急性冠脉综合征患者替罗非班治疗后过氧化物酶体增生激活型受体γ与CD40/CD40L通路表达的变化

目的观察急性冠脉综合征(ACS)患者替罗非班治疗后过氧化物酶体增生激活型受体γ(PPARγ)与CD40/CD40L通路表达的变化。方法选取2016年12月至2017年7月邯郸市第一医院心内科ACS患者120例,随机数字表法分成4组,为常规治疗组和常规治疗+替罗非班12 h、24 h、36 h组,每组30人,进行随机对照研究。替罗非班组经皮冠状动脉介入治疗(PCI)术12 h后、24 h后、36 h后分别抽取患者血液,酶联免疫吸附法(ELISA)测定PPARγ与CD40、CD40L蛋白水平的表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PPARγ与CD40、CD40L m RNA表达。结果与常规治疗组比较,替罗非班12 h、24 h、36 h组CD40与CD40L蛋白水平表达逐渐降低,CD40水平分别为(0.86±0.08)μg/L、(0.46±0.05)μg/L、(0.40±0.05)μg/L;CD40L水平分别为(0.92±0.04)μg/L、(0.54±0.04)μg/L和(0.40±0.05)μg/L,均差异有统计学意义(F=1 977.39,5 071.39;均P<0.01);PPARγ蛋白表达水平上升,分别为(0.94±0.04)μg/L、(1.40±0.01)μg/L和(1.48±0.01)μg/L,差异有统计学意义(F=4 719.81,P<0.01);替罗非班组CD40和CD40L m RNA表达逐渐降低,分别为0.98±0.07、0.50±0.02、0.41±0.01和1.02±0.06、0.50±0.02、0.40±0.01,均差异有统计学意义(F=5 781.52,5 935.29;均P<0.01);PPARγm RNA表达升高,分别为0.74±0.04、1.31±0.01和1.49±0.01,差异有统计学意义(F=4 683.59,P<0.01)。结论替罗非班能上调PPARγ表达,同时抑制CD40/CD40L通路的激活,具有抑制炎症、稳定粥样斑块作用。

血管紧张素-(1-7)对THP-1源性巨噬细胞CD40/CD40L表达的影响

目的探讨血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]对血管紧张素Ⅱ[AngⅡ]刺激下THP-1源性巨噬细胞CD40和CD40L表达的影响。方法用一定浓度的AngⅡ诱导体外培养的巨噬细胞,与不同浓度的Ang-(1-7)共同孵育,应用流式细胞技术检测CD40和CD40L在细胞上的表达,采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40和CD40LmRNA表达。结果Ang-(1-7)既可下调细胞表面CD40和CD40L的表达,又能使CD40和CD40LmRNA表达下降,其阻断作用呈浓度依赖性;应用Ang-(1-7)特异性阻断剂A-779后CD40和CD40L表达再次升高,与AngⅡ组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论Ang-(1-7)可拮抗巨噬细胞CD40和CD40L表达,并呈浓度依赖性,这种作用可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一;Ang-(1-7)是通过特异性受体MAS起作用的。

CD40-CD40L信号通路与急性冠脉综合征相关性研究进展

CD40及其免疫调节配体CD40L是一对互补跨膜糖蛋白,分别属于神经生长因子受体(NGFR)/肿瘤坏死因子受体(TNF-R)超家族和肿瘤坏死因子(TNF)超家族成员,参与许多疾病的发生发展过程。研究发现,CD40-CD40L通路不仅与免疫性疾病(自身免疫性疾病和免疫缺陷病)的发展进程密切相关,同时还介导炎症反应,几乎贯穿急性冠状动脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)全过程。现就CD40-CD40L通路与急性冠脉综合征的相关性做一简要概述,以期进一步为探讨CD40-CD40L通路与心血管疾病的预防、治疗提供理论依据。

