循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞与接受EGFR-TKI治疗的转移性非小细胞肺癌预后相关

目的探索外周血循环淋巴细胞的基线水平及动态变化与接受表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)治疗的EGFR突变阳性的转移性非小细胞肺癌患者预后之间的相关性。方法设计一个回顾性队列,包括在北京协和医院接受EGFR-TKI治疗的40例非小细胞肺癌患者。在EGFR-TKI治疗期间,使用流式细胞仪测量术收集外周血循环淋巴细胞亚群进行动态监测,并通过电话随访每位患者的生存情况,分别比较基线以及治疗1月后外周血循环淋巴细胞亚群与无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)的关系。结果在接受EGFR-TKI治疗的患者中,更高的基线循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与更高的肿瘤治疗应答相关(P<0.001)。整个人群的PFS为27.1个月,而OS未达到。然而,基线CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与中位PFS无相关性。此外,在EGFR-TKI治疗期间,CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数稳定或升高的患者的PFS明显长于CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数降低的患者(29.1个月对比9.4个月;P<0.001)。结论更高的基线循环CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数与更好的EGFR-TKI治疗应答相关,CD4^(+)CD45RA^(+)CD62L^(+)T细胞计数的动态变化与PFS延长有关。

腔镜手术对直肠癌患者免疫平衡及CD_4^+CD_(45)RA^+T和CD_4^+CD_(45)RO^+T细胞的影响

目的探讨腔镜手术对直肠癌患者免疫平衡及CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RO+T细胞表达的影响。方法67例直肠癌患者中,33例拟进行腹腔镜手术,设为L组,34例拟进行开腹手术,设为O组。观察术前1 d、术后2 d、术后7 d患者Th1、Th2、CD4+CD45RA+T、CD4+CD45RO+T细胞表达水平。结果 L组患者术前和术后Th1、Th2、CD4+CD45RA+T、CD4+CD45RO+T细胞表达无显著差异(P>0.05)。O组术后2 d、术后7 d患者Th1细胞表达水平显著下降(P<0.01),Th2细胞表达显著升高(P<0.01);CD4+CD45RA+T细胞的表达显著升高(P<0.01),CD4+CD45RO+T细胞的表达显著降低(P<0.05)。结论腹腔镜手术较开腹手术对直肠癌患者的免疫平衡、CD4+CD45RA+T细胞和CD4+CD45RO+T细胞表达的影响小,对机体细胞免疫功能干扰较轻。

SLE患者CD45RA^＋和CD45RO^＋T细胞亚群的变化

利用流式细胞术及免疫双荧光染色法，检测３５例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者外周血ＣＤ４５ＲＡ￣＋和ＣＤ４５ＲＯ￣＋Ｔ细胞亚群。结果表明，ＳＬＥ患者ＣＤ４￣＋细胞降低，ＣＤ８￣＋细胞增高，ＣＤ４￣＋／ＣＤ８￣＋降低；ＣＤ４￣＋ＣＤ４５ＲＡ￣＋细胞在病情活动期降低，在稳定期回升；ＣＤ４￣＋ＣＤ４５ＲＯ￣＋细胞则在活动期有增高倾向，在稳定期下降；ＣＤ８￣＋ＣＤ４５ＲＡ￣＋及ＣＤ８￣＋ＣＤ４５ＲＯ￣＋细胞均在活动期增高，又均在稳定期降至正常水平。提示ＣＤ４５ＲＡ￣＋和ＣＤ４５ＲＯ￣＋Ｔ细胞在ＳＬＥ发病机理中可能占有重要意义。

