P>0.05);可减轻动脉粥样硬化病变,减少斑块部位巨噬细胞和CD4+T细胞,增加平滑肌细胞数量(P<0.05),降低基质金属蛋白酶9的表达(P<0.01)。结论阻断CD40-CD40配体系统可使血清可溶性粘附分子浓度下降,抑制炎症反应,从而减轻动脉粥样硬化病变,对血脂无影响。

可溶性CD40配体对肺癌细胞A549的生物学作用及其机制研究

背景与目的:尽管对CD40分子在B细胞中的功能已有深入的研究,但CD40在肺癌细胞中的功能目前知之甚少。本研究旨在探讨可溶性CD40配体(solubleCD40ligand,sCD40L)对肺癌细胞株A549(CD40表达阳性细胞株)的生物学作用及其相关机制。方法:采用四氮唑盐(MTT)比色、3H标记胸腺脱氧嘧啶核苷(3H-TdR)掺入法检测sCD40L对A549细胞增殖的影响,免疫荧光标记和流式细胞术测定细胞表型及细胞周期的改变,流式细胞术、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)及Westernblot分析测定sCD40L对A549细胞凋亡的影响及Bcl-2、Bax基因表达的变化。结果:(1)sCD40L可抑制A549细胞的增殖(与对照组比较P<0.05)。(2)sCD40L作用72h后,A549细胞表面CD49e、CD54、TNFRⅠ及CD95L的表达犤分别为(61.2±4.8)%,(31.2±6.1)%,(42.7±5.9)%,(38.2±3.4)%犦较对照组犤分别为(34.7±2.1)%,(7.1±1.6)%,(15.2±4.1)%,(10.1±2.3)%犦明显升高,而TNFRⅡ的表达犤(8.7±0.8)%犦较对照组犤(58.1±3.6)%犦下降。(3)sCD40L作用72h后,A549细胞G1期细胞比例犤(76.0±9.1)%犦较对照组犤(56.7±6.9)%犦增加,S期细胞比例犤(10.3±5.7)%犦较对照组犤(32.7±5.5)%犦减少。(4)sCD40L在短期(72h)内并不引起A549细胞明显凋亡,但可上调Bax的表达。

哮喘患儿淋巴细胞CD40/CD40L信号分子的表达

目的CD40/CD40L是免疫应答中的一对协同刺激分子,它们在哮喘的发病中可能起到至关重要的作用,该文旨在探讨CD40/CD40L的表达与儿童哮喘的发病关系。方法随机选择哮喘急性发作患儿32例,对照组20例。用流式细胞仪检测其外周血T、B淋巴细胞表达分化抗原CD40及其配体CD40L的百分率,并比较哮喘组与对照组之间的差异性。结果哮喘组B淋巴细胞CD40的表达率较对照组明显增高(17.05±4.88vs13.89±3.67,P<0.05);哮喘组CD4+T淋巴细胞CD40L的表达率较对照组明显增高(8.04±3.53vs5.58±3.00,P<0.05)。结论哮喘急性发作患儿存在的相关免疫细胞CD40/CD40L的异常表达,可能是其免疫失衡发病因素之一。

细胞因子对人单核/巨噬细胞表达CD40和CD40L的影响

目的 :探讨细胞因子γ干扰素 (IFN-γ)、肿瘤坏死因子 (TNF)和白介素 - 1(IL - 1)对人单核 /巨噬细胞表达 CD40和CD40 L的影响。 方法 :应用 RT- PCR方法半定量测定 CD40和 CD40 L m RNA含量 ,流式细胞技术检测细胞表面 CD40和CD40 L表达水平。 结果 :IFN-γ,TNF和 IL - 1既增加 CD40和 CD40 L m RNA表达 ,又能诱导单核 /巨噬细胞表面 CD40和CD40 L高表达 ,而抗氧化剂 Vit E能下调细胞因子引起的 CD40和 CD40 L表达 ,但作用不完全。结论 :细胞因子 (IFN-γ,TNF和 IL - 1)能刺激单核 /巨噬细胞高表达 CD40和 CD40 L ,这种作用可被 Vit

