M1型巨噬细胞对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响及CD44-Smad1通路的介导作用

目的:观察M1型巨噬细胞对人乳腺癌细胞系-7(michigan cancer foundation-7,MCF-7)迁移和侵袭的影响,并对其作用机制进行探讨。方法:以CD44+乳腺癌MCF-7细胞为研究模型,转化人单核细胞系-1(human monocyte cell line,THP-1)为M1型巨噬细胞,培养并收集Ⅰ型巨噬细胞条件培养基(macrophage1-conditioned medium,M1CM),M1CM刺激模型细胞设为M1CM组,同时设立对照组;划痕实验检测细胞的迁移能力;侵袭小室实验考察细胞的侵袭能力;Western blot实验检测各蛋白表达变化;siRNA转染干扰模型细胞Smad1或CD44蛋白表达。结果:THP1经药物诱导后呈圆形、椭圆形、三角形贴壁生长,部分细胞可见伪足和凸起,细胞可吞噬墨汁粒呈蓝黑色,与M0巨噬细胞相比,细胞中M1巨噬细胞标志物CD80和人血清趋化因子配体9(human CXC-chemokine lig-9,CXCL-9)mRNA水平显著升高,差异具有统计学意义(t值分别为14.01和12.22,P值均<0.05)。与对照组相比,M1CM处理24 h显著增强模型细胞迁移和侵袭,差异具有统计学意义(t值分别为23.12和6.73,P值均<0.05)。与CD44小干扰对照(siCON1)相比,M1CM处理24 h明显诱导模型细胞Smad1和CD44蛋白表达增加,差异具有统计学意义(t值分别为6.66和6.25,P值均<0.05)。与Smad1小干扰对照(siCON2)相比,干扰CD44(siCD44)明显抑制M1CM诱导的模型细胞迁移和侵袭,差异具有统计学意义(t值分别为8.17和16.25,P值均<0.05);与siCON1相比,干扰Smad1明显抑制M1CM诱导的模型细胞迁移和侵袭(t值分别为7.38和5.62,P值均<0.05),siCD44明显抑制M1CM诱导的模型细胞Smad1蛋白表达上调(t值分别为14.65和10.02,P值均<0.05),差异均具有统计学意义;与siCON2相比,siSmad1明显抑制M1CM诱导的模型细胞CD44蛋白表达上调,差异具有统计学意义(t值分别为6.65和11.53,P值均<0.05)。结论:M1CM能诱导乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力增强,而该作用可能与CD44-Smad1环路信号增强有关。