慢性乙型肝炎患者外周血CD45RA^+、CD45RO^+ T淋巴细胞亚群的特点及临床意义

目的:探讨慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群的特点及其与肝病病情的关系。方法:采集46例轻中度慢性乙型肝炎患者、58例重度慢性乙型肝炎患者和30例健康人的外周抗凝血,应用流式细胞技术三色荧光分析法对其外周血中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群进行检测。结果:轻中、重度慢性乙型肝炎患者与正常人相比,其外周血中CD4+、CD8+T细胞均无明显改变;CD8+CD45RA+T细胞均明显降低,CD8+CD45RO+T细胞均明显增高,而CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+T细胞均无明显改变;重度慢性乙型肝炎患者与轻中度慢性乙型肝炎患者相比,CD8+CD45RA+T细胞明显降低(P<0.05),CD8+CD45RO+T细胞明显升高(P<0.05)。结论:乙型肝炎慢性化过程中,CD8+CD45RO+T细胞起重要作用且与慢性乙型肝炎患者病情的进展呈正相关;检测CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群比检测CD4+和CD8+T细胞亚群更能正确、充分、全面地了解慢性乙型肝炎的发病机制和预后,从而有效地指导临床治疗。

补肾益气扶正汤联合化疗对肾癌根治性切除术后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞的影响

目的观察补肾益气扶正汤联合化疗对肾癌根治性切除术后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞及不良反应发生情况的影响。方法将146例肾癌根治性切除术后患者随机分为2组,对照组73例给予化疗治疗,研究组73例给予补肾益气扶正汤联合化疗治疗,2组均持续治疗3个化疗疗程。记录2组治疗前后中医症状积分及KPS评分,检测2组治疗前后外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞水平,统计2组治疗后临床疗效及治疗期间不良反应发生情况。结果治疗后,2组中医症状积分均较治疗前显著降低(P均<0.05),且研究组显著低于对照组(P<0.05);研究组临床治疗总有效率显著高于对照组(P<0.05);2组CD4^+CD45RA^+T细胞均较治疗前显著降低(P均<0.05)、CD4^+CD45RO^+T细胞均较治疗前显著升高(P均<0.05),且研究组CD4^+CD45RA^+T细胞均显著低于对照组(P均<0.05)、CD4^+CD45RO^+T细胞均显著高于对照组(P均<0.05);2组KPS评分均较治疗前显著升高(P均<0.05),且研究组显著高于对照组(P<0.05)。治疗期间,研究组消化道反应、感冒样症状、神经系统症状以及白细胞降低发生率均显著低于对照组(P均<0.05)。结论补肾益气扶正汤联合化疗可明显减轻肾癌根治性切除术后患者症状体征,调节外周血CD4^+CD45RA^+和CD4^+CD45RO^+T细胞水平,减少不良反应,且疗效更好。

类风湿关节炎患者外周血CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞比例与炎症指标和自身抗体的关系研究

目的:探讨类风湿关节炎(RA)患者外周血CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞群与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-γ的关系。方法:选取福建医科大学附属第一医院56例RA患者和63例健康体检者。根据实验室正常参考范围将ESR、CRP、RF、抗CCP抗体与4种细胞因子的检测结果分为阴性组与阳性组,比较外周血中CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞群的比例与4种细胞因子、ESR、CRP、RF和抗CCP抗体的关系。采用Mann-Whitney U检验、t检验、χ^(2)检验对指标进行组间比较,CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞群的比例与年龄的相关性采用Pearson相关性分析。结果:RA患者的CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞群的比例低于健康体检者(P<0.05);抗CCP抗体阳性组的细胞群比例高于阴性组(P=0.001);CRP阳性组的细胞群比例低于阴性组(P<0.05);TNF-α阳性组的细胞群比例低于阴性组(P<0.05)。结论:RA患者外周血CD45^(−)CD31^(−)PDPN^(+)细胞群比例与抗CCP抗体、CRP和TNF-α有关。