阻断CD40-CD40L共刺激途径对T细胞表型及细胞因子分泌的作用研究

目的 :探讨应用抗CD4 0L单克隆抗体阻断CD4 0 CD4 0L共刺激途径后对T细胞表型及其分泌的细胞因子的影响 ,为体外阻断该共刺激途径诱导T细胞对异体移植抗原的免疫耐受提供实验依据。方法 :供鼠 (C5 7BL 6 H 2b)脾T细胞作为反应细胞 ,受鼠 (BALB CH 2d)脾细胞作为刺激细胞 ,设单抗组 (加抗CD4 0L单抗 )和对照组 (不加单抗 ) ,初次混合淋巴细胞培养(MLR) 7天 ,在不同时间点采用3H TdR掺入法检测细胞增殖率 ,以ELISA法测定培养上清液中IFN γ、IL 2、IL 4、IL 10等的水平 ,第 5天采用流式细胞仪检测CD4 + T和CD8+ T细胞上CD2 5、CD6 9、CD4 0L和CD4 5RA的表达。再次MLR 5天 ,第 1、3、5天采用3H TdR掺入法测定细胞的增殖情况和ELISA法测定培养上清液中的上述细胞因子的水平。结果 :初次和再次MLR结果均显示 ,单抗组细胞增殖反应率明显低于对照组。初次MLR单抗组中CD4 + T和CD8+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ;单抗组中CD4 + CD2 5 + T、CD4 + CD6 9+ T、CD8+ CD2 5 + T、CD4 + CD4 0L+ T和CD8+ CD6 9+ T细胞比例明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而CD8+ CD4 0L+ T和CD4 + CD4 5RA +T细胞的比例与对照组相比无明显差异 (P >0 0 5 )。初次MLR中单抗组和对照组培养上清中IL 4和IL 10几乎无法测出 。

CD40阻断剂对大鼠肾移植急性排斥反应的影响

目的探讨CD40阻断剂对大鼠肾移植急性排斥反应的影响。方法建立大鼠的肾移植急性排斥反应模型,供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠,受者移植后分为2组,每组20只。治疗组:在移植后第1天起,每天腹腔注射抗大鼠CD40L单克隆抗体(200μg/次),连续4 d。对照组:在移植后第1天起开始腹腔注射生理盐水(2 ml/次),连续4 d。术后第5天取移植肾组织行病理检查。参照BANFF’2007分级系统和Watanabe等的方法进行半定量评分。结果治疗组半定量评分为0.63±0.52,对照组评分为3.72±1.48。经两组均数比较的t检验,治疗组与对照组评分差异有统计学意义(P<0.05)。结论CD40L单克隆抗体具有明显的抑制大鼠肾移植急性排斥反应的作用。

普伐他汀和阿司匹林对CD40-CD40L表达及斑块稳定性的影响

目的:研究普伐他汀和阿司匹林对兔腹主动脉粥样硬化斑块CD40-CD40L表达及斑块稳定性的影响。方法:新西兰大白兔32只予高脂饲养16wk及腹主动脉球囊损伤术建立腹主动脉粥样硬化模型,分4组:P组(普伐他汀)、A组(阿司匹林)、A+P组(联合用药)与N组(不用药),分别予相应药物灌胃8wk。通过免疫组化检测比较各组兔腹主动脉粥样硬化斑块内CD40-CD40L表达、MMP-1、胶原及脂质含量变化,超声检测腹主动脉内膜-中膜厚度(IMT)改变,ELISA法测定血清C反应蛋白(CRP)变化,分析2药干预动脉粥样硬化斑块稳定性的机制。结果:用药各组兔腹主动脉斑块内CD40-CD40L表达较N组显著受抑,普伐他汀作用更显著(P组和A+P组均P<0.01);同时各用药组MMP-1的表达、IMT增厚及CRP增高较N组均得到明显抑制(P<0.01),P组和A+P组较N组斑块内脂质显著减少(P<0.01),胶原含量明显增加(P<0.01)。结论:普伐他汀和阿司匹林都可抑制斑块CD40-CD40L系统的表达,促进斑块的稳定性。普伐他汀促进斑块稳定的机制可能是多方面的。

