黄芪甲苷调控CD45 PTPase介导抗脓毒症免疫机制的研究

目的研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI IV)抗脓毒症效应及免疫学机制,为黄芪临床应用脓毒症治疗提供科学依据。方法采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、Anti-CD45单抗组、Anti-CD45单抗+黄芪甲苷组。H&E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测脾脏Th1细胞表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Th1细胞相关基因(IL-2、Tbet、STAT1和STAT4)mRNA的表达。结果与模型组比较,黄芪甲苷干预显著提高脓毒症模型小鼠生存率,减轻模型小鼠肺组织病理损伤。CD45抗体干预后,阻断了黄芪甲苷提高生存率和减轻肺组织病理损伤的作用。机制研究结果表明,黄芪皂苷显著增加模型小鼠Th1细胞(CD4+IFN-γ+)比例,上调Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1、STAT4)mRNA表达,CD45抗体干预后,减少了黄芪甲苷促脾淋巴细胞Th1细胞比例,阻断黄芪皂苷促Th1细胞相关基因。结论黄芪甲苷通过调控CD45分子,提高Th1细胞介导的免疫反应,介导抗脓毒症效应。

抗纤灵对5/6肾切除大鼠骨髓来源的成纤维细胞表型转化的影响

目的观察抗纤灵对5/6肾切除大鼠骨髓来源的成纤维细胞表型转化的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组和造模组,造模组以5/6肾切除方法建立慢性肾衰竭动物模型,1周后按血肌酐水平将造模大鼠分为模型组、福辛普利组和抗纤灵组。各给药组给予相应药物灌胃,模型组和假手术组给予等量生理盐水灌胃,8周后采用实时荧光定量PCR和蛋白免疫印迹法测定各组大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原和CD45基因及蛋白的表达。结果模型组大鼠表达α-SMA mRNA、Ⅰ型胶原mRNA和CD45mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.001或P<0.05),抗纤灵组与模型组比较均明显下降(P<0.01或P<0.05);模型组大鼠表达α-SMA、Ⅰ型胶原和CD45蛋白水平较假手术组明显升高(P<0.001),抗纤灵组与模型组比较均显著下降(P<0.001)。结论抗纤灵可降低Ⅰ型胶原和CD45的表达,抑制骨髓来源的成纤维细胞表型转化,从而延缓肾纤维化进程,保护残肾功能。

黄芪皂苷II抗肝癌肺转移效应及作用机理的研究

目的:研究黄芪皂苷对原发性肝癌肺转移抑制效应及作用机理。方法:建立H22肝癌肺转移模型,随机分为荷瘤模型组、黄芪皂苷II 0.3 mg/kg、1 mg/kg组和黄芪皂苷II 0.3 mg/kg+抗CD451000 mg/kg抗体组。药物干预后,检测肺内肿瘤转移数和肺病理损伤程度;酶联免疫吸附(ELISA)法检测Th1细胞因子(IL-2和IFN-γ)产生水平;流式细胞术检测脾淋巴细胞Ki-67和胞内Th1细胞表达水平;Western blot检测脾淋巴细胞LCK(phospho-Tyr505)和STAT1磷酸化水平。结果:与模型组比较,黄芪皂苷0.3 mg/kg、1 mg/kg药物干预组肺转移灶数目显著减少,肺转移病理损伤减轻,荷瘤小鼠淋巴细胞的增殖功能(CD4^+Ki67+T细胞)明显增加,Th1型细胞因子IFN-γ和IL-2的产生明显增加,肝癌肺转移荷瘤小鼠淋巴细胞Th1细胞(CD4^+IFN-γ)比例明显上调,促进LCK(phospho-Tyr505)去磷酸化。抗CD45抗体干预显著阻断黄芪皂苷II抗肺转移效应和促增殖作用,明显减少黄芪皂苷II促Th1型细胞因子(IFN-γ和IL-2)的产生和Th1细胞表达水平。同时抗CD45抗体干预显著阻断黄芪皂苷II促LCK 505位去磷酸化。结论:黄芪皂苷具有显著抗肺转移效应,其作用机理与激活CD45蛋白酪氨酸磷酸酯酶,从而促进Th1细胞因子释放及T淋巴细胞的激活有关。