自身免疫病患者自体造血干细胞移植后CD4^+CD45RA^+及CD4^+CD45RO^+T辅助淋巴细胞亚群的改变

目的检测严重自体免疫病(SA ID)患者自身造血干细胞移植(AHSCT)前后外周血中CD 4+CD 45RA+(na ive T h细胞)及CD 4+CD 45RO+(记忆T h细胞)T辅助淋巴细胞亚群的变化,探讨na ive T h细胞和记忆T h细胞在AHSCT诱导自身免疫病缓解中的作用。方法使用三色流式细胞术检测SA ID患者AHSCT前1 w及移植后1~3 m o外周血中CD 4+CD 45RA+及CD 4+CD 45RO+T辅助淋巴细胞亚群的改变,na ive T h细胞表型为CD 4+CD 45RA+,记忆T h细胞表型为CD 4+CD 45RO+。分析各细胞亚群占CD 4+T辅助淋巴细胞的百分比,并比较移植前后na ive T h、记忆T h细胞的变化。结果AHSCT后,患者外周血中记忆T h细胞显著增高,P<0.05;na ive T h细胞和CD 45RO+CD 45RA+双阳性细胞均显著下降,P<0.05。结论AHSCT治疗SA ID患者,患者体内na ive T h细胞和CD 45RO+CD 45RA+双阳性T h细胞百分率显著减少,这是AHSCT诱导SA ID缓解的机制之一。

应用四色荧光分析技术测定造血干细胞移植后患者CD45RA^+细胞的变化

目的探讨流式细胞技术测定造血干细胞移植(HSCT)后患者外周血中初始T细胞CD45RA+的变化与临床意义。方法收集来自南方医院的49例造血干细胞移植病人的移植前、移植之后15、30、90和180 d不同时间点的90份肝素抗凝外周血标本。应用流式细胞技术测定外周血CD4+CD45RA+/CD8+CD45RA+细胞数的动态变化。结果在49名造血干细胞移植患者外周血标本中选择90份样本进行检测,移植后30 d,CD8+CD45RA+细胞即能恢复到正常水平,而CD4+CD45RA+细胞产量半年之内仍低于正常并持续缓慢增长。经HSCT患者的胸腺再生输出功能明显低于自体干细胞移植患者(P<0.01)。异体外周血干细胞移植患者的胸腺恢复能力显著比异体骨髓移植患者更快(P<0.05)。结论通过流式细胞仪检测患者外周血中CD4+CD45RA+/ CD8+CD45RA+细胞的变化,可以相对定量地检测患者的胸腺再生输出功能,并通过测量新生T细胞的合成来监视胸腺功能在免疫重建中的作用,为临床干细胞移植治疗提供有力的数据。

结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA^+/CD45RO^+淋巴细胞表型分析

目的分析结直肠癌患者与健康受试者外周血CD45RA^+/CD45RO^+系列T淋巴细胞表达的差异。方法运用流式细胞术(FCM)检测2010年1月至2013年12月解放军总医院收治的109例结直肠癌患者(试验组)与64例健康受试者(对照组)外周血CD45RA^+、CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+、CD4^+CD45RO^+T淋巴细胞亚群表达情况,统计分析试验组和对照组性别和年龄的分布是否存在差异,然后进一步分析CD45RA等T淋巴细胞亚群与结直肠癌临床分期的关系。结果Ⅰ^+Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期结直肠癌患者外周血CD45RA^+细胞百分率[三者分别为(56.23±7.75)%、(58.86±7.66)%和(59.02±9.71)%]明显高于对照组[(48.94±12.66)%],差异具有统计学意义(F=11.128,P<0.001);Ⅲ期和Ⅳ期患者的CD45RO^+细胞百分率[分别为(47.19±8.30)%和(45.41±10.45)%]则明显低于对照组[(53.43±11.75)%],差异具有统计学意义(F=5.817,P=0.00083);Ⅲ期和Ⅳ期患者CD45RA^+/CD45RO^+的比值(分别为1.32±0.46和1.43±0.63)明显高于对照组(1.00±0.47),差异具有统计学意义(F=6.986,P=0.000185);Ⅰ^+Ⅱ期患者CD4^+CD45RO^+细胞百分率[(31.37±6.39)%]明显高于对照组[(27.49±7.19)%],差异具有统计学意义(F=2.368,P=0.009);Ⅳ期患者CD4^+CD45RA^+/CD4^+CD45RO^+的比值(0.66±0.39)明显高于Ⅰ+Ⅱ期的患者(0.49±0.23),差异具有统计学意义(F=1.812,P=0.029);各组之间CD4^+CD45RA^+细胞百分率无明显统计学差异(F=0.637,P=0.592)。结论随着临床分期的增加,结直肠癌患者外周血CD45RA^+细胞逐渐增加而CD45RO^+细胞逐渐减少,反映出结直肠癌患者随着肿瘤的进展其免疫功能逐渐抑制、逐渐降低的动态过程;CD4^+CD45RA^+细胞和CD4^+CD45RO^+细胞在反映结直肠癌患者机体免疫功能方面不如CD45RA^+细胞和CD45RO^+细胞敏感。