尿毒症患者血浆中可溶性CD40水平的变化及其临床意义

目的:检测可溶性CD40(sCD40)在尿毒症患者血浆中的水平并探讨其临床意义。方法:应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测20例尿毒症未透析患者(尿毒症组)、20例血液透析患者(血液透析组)和20例正常对照者(对照组)血浆标本中sCD40的浓度,分析sCD40与血肌酐(Scr)和C-反应蛋白(CRP)的相关性,并观察血液透析对sCD40的影响。结果:尿毒症组和血液透析组sCD40水平均明显高于对照组(P<0.01),血液透析组sCD40水平较尿毒症组升高(P<0.01)。尿毒症组sCD40水平与Scr、CRP之间成正相关(P<0.01,P<0.05),血液透析组sCD40水平与上述指标之间无明显相关性(P>0.05)。一次血液透析过程,透析前、后sCD40水平差异无显著性(P>0.05)。结论:尿毒症患者血浆中sCD40水平升高,血液透析患者更明显,有可能参与尿毒症的免疫异常。

大鼠心肌缺血再灌注损伤时粘附分子CD40及CD40配体的表达

目的 :探讨粘附分子CD4 0及CD4 0配体 (CD4 0L)在心肌缺血再灌注损伤中的表达。方法 :采用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,大鼠分 7组 :对照组 (n =3)、单纯缺血 30min、缺血 30min再灌注 1min、5min、10min、2 0min和 30min组 (各组n =6 ) ,利用流式细胞技术观察外周血CD4 0及CD4 0L的表达 ,并用免疫组织化学法观察CD4 0及CD4 0L在心肌中表达情况。结果 :单纯 30min缺血组 (I3 0min)的CD4 0及CD4 0L高于对照组 (P <0 0 5 ) ;在不同的再灌注时间中 ,CD4 0及CD4 0L在再灌注 1min(R1min)开始升高 ,R5min达高峰 ,随后开始下降 ,R3 0min达基线 ,其中R5min、R10min的CD4 0及CD4 0L比I3 0min及对照组高 (P <0 0 5 ) ,免疫组织化学法显示CD4 0及CD4 0L在心肌细胞膜上表达 ,正常心肌细胞膜上表达较弱 ,损伤心肌细胞膜上表达较强。结论 :提示心肌缺血再灌注损伤的发生可能与粘附分子CD4 0及CD4

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血单一核细胞表达CD40和CD40L的影响

目的探讨卡介菌多糖核酸(BCGPSN)对尖锐湿疣(CA)患者外周血单一核细胞(PBMC)表达CD40和CD40L的影响。方法利用流式细胞仪对CA患者BCGPSN组和对照组治疗前后及正常人PBMC中CD40和CD40L进行检测。结果治疗前CA患者PBMC中CD40和CD40L阳性细胞数较正常人显著降低(t=5.385,P<0.05;t=3.418,P<0.05);BCGPSN组治疗后PBMC中CD40和CD40L的阳性细胞百分数较治疗前显著升高(t=7.764,P<0.05;t=17.24,P<0.05);而对照组治疗前后CD40和CD40L水平差异无显著性,且复发率高于BCGPSN组。结论BCGPSN对CA患者PBMC的CD40和CD40L表达可能有调节作用。

CD40-CD40L与甲状腺相关眼病

甲状腺相关眼病是一种器官特异性自身免疫性疾病,确切的发病机制尚不清楚。近年来研究表明CD40和其配体CD40ligand(CD40L)与自身免疫性疾病的发病关系密切。CD40-CD40L作为一种重要的共刺激信号,通过诱导细胞活化和细胞因子的产生,调节细胞、体液免疫并参与介导细胞内信号转导。本文就CD40-CD40L的结构和分布、对免疫反应的调节及其在甲状腺相关眼病发病中的作用作一综述。

CD40L表达在异基因造血干细胞移植中GVHD发生的意义

目的 初步探讨在异基因造血干细胞移植 (HSCT)中发生移植物抗宿主病 (GVHD)患者CD40L表达的变化以及意义。方法 HSCT治疗重型 β 地中海贫血 (n =1 2 )和遗传性溶血性贫血 (n =1 )成功植入的儿童患者 ,其中脐血移植 (UCBT)8例 ,异基因外周血造血干细胞移植 (allo PBSCT ) 5例 ,在移植前、移植后发生GVHD时采用流式细胞仪检测和比较外周血中CD40L和CD40的表达。结果 3例UCBT无GVHD ,其余均发生了Ⅰ～Ⅳ度急性GVHD。急性GVHD发生时CD4+CD40L+和CD8+CD40L+T细胞表达明显升高 ,allo PBSCT者更明显 ;慢性GVHD发生时患者的CD40L+、CD2 5+和CD69+在CD4+和CD8+T细胞上的表达亦增加。CD1 9+CD40 +B细胞的表达在UCBT和allo PBSCT的 3个月内则一直处于低于正常的水平。结论 CD40L高表达与GVHD的发生相关 ,提示CD40