替米沙坦对体外培养THP-1源性巨噬细胞MMP-9与CD40/CD40L表达的影响

目的:通过观察替米沙坦对体外培养的THP-1源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)及白细胞分化抗原CD40/CD40L表达的影响,揭示替米沙坦抗炎作用的可能机制,同时明确替米沙坦的心血管保护作用。方法:用一定浓度的血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)(10 000 nmol/L)诱导体外培养的巨噬细胞,与不同浓度的替米沙坦共同孵育,以MMP-9和CD40/CD40L为指标,应用RT-PCR方法分别检测MMP-9和CD40/CD40L mRNA表达。结果:替米沙坦可同时下调AngⅡ刺激后的MMP-9、CD40和CD40L mRNA的表达,有剂量依赖性。替米沙坦100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L时,MMP-9mRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24%、42%及62%;CD40、CD40LmRNA的表达与AngⅡ组相比分别下降24%、39%、55%、16%、32%及40%。结论:替米沙坦体可下调外培养巨噬细胞MMP-9的表达,从而具有抗炎及稳定斑块作用,其作用机制与抑制CD40/CD40L通路有关。

替罗非班对体外培养THP-1源性巨噬细胞CD40及其配体表达的影响

目的探讨替罗非班对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激下THP-1源性巨噬细胞CD40和CD40配体(CD40L)表达的影响,探讨该类药物的抗炎及稳定斑块的作用机制。方法向体外培养的THP-1细胞中加入ox-LDL(80mg/L)共同孵育24h,然后与替罗非班共同孵育不同时间(分别为12、24、48h),应用流式细胞技术检测CD40和CD40L在细胞上的表达。采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CD40和CD40L mRNA表达。结果替罗非班既可下调细胞表面CD40和CD40L的表达,又能使CD40和CD40LmRNA表达下降,其阻断作用呈时间依赖性(P<0.05)。结论替罗非班可以拮抗巨噬细胞CD40和CD40L表达,并呈时间依赖性,这种作用可能是其减轻动脉粥样斑块炎症及稳定斑块的机制之一。

香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4^+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4^+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4^+T淋巴细胞共培养可以促进CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4^+T细胞共培养后分化的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4^+T细胞分化为CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg。

免疫炎症对良性前列腺增生细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨由巨噬细胞(MAs)诱导的免疫炎症对前列腺增生(BPH)细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法:MAs经过丙二醇甲醚醋酸酯(PMA)刺激后,与BPH细胞(BPH-1)一起培养,然后进行雄激素受体(AR)抑制剂或抗CD40L抗体处理。检测处理前和处理后T淋巴细胞(CD4、CD8)、B淋巴细胞(CD20)、巨噬细胞(MAs)(CD68)、雄激素受体(AR)和炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的生物标志物。用MTT法、集落形成试验和流式细胞仪观察细胞增殖和凋亡情况。采用定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western blot检测凋亡相关蛋白和MAPK信号通路相关蛋白的表达。结果:与空白对照组(B-BPH-1组)相比,MAs处理组(M-BPH-1组)细胞增殖率明显升高,凋亡率显著下降,Bcl-2表达升高,Bax表达降低,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达明显升高,AR、CD40和CD40L的mRNA和蛋白表达明显升高(P<0.01)。与生理盐水组相比,CD40L单克隆抗体低剂量组(L-CD40L组)和CD40L单克隆抗体高剂量组(H-CD40L)组细胞增殖能力均受到抑制,细胞克隆数量均减少,细胞凋亡率明显上升,Bcl-2表达降低,Bax表达显著升高,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达均下降(P<0.01)。与生理盐水组相比,AR抑制剂低剂量组(L-AR抑制剂组)和AR抑制剂高剂量组(H-AR抑制剂组)细胞增殖率明显均降低,克隆细胞数量均减少;H-AR抑制剂组细胞凋亡率升高,Bcl-2表达降低,Bax表达升高,免疫炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的表达均下降(P<0.01)。与B-BPH-1组相比,M-BPH-1组的JNK、ERK和p38的磷酸化水平明显升高,而H-CD40L组和H-AR抑制剂组JNK、ERK和p38磷酸化水平明显被抑制,并呈浓度依赖性(P<0.01)。结论:由MAs诱导的免疫炎症可通过激活MAPK信号通路调节AR和CD40/CD40L表达,促进BPH-1细胞增殖并抑制凋亡。