CD45RA^+细胞去除后的外周血干细胞产物体外抗肿瘤活性

目的:探索体外利用CD45RA磁珠分选供者外周血干细胞(PBSCs)中CD45RA^+细胞(处女T淋巴细胞)的可行性;比较去除CD45RA^+细胞后的干细胞产物(CD45RA-depleted cells)体外抗肿瘤活性有无明显减弱。方法:CD45RA磁珠分选供者外周血干细胞中的CD45RA^+细胞;流式细胞仪检测分选纯度以及分选后干细胞产物的细胞成分;分选前后干细胞产物分别与K562/Jurkat肿瘤株共培养,CCK-8检测其体外抗肿瘤活性。结果:CD45RA磁珠分选供者PBSCs中CD45RA^+细胞有效率达95.41%(88.21%~98.18%),分选后干细胞产物主要以CD3+CD4+和CD3+CD8+细胞为主,CD45RA-depleted产物与PBSCs相比体外抗肿瘤效应无明显减低(P>0.05)。结论:利用CD45RA磁珠去除供者PBSCs中的处女T淋巴细胞是可行的,去除CD45RA^+细胞后的DBSCs产物体外仍具有抗肿瘤活性。

老年男性外周血CD4^+和CD8^+ T细胞中CD45RA^+和HLA-DR^+的表达研究

目的探讨不同年龄组老年男性外周血CD4+和CD8+T细胞中CD45RA+和HLA-DR+的表达。方法采用逐步入组方法入组101例老年男性,分青老年组(65岁及以上),中老年组(75岁及以上)和老老年组(85岁及以上)三组,用多色流式细胞仪检测外周血CD45RA+和HLA-DR+的表达,随访两年。结果各组间CD45RA+和HLA-DR+T细胞的表达轻微下降,其中仅老老年组与青老年组之间CD4+HIL-DR-和CD8+HIL-DR+T细胞的表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论老年男性外周血CD4+和CD8+T细胞中CD45RA+和HLA-DR+的表达可能存在随龄性下降趋势。

黄芪甲苷调控CD45 PTPase介导抗脓毒症免疫机制的研究

目的研究黄芪甲苷(Astragaloside IV,ASI IV)抗脓毒症效应及免疫学机制,为黄芪临床应用脓毒症治疗提供科学依据。方法采用盲肠结扎穿刺术(Cecal ligation and puncture,CLP)构建脓毒症小鼠模型,随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷组、Anti-CD45单抗组、Anti-CD45单抗+黄芪甲苷组。H&E染色检测肺组织病理损伤;流式细胞术检测脾脏Th1细胞表达水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Th1细胞相关基因(IL-2、Tbet、STAT1和STAT4)mRNA的表达。结果与模型组比较,黄芪甲苷干预显著提高脓毒症模型小鼠生存率,减轻模型小鼠肺组织病理损伤。CD45抗体干预后,阻断了黄芪甲苷提高生存率和减轻肺组织病理损伤的作用。机制研究结果表明,黄芪皂苷显著增加模型小鼠Th1细胞(CD4+IFN-γ+)比例,上调Th1细胞相关基因(IL-2、T-bet、STAT1、STAT4)mRNA表达,CD45抗体干预后,减少了黄芪甲苷促脾淋巴细胞Th1细胞比例,阻断黄芪皂苷促Th1细胞相关基因。结论黄芪甲苷通过调控CD45分子,提高Th1细胞介导的免疫反应,介导抗脓毒症效应。

