M1型巨噬细胞对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及CD44-Smad1通路的介导作用

目的:观察M1型巨噬细胞对人乳腺癌细胞系-7(michigan cancer foundation-7,MCF-7)迁移和侵袭的影响,并对其作用机制进行探讨。方法:以CD44+乳腺癌MCF-7细胞为研究模型,转化人单核细胞系-1(human monocyte cell line,THP-1)为M1型巨噬细胞,培养并收集Ⅰ型巨噬细胞条件培养基(macrophage1-conditioned medium,M1CM),M1CM刺激模型细胞设为M1CM组,同时设立对照组;划痕实验检测细胞的迁移能力;侵袭小室实验考察细胞的侵袭能力;Western blot实验检测各蛋白表达变化;siRNA转染干扰模型细胞Smad1或CD44蛋白表达。结果:THP1经药物诱导后呈圆形、椭圆形、三角形贴壁生长,部分细胞可见伪足和凸起,细胞可吞噬墨汁粒呈蓝黑色,与M0巨噬细胞相比,细胞中M1巨噬细胞标志物CD80和人血清趋化因子配体9(human CXC-chemokine lig-9,CXCL-9)mRNA水平显著升高,差异具有统计学意义(t值分别为14.01和12.22,P值均<0.05)。与对照组相比,M1CM处理24 h显著增强模型细胞迁移和侵袭,差异具有统计学意义(t值分别为23.12和6.73,P值均<0.05)。与CD44小干扰对照(siCON1)相比,M1CM处理24 h明显诱导模型细胞Smad1和CD44蛋白表达增加,差异具有统计学意义(t值分别为6.66和6.25,P值均<0.05)。与Smad1小干扰对照(siCON2)相比,干扰CD44(siCD44)明显抑制M1CM诱导的模型细胞迁移和侵袭,差异具有统计学意义(t值分别为8.17和16.25,P值均<0.05);与siCON1相比,干扰Smad1明显抑制M1CM诱导的模型细胞迁移和侵袭(t值分别为7.38和5.62,P值均<0.05),siCD44明显抑制M1CM诱导的模型细胞Smad1蛋白表达上调(t值分别为14.65和10.02,P值均<0.05),差异均具有统计学意义;与siCON2相比,siSmad1明显抑制M1CM诱导的模型细胞CD44蛋白表达上调,差异具有统计学意义(t值分别为6.65和11.53,P值均<0.05)。结论:M1CM能诱导乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力增强,而该作用可能与CD44-Smad1环路信号增强有关。

Musashi2基因在肺鳞癌中的表达及其对Notch1信号通路介导的CD44v6(+)肺癌干细胞维持的研究

目的:研究Musashi2基因对CD44v6(+)肺癌干细胞干性的维持作用并探讨机制。方法:收集50例临床肺鳞癌组织,并使用qRT-PCR法检测Musashi2和CD44v6的表达。使用微珠分选分离法分选CD44v6(+)和CD44v6(-)的SK-MES-1细胞。CD44v6(-)细胞分为pcDNA-Musashi2组和pcDNA-NC组;CD44v6(+)细胞分为对照组、Notch1抑制剂RO4929097组。pcDNAMusashi2转染的CD44v6(-)细胞分为pcDNA-Musashi2组和pcDNA-Musashi2+RO4929097组。成球实验检测各组的成球能力。蛋白免疫印迹实验检测干细胞标志物Nanog、Oct4、Sox2、Notch1和Hey1以及Musashi2的蛋白表达。结果:Musashi2和CD44v6在肺鳞癌组织中的表达均高于癌旁组织(P<0.05)。与CD44v6(-)细胞比较,CD44v6(+)细胞的成球能力增强,Musashi2、Nanog、Oct4、Sox2、Notch1和Hey1表达上调(均P<0.05)。与pcDNA-NC相比较,pcDNA-Musashi2组的成球能力增强,且Musashi2、Nanog、Oct4、Sox2、Notch1和Hey1表达上调(均P<0.05)。与对照组比较,RO4929097组的成球能力降低,且Musashi2、Nanog、Oct4、Sox2、Notch1和Hey1表达下调(均P<0.05);与pcDNA-Musashi2组比较,pcDNA-Musashi2+RO4929097组成球能力降低,且Musashi2、Nanog、Oct4、Sox2、Notch1和Hey1表达均下调(均P<0.05)。结论:Musashi2通过Notch1信号来维持CD44v6(+)肺癌干细胞的干性。

肉桂醛调控CD44s/STAT3信号通路抑制胰腺癌细胞增殖和肿瘤细胞干性

目的探究肉桂醛(cinnamaldehyde,CA)对胰腺癌PANC-1细胞的增殖、肿瘤细胞干性的影响及其可能的作用机制。方法采用CCK8法检测不同浓度(0、5、15、20、30、50、70、100、150μmol·L^(-1))和不同时间段(24、48、72 h)CA处理对PANC-1细胞存活率的影响;CFSE染色实验检测CA对PANC-1细胞的增殖抑制作用;克隆形成实验检测CA对单个细胞增殖的影响;利用悬浮干细胞成球实验检测CA对成球能力的影响;qRT-PCR和Western blot检测干性相关Nanog、Sox-2及Oct-4基因的表达;流式细胞术分析CA处理前后的CD44^(+)CD24^(+)和ALDH^(+)干细胞亚群比例;Western blot分析CD44s、p-STAT3及STAT3蛋白表达。结果CA可呈浓度和时间依赖性的降低PANC-1细胞的存活率,并抑制肿瘤细胞增殖能力,明显抑制其克隆形成能力;干细胞成球实验结果显示,CA可使细胞成球体积减小,数量变少;CA处理后,细胞的3种干性基因的mRNA和蛋白表达水平均明显降低;CA处理还可减少癌细胞中CD44^(+)CD24^(+)和ALDH^(+)干细胞亚群比例;Western blot结果表明CA可下调CD44s和p-STAT3的表达水平,而对STAT3蛋白表达无影响,加入STAT3激动剂Colivelin TFA可部分回复CA对癌细胞增殖和肿瘤细胞干性的抑制作用。结论CA可显著抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖和肿瘤细胞干性,其机制可能与调控CD44s/STAT3信号通路相关。