IL-4及CD40mAb对肾小管上皮细胞RANTES表达的影响

目的 :观察小鼠肾小管上皮细胞 (TEC)在IL - 4及CD4 0激活状态下激活正常T细胞表达和分泌因子 (RANTES)分泌的变化。方法 :刺激原代培养的小鼠肾小管上皮细胞 ,检测RANTES的表达 ,流式细胞仪检测CD4 0表达。结果 :(1)常规培养下 ,小鼠TEC可表达一定量的CD4 0 ,用IL - 4刺激TEC 2 4h ,细胞表面CD4 0MFI显著高于对照组 (P <0 0 1)。 (2 )常规培养下 ,小管上皮细胞仅分泌极少量的RANTES(14 78ng/L± 2 2 0ng/L) ,在IL - 4刺激或CD4 0mAb激活后TECRANTES蛋白分泌分别为 4 3 6 1± 13 73和 73 77± 4 2 8,显著高于对照组 (P <0 0 1)。用IL -4刺激肾小管细胞CD4 0表达的同时 ,加入纯化的CD4 0mAb激活CD4 0受体 ,TECRANTES的合成、分泌显著高于对照组 (131 77± 4 1 87,P <0 0 1) ,与单纯IL - 4刺激组及CD4 0mAb刺激组比较差异显著 (均P <0 0 1)。 (3)用IL - 4、CD4 0mAb及IL - 4 +CD4 0mAb刺激TEC细胞 2 4h ,各刺激组RANTESmRNA表达显著高于对照组 (P <0 0 5 )。结论 :IL - 4及CD4 0 -CD4 0L共刺激信号可调控RANTES合成及分泌 ,参与TEC炎症过程。

CD40和CD40配体表达在异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病发生中的变化

目的探讨在血缘相关人类白细胞抗原(HLA)全相合异基因造血干细胞移植(HSCT)中发生移植物抗宿主病(GVHD)患者CD40和CD40配体(CD40L)表达的变化及意义。方法成功应用血缘相关HLA全相合异基因HSCT治疗19例重型珠蛋白生成障碍性贫血和1例遗传性溶血性贫血。其中脐血移植(UCBT)8例,异基因外周血造血干细胞移植(allo-PBSCT)12例,移植前、后发生急、慢性GVHD时采用流式细胞仪检测和比较其外周血CD40和CD40L的表达。结果UCBT3例和allo-PBSCT4例无急性GVHD,余13例均发生Ⅰ～Ⅳ度急性GVHD。急性GVHD发生时CD4+CD40L+和CD8+CD40L+T细胞表达明显升高,尤其在allo-PBSCT者更明显。5例UCBT和12例allo-PBSCT发生慢性GVHD,慢性GVHD发生时患者的CD40L+、CD25+和CD69+在CD4+和CD8+T细胞上的表达增加。CD19+CD40+B细胞的表达在UCBT和allo-PBSCT后1a一直处于低水平。结论HSCT移植后患者外周血CD40L+T细胞的高表达可能与异基因HSCTGVHD的发生过程中的T细胞活化与增殖有关。

CD40配体激活抑制胃癌细胞生长机制的实验研究

目的探讨CD40配体激活对胃癌细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法MTT法检测不同浓度sCD40L作用后AGS胃癌细胞株存活率,选定最佳干预浓度;流式细胞术检测sCD40L最佳干预浓度作用后胃癌细胞株AGS、BGC-823细胞周期和凋亡的变化。结果sCD40L的最佳干预浓度为2μg/ml;与胃癌细胞株AGS、BGC-823共育48 h,sCD40L可使高表达CD40的AGS细胞生长抑制,细胞周期阻滞在G1期,而对CD40低表达的BGC-823细胞生长无明显影响,并且AGS、BGC-823细胞均无明显的凋亡变化。结论sCD40L可明显抑制CD40高表达胃癌细胞的生长,其机制是使细胞周期阻滞。

