小鼠缺血性脑卒中后病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞种类以及基因表达谱分析

目的探讨小鼠缺血性脑卒中发生后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞浸润情况以及基因表达的动态变化。方法将60只6~8周龄成年雄性C57鼠采用随机数字表法分为6组:假手术组(Sham组)和缺血性脑卒中后第1天(D1L组)、第3天组(D3L组)、第7天组(D7L组)、第14天组(D14L组)和第21天组(D21L组)。Sham组小鼠给予缺血性脑卒中处理但不进行大脑中动脉结扎,缺血性脑卒中各组小鼠给予缺血性脑卒中手术处理。按上述时间点取病灶组织消化后,流式细胞术分选CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞,然后应用RNA-seq技术,对小鼠不同时间点分选的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞进行基因表达谱测序、生物信息学分析以及细胞种类验证。结果在缺血性脑卒中发生后,γδT淋巴细胞和天然杀伤性T淋巴细胞的数目逐渐上升,在D3达到高峰,然后逐渐下降趋于稳定;CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞数目逐渐上升,在D14达到高峰;调节性T淋巴细胞数目在D14出现明显的上升。结论缺血性脑卒中发生后不同时间点,不同种类的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞从外周循环系统浸润到病灶组织,早期主要以发挥先天免疫功能的CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞为主,中晚期主要以发挥适应性免疫的CD4 T淋巴细胞和CD8 T淋巴细胞为主。本研究首次运用转录组测序技术和流式细胞术系统阐述了缺血性脑卒中后不同时间点病灶部位CD45^(+)CD11b^(-)免疫细胞的浸润情况以及基因表达特点,为研究缺血性卒中发生、发展的分子机制提供基础。

ICAM-1、MMP-9及NF-κB在胆管癌中的表达及与外周血免疫抑制细胞的关系

目的探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)及NF-κB在胆管癌中的表达及外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)髓源性抑制细胞(MDSC)的关系。方法选取昆明医科大学附属甘美医院2017年12月至2019年12月收治的胆管癌患者60例研究对象。采用免疫组化法测定胆管癌组织与癌旁正常组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白;采用流式细胞术检测患者外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DRMDSC比例。比较胆管癌组织与癌旁组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达;不同病理特征ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达及外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例;ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达与外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例相关性。结果胆管癌组织ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白和NF-κB蛋白表达阳性率均高于癌旁正常组(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移ICAM-1蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);III~IV期ICAM-1蛋白表达阳性率高于I~II期(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和临床分期MMP-9蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);淋巴结转移MMP-9蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移NF-κB蛋白表达比较无明显差异(P>0.05);III~IV期NF-κB蛋白表达阳性率高于I~II期(P<0.05)。不同性别、年龄、病理分级和淋巴结转移CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例比较无明显差异(P>0.05);III~IV期CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例高于I~II期(P<0.05)。ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表达与CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例呈线性正相关。结论ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表在胆管癌中高表达,外周血中CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例升高,且ICAM-1蛋白、MMP-9蛋白及NF-κB蛋白表达与CD14^(+)CD11b^(+)HAL-DR^(-)MDSC比例呈线性正相关。

Lewis肺癌荷瘤小鼠CD4^+CD25^+Foxp3^+调节性T细胞及髓样抑制细胞与肿瘤生长的关系

为研究Lewis肺癌荷瘤鼠CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞和Gr1+CD11b+髓样抑制细胞(Gr1+CD11b+MDSC)比例变化特点,探讨其在诱导肿瘤免疫耐受中的作用,建立了Lewis肺癌模型,观测肿瘤体积变化,绘制肿瘤体积变化曲线;采用流式细胞技术分别于模型建立第0、14、21天检测脾脏、肿瘤引流淋巴结两种细胞比例;荧光定量RT-PCR检测荷瘤小鼠肺组织Foxp3 mRNA的表达。结果表明,随着肿瘤的进行性生长,脾脏及肿瘤引流淋巴结CD4+CD25+Foxp3+Treg、Gr1+CD11b+MDSC比例均明显升高,其中以脾脏的变化最为显著。在荷瘤第21天时,脾脏中两者比例分别为16.97%±1.86%,28.64%±2.32%,与正常对照组比较具有显著的意义。而在肿瘤引流淋巴结中两者细胞的比例分别为18.84%±3.48(P<0.01),3.46%±0.56(P<0.01)。同时RT-PCR结果显示,Foxp3 mRNA在荷瘤鼠肺转移灶组织明显高于正常对照组(P<0.01);结论:CD4+CD25+Treg与Gr1+CD11b+MDSC诱导的肿瘤免疫抑制与肿瘤生长及转移密切相关。