三阴性乳腺癌组织中肿瘤干细胞相关标记物CD44^+/CD24^(-/low)和ALDH1+的表达及意义

目的:探讨三阴性乳腺癌(TNBC)组织中乙醛脱氢酶1(aldehyde dehydrogenases l,ALDH1)和CD44^+/CD24^(-/low)的表达及其与临床预后的关系。方法:通过免疫组织化学SP法检测ALDH1和CD44^+/CD24^(-/low)等生物学指标在30例三阴性乳腺癌(TNBC)术后石蜡切片组织和30例非三阴性乳腺癌术后石蜡切片组织中的表达,并分析其与TNBC的临床预后因素的关系。结果:TNBC组织中ALDH1+表达率为46.67%,CD44^+/CD24^(-/low)阳性表达率为56.67%;非三阴性乳腺癌组织中ALDH1+表达率为16.67%,CD44^+/CD24^(-/low)阳性表达率为26.67%,TNBC组织中ALDH1和CD44^+/CD24^(-/low)阳性表达率明显高于非三阴性乳腺组织,两者比较差异有统计学意义(P<0.05)。腋窝淋巴结转移率在CD44^+/CD24^(-/low)与ALDH1均阳性表达组和非阳性表达组中分别为66.67%和23.81%(χ~2=4.983,P=0.035);局部复发和/或转移率分别为33.34%和0(χ~2=7.778,P=0.021)。结论:TNBC组织中ALDH1+和CD44^+/CD24^(-/low)过表达,可以作为判断TNBC患者预后的标记物。

CD44+/CD24-/low及ALDH1+与早期乳腺癌预后相关性比较

目的比较CD44^+/CD24^-/low及ALDH1+与早期乳腺癌预后的相关性。方法回顾性选取我科2007年4月至2008年2月因早期乳腺癌行手术患者510例,收集其术后石蜡包埋肿瘤标本,用免疫组化检测其CD44、CD24及ALDH1的表达情况,比较CD44^+/CD24^-/low组及ALDH1+组同总生存的相关性。结果 CD44^+/CD24^-/low的比例为22.9%,ALDH1+的比例为11.1%。在多因素Cox比例风险模型控制混杂变量后,CD44^+/CD24^-/low组总生存同非CD44^+/CD24^-/low组无显著性差异(HR=1.335,95%CI:0.812-2.193,P=0.254);ALDH1+组总生存低于ALDH1-组(HR=1.736,95%CI:0.385-0.864,P=0.008)。结论 ALDH1+可作为早期乳腺癌预后不良的标志物,而CD44^+/CD24^-/low表型不能作为早期乳腺癌预后不良的标志物。

小鼠乳腺癌4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的富集和鉴定

目的：无血清培养基（serum-free medium,SFM）悬浮培养小鼠乳腺癌细胞株4T1,富集并鉴定4T1细胞株中肿瘤干细胞样细胞。方法：通过含EGF、bFGF和B27等细胞因子的SFM培养富集4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞,将其接种于含血清培养基（serum-supplemented medium,SSM）,观察4T1肿瘤干细胞样细胞分化情况。应用细胞表面标志CD44^＋CD24^-/low和Hoechst33342染色法检测4T1细胞中肿瘤干细胞样细胞的比例,小鼠致瘤实验验证不同培养条件下4T1肿瘤干细胞样细胞的致瘤能力。结果：4T1细胞在SFM中能够存活、增殖,并形成细胞球,细胞球可连续传代,若重新接种于SSM中可贴壁分化。4T1细胞球中CD44^＋CD24^-/low细胞比例为6.4%68.9%,侧群（side population,SP）细胞比例为7.3%61.2%,均显著高于SSM中培养的4T1细胞（P〈0.05）;随着SFM中细胞球传代次数增加,CD44^＋CD24^-/low细胞和SP细胞的比例逐渐升高。小鼠致瘤实验结果显示,富集了肿瘤干细胞的细胞球比常规培养4T1细胞的致瘤性更强。结论：乳腺癌4T1细胞可在含多种生长因子的SFM中悬浮生长并形成细胞球,4T1细胞中含有的乳腺癌干细胞样细胞可通过SFM培养法富集。

无血清培养有效富集乳腺癌干细胞

目的探讨无血清培养技术从人乳腺癌MCF-7细胞株中有效富集乳腺癌干细胞的影响。方法采用无血清和有血清两种培养技术分别培养人乳腺癌MCF-7细胞株,观察并收集两种细胞,对CD24、CD44标志物进行免疫荧光染色;使用倒置荧光显微镜检测该标志物的表达差异;应用流式细胞仪检测不同亚群细胞的比例,并检测两种细胞周期的差异。结果无血清培养的细胞以大小不等的微球体形式在培养液中悬浮生长,有血清培养的细胞以类似多边形的形式在培养液中单层贴壁生长。CD44在悬浮微球体细胞和贴壁细胞中的表达无明显差异,CD24在悬浮微球体细胞中的表达明显减少;悬浮微球体细胞和贴壁细胞中CD44^+/ CD24^(-/low)表型细胞的比例分别为(86.93±0.53)%和(19.98±0.62)%(P<0.05),CD44^+/CD24^+表型细胞的比例分别为(12.68±0.59)%和(79.90±0.57)%(P<0.05)。分裂期(S)细胞在悬浮微球体细胞和贴壁细胞中的比例分别为(18.85±2.26)%和(43.91±1.81)%(P<0.05);静止期(G1)细胞的比例分别为(64.92±2.07)%和(39.82±1.77)%(P<0.05)。结论无血清培养技术可以有效富集CD44^+/ CD24^(-/low)表型乳腺癌干细胞。