子痫前期患者血清sCD40及其配体含量与肾功能损伤的相关性研究

目的:探讨子痫前期患者血清sCD40及其配体含量与肾功能损伤的相关性。方法:收集本院收治的子痫前期患者68例,分为轻度子痫前期组38例、重度子痫前期组30例,另取同期在本院进行产检的健康孕妇57例作为对照组。采用ELISA检测血清可溶性CD40(sCD40)及其配体(sCD40L)以及肾损伤指标的含量;采用全自动生化分析仪检测肾功能指标的含量;采用彩色多普勒超声仪检测肾主动脉血流动力学参数。结果:重度子痫前期组、轻度子痫前期组血清中sCD40、sCD40L、BUN、β2-MG、Scr、Cys C的含量以及尿液中KIM-1、NGAL的含量均显著高于对照组且重度子痫前期组血清中sCD40、sCD40L、BUN、β2-MG、Scr、Cys C的含量以及尿液中KIM-1、NGAL的含量均显著高于轻度子痫前期组;重度子痫前期组、轻度子痫前期组AT、RI水平高于对照组,Vs、Vd水平低于对照组且重度子痫前期组AT、RI水平高于轻度子痫前期组,Vs、Vd水平低于轻度子痫前期组;子痫前期患者血清sCD40、sCD40L含量与肾功能损伤严重程度具有相关关系。结论:子痫前期患者血清中sCD40、sCD40L含量显著升高且与患者肾功能损伤程度具有相关关系,能够用于肾损害程度的评估。

可溶性重组人CD40配体抑制人胶质瘤细胞生长

背景和目的:CD40是存在于B细胞、单核细胞、树突状细胞、内皮细胞和多种肿瘤细胞上的肿瘤坏死因子受体超家族成员,已有研究证明用CD40抗体或CD40配体激活CD40可引起人卵巢癌、结肠癌、乳腺癌和肺癌细胞凋亡或死亡,并抑制鼠体内移植瘤生长。本研究拟了解可溶性重组人CD40配体(srhCD40L)对人胶质瘤细胞增殖的影响。方法:用免疫组化法检测胶质瘤标本中CD40的表达。用流式细胞仪检测人胶质瘤细胞中CD40的表达,然后在其培养基中加入srhCD40L孵育,在分别培养72h和24h后检测细胞增殖和凋亡指标。结果:23个胶质瘤标本中有7个和3个胶质瘤细胞系有1个具有CD40表达。有CD40表达的胶质瘤细胞系与srhCD40L共孵育后发现细胞活力从98%降至87%;凋亡和坏死升高了17.4%。结论:在体外用CD40配体激活CD40可抑制有CD40表达的人胶质瘤细胞的生长,提示CD40配体在治疗胶质瘤上有潜在的临床应用价值。

环孢素A对冠心病患者T淋巴细胞CD40/CD40L表达的影响

目的探讨CD40/CD40L在冠心病发生发展中的作用,以及环孢素A(Cs A)对CD40/CD40L是否具有抑制作用。方法 71例冠心病或疑诊为冠心病患者分为急性心肌梗死(AMI)组19例,不稳定型心绞痛(UAP)组18例,稳定型心绞痛(SAP)组17例,正常对照(N)组17例。提取各组患者外周血单个核细胞(PBMCs),应用流式细胞术检测各组CD40/CD40L表达水平,筛选出CD40/CD40L高表达组并给予不同浓度Cs A(H1:0 mg/L;H2:0.01 mg/L;H3:0.1mg/L;H4:1 mg/L)处理细胞,流式细胞术检测处理组CD40/CD40L的表达水平。结果与N组相比,其他3组CD40表达水平均升高(均P<0.05),UAP组、AMI组较SAP组升高,UAP组与AMI组之间差异无统计学意义(P>0.05);CD40L的表达在不同病变程度组间依次升高,两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。AMI组CD40/CD40L表达水平最高。不同浓度Cs A处理后H1组CD40表达率高于H3组、H4组(均P<0.05)。CD40L表达率在H1组显著高于其他3组(均P<0.05)。结论 CD40/CD40L可能参与冠心病的发生发展,Cs A可通过抑制CD40/CD40L从而延缓冠心病发展及改善预后。