牙髓炎的发病机制和分子靶标研究

目的鉴定牙髓炎的发病机制和分子靶标。方法通过GEO数据GSE77459 (2016年2月)和GSE92681(2017年12月)确定牙髓炎组织中的差异表达基因。富集分析和基因集富集分析深入评价差异基因在牙髓炎过程中的作用机制。通过PPI网络和分子实验鉴定出牙髓炎相关的关键因子。结果在GSE77459数据的牙髓炎组织中发现了1280个差异表达基因(DEGs)。经过GSE92681数据集验证到81个DEGs。富集分析和基因集富集分析发现DEGs与免疫及炎症反应显著相关。PPI网络分析筛选了55个网络基因,并识别出CD44为核心网络因子和调控基因。通过实时定量聚合酶链反应和Western blot验证了CD44在牙髓炎组织中显著表达上调。结论 CD44是牙髓炎的潜在生物标志物及治疗靶标,并通过ERK1/2信号通路参与到牙髓炎的发展过程中。

耳、鼻、咽、喉

广东鼻咽癌高危家族成员发病危险性的流行病学研究//EB病毒潜伏膜蛋白1介导鼻咽癌细胞中转录因子Ets-1表达的实验研究//EGCG干预LMP1激活的AP-1信号转导通路//鼻咽癌的p73蛋白表达与细胞凋亡关系//鼻咽癌患者血清VEGF、CD44s。

ENO1在胃癌干细胞中表达及其与胃癌侵袭转移的相关性研究

[目的]探讨ENO1在胃癌干细胞中的表达及其对胃癌侵袭转移的影响。[方法]以胃癌SNU-5模型,实时荧光定量PCR和双色细胞免疫荧光检测ENO1在其分选的CD44^+细胞中的表达情况。运用慢病毒载体稳定干扰SUN-5中ENO1的表达,并用实时荧光定量PCR和Western blot检验干扰效率。流式细胞术分选稳定干扰ENO1的SNU-5中CD44^+细胞后(shRNA-ENO1),实时荧光定量PCR检测其Oct-4、Sox 2以及干性相关基因Nanog的表达,同时分别进行细胞成球实验、体外侵袭与体内致瘤的胃癌干细胞生物学特性研究,Western blot检测ENO1对胃癌干细胞侵袭转移影响的相关分子机制。[结果] SNU-5的CD44^+细胞中ENO1基因和蛋白表达明显高于CD44-细胞,并建立稳定干扰ENO1的SUN-5。shRNA-ENO1细胞中干性基因Oct-4、Sox 2和Nanog中m RNA的表达显著低于PLV-Ctr细胞(P<0.05)。与PLV-Ctr细胞相比较,shRNA-ENO1细胞的自我更新能力、侵袭能力和肿瘤重量显著降低。Western blot检测shRNA-ENO1细胞中Vimentin、Snail和N-cadherin下调表达,同时E-cadherin上调表达,并伴随AKT和PI3K的磷酸化水平降低,提示ENO1的作用可能通过PI3K/AKT信号通路激活。[结论] ENO1在胃癌干细胞中高表达,其在调控胃癌侵袭转移能力中发挥重要作用。

乳腺癌多柔比星耐药细胞的生物学特性

目的 :探讨乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADR)耐药细胞的生物学特性。方法 :以人乳腺癌MCF-7细胞为亲本细胞,建立对ADR耐药的人乳腺癌MCF-7/ADR细胞。应用刃天青法检测ADR对MCF-7/ADR和MCF-7细胞的半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)值,应用平板克隆形成实验检测MCF-7/ADR和MCF-7细胞的克隆形成能力。FCM法和免疫荧光法分析MCF-7/ADR和MCF-7细胞中CD44+/CD24-和乙醛脱氢酶1(acetaldehyde dehydrogenase 1,ALDH1)+干细胞亚群所占百分比,蛋白质印迹法检测ALDH1蛋白及调控干细胞的Hedgehog信号通路中Smo(Smoothened)和Gli1蛋白的表达。结果 :ADR对MCF-7/ADR细胞的IC50值明显高于MCF-7细胞(P<0.01),耐药倍数约为385倍。MCF-7/ADR细胞的克隆形成能力显著高于MCF-7细胞(P<0.01)。MCF-7/ADR细胞中CD44+/CD24-和ALDH1+干细胞亚群所占百分比显著高于MCF-7细胞(P值均<0.01)。MCF-7/ADR细胞中ALDH1蛋白及Hedgehog信号通路中Smo和Gli1蛋白的表达水平显著高于MCF-7细胞(P<0.01,P<0.01,P<0.05)。结论:乳腺癌ADR耐药细胞中CD44+/CD24-和ALDH1+干细胞亚群所占百分比以及Hedgehog干细胞调控信号通路相关蛋白Smo和Gli1的表达水平升高,可能与乳腺癌细胞对ADR的耐药相关。