AHZ和PHN患者CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+T细胞的表达及其意义

目的探讨急性期带状疱疹和带状疱疹后遗神经痛患者外周血CD4^+CD45RO^+、CD4^+CD45RA^+T细胞的表达及其意义。方法收集带状疱疹患者47例(其中急性期带状疱疹患者35例,带状疱疹后遗神经痛患者12例)、健康对照者20例,采用流式细胞术检测研究对象外周血中CD4^+CD45RA^+、CD4^+CD45RO^+T细胞水平并进行比较。结果急性期带状疱疹患者CD4^+CD45RA^+T细胞水平明显低于带状疱疹后遗神经痛患者及健康对照者(P<0.05);急性期带状疱疹患者CD4^+CD45RO^+/CD4^+CD45RA^+比值均明显高于带状疱疹后遗神经痛患者及健康对照者(P<0.05)。结论CD4^+CD45RA^+T细胞的减少可能与急性期带状疱疹的发病相关。

系统性红斑狼疮患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子Bach2的表达及其影响

目的·研究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中转录因子BTB与CNC同源基因2(BTB and CNC homology 2,Bach2)的表达及其对细胞功能的影响。方法·采用流式细胞仪分选获得活动期SLE患者(SLE组)和健康对照者(对照组)外周血CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞,荧光定量PCR和Western blotting检测该类细胞中Bach2的表达;分析SLE患者该类细胞中Bach2的平均荧光强度(median fluorescence intensity,MFI)与SLE疾病活动指数(systemic lupus erythematosus disease activity index,SLEDAI)的相关性。采用流式细胞术比较SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞和IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞中Bach2的MFI。在Bach2过表达体系中,采用流式细胞术检测CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达IL-17的细胞比例,采用ELISA方法检测细胞培养上清液中IL-17的含量。结果·与对照组相比,SLE组CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的m RNA和蛋白表达水平均显著降低(均P<0.01);SLE组Bach2的MFI与SLEDAI呈显著负相关(R2=0.433,P=0.001)。SLE患者IL-17+CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2的MFI显著低于IL-17-CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞(P=0.013)。当Bach2过表达时,SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞表达炎症因子IL-17的细胞比例明显下降(P=0.032),细胞培养上清液中IL-17含量显著降低(P=0.008)。结论·SLE患者CD4^+CD25^+CD45RA^-T细胞Bach2表达下降,在该类细胞中过表达Bach2可使IL-17表达下降。

cGVHD患者外周血中CD45RA^+和CD45RO^+ T淋巴细胞亚群的特点及其临床意义

目的:探讨同种异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)后发生慢性移植物抗宿主病(cGVHD)患者外周血中CD45RA+和CD45RO+T淋巴细胞亚群特点及其与cGVHD发生之间的关系。方法:回顾性研究广东省人民医院2001年3月~2009年9月64例造血干细胞移植植入成功的患者,其中无cGVHD发生21例,轻度cGVHD 15例,中度cGVHD 18例,重度cGVHD 10例,应用流式细胞术,对其外周血中CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T淋巴细胞亚群进行检测。结果:与无cGVHD患者相比,cGVHD患者CD4+CD45RA+T细胞百分比均明显降低(P<0.05),CD4+CD45RO+T细胞百分比均明显增高(P<0.05),而CD8+CD45RA+、CD8+CD45RO+T细胞百分比均无明显改变。轻、中、重度的cGVHD患者之间比较,CD4+CD45RA+、CD4+CD45RO+、CD8+CD45RA+和CD8+CD45RO+T细胞百分比均无明显改变。结论:CD4+CD45RA+和CD4+CD45RO+T细胞可能对cGVHD的发生有重要意义。

CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与ACS患者GRACE评分的关系

目的探讨CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与急性冠状动脉综合征(ACS)患者全球急性冠状动脉事件注册(GRACE)评分之间的关系。方法选取2018年3月至2020年3月武警特色医学中心收治的212例ACS患者作为研究组,并以同期168例非冠心病检查者作为对照组,根据GRACE评分结果对ACS组患者病情进行分级,分为低危组(GRACE<109分,68例)、中危组(109分≤GRACE≤140分,62例)以及高危组(GRACE>140分,82例)。检测各组CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平。应用Pearson相关性分析CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平与ACS患者GRACE评分之间相关性,并应用受试者工作特征(ROC)曲线分析CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平诊断ACS患者的价值。结果研究组ACS患者生化检查指标总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)、脑利钠肽前体(Pro-BNP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)以及CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞、CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平较对照组均明显升高,高密度脂蛋白水平(HDL)较对照组降低(P<0.05);且高、中、低危组3组ACS患者间生化指标和CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析显示,ACS患者的CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平、CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞水平均与GRACE评分呈正相关(r=0.644、0.518,P<0.05)。ROC曲线分析显示,CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞诊断高危ACS患者最佳截断值为0.129,曲线下面积为0.856(95%CI:0.790~0.910),灵敏度、特异度分别为79.27%、78.46%。CD4^(+)CD45RA^(+)T诊断诊断高危ACS患者最佳截断值为0.165,曲线下面积分别为0.837(95%CI:0.874~0.901),灵敏度、特异度分别为75.61%、80.77%。且低CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞组和低CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞组患者发生院内心脏不良事件发生率分别明显高于高CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞组和高CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞组(P<0.05)。结论ACS患者CD4^(+)CD45RA^(+)T细胞、CD4^(+)TIM-3^(+)T细胞水平均显著高于健康人群,且二者均与ACS患者GRACE评分呈正相关,并对预测高危ACS和患者预后情况具有较高诊断价值。

人胎盘来源的间充质干细胞诱导CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1细胞增殖研究

目的研究人胎盘来源的间充质干细胞(MSC)是否能诱导正常人外周血单个核细胞(PBMC)中CD4+CD45RACD49b+LAG3+Tr1细胞增殖。方法分离、纯化、表型鉴定人胎盘来源的MSC。实验分组如下:PBMC组、PBMC+MSC组、CD3+CD28+PBMC组和MSC+CD3+CD28+PBMC组。相同条件下培养24 h后,流式细胞术检测各组CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1细胞比例;ELISA法检测各组上清中白细胞介素10(IL-10)水平,并对MSC+CD3+CD28+PBMC组中的CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1比例和其上清中IL-10含量作相关性分析。结果MSC+CD3+CD28+PBMC组中CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1细胞比例为(6.66±2.80)%,PBMC组为(1.01±0.44)%,PBMC+MSC组为(1.14±0.78)%,CD3+CD28+PBMC组为(4.20±2.58)%,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC+CD3+CD28+PBMC组上清中的IL-10含量为(14.45±3.14)pg/m L,PBMC组为(0.90±0.05)pg/m L,PBMC+MSC组为(11.00±3.02)pg/m L,CD3+CD28+PBMC组为(6.04±1.90)pg/m L,差异有统计学意义(P<0.05)。MSC+CD3+CD28+PBMC组中的CD4+CD45RACD49b+LAG3+Tr1比例与其上清中IL-10含量成正相关(r=0.880,P<0.01)。结论 MSC可以诱导CD3、CD28活化的PBMC细胞中的CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1细胞增殖,CD4^+CD45RA^-CD49b^+LAG3^+Tr1细胞比例增加与上清中IL-10水平升高有关。

适用于单细胞测序的肾脏消化及CD45^(+)单细胞分离方法

目的比较Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶在不同时间对肾脏组织的消化效果,探讨磁珠分离法所得细胞对单细胞测序的适用性。方法采用Ⅳ型胶原酶和胰蛋白酶消化肾脏组织,消化时间分别为15 min、30 min和15 min^(+)15 min。比较两种消化酶在不同时间对肾脏组织的消化效果,选择消化效果最佳的方法进行消化,所得肾脏细胞悬液通过用磁珠法分离CD45^(+)细胞。检测分离后所得细胞数量、活力、成团率并根据单细胞测序结果评价细胞状态。结果肾脏组织在经酶作用30 min后基本被消化完全,在相同消化时间和方法下,Ⅳ型胶原酶消化效率明显优于胰蛋白酶。与直接消化30 min相比,15 min+15min消化所得细胞状态更好,细胞碎片少且背景干净。通过Ⅳ型胶原酶15 min+15min消化方式所得细胞悬液分离出的CD45^(+)细胞的细胞总量、存活率、成团率等各项指标均符合单细胞测序要求。通过单细胞测序结果发现,细胞均表达CD45^(+),线粒体基因表达比例低,说明细胞在外界环境中被刺激的比例小。结论在相同消化时间条件下与胰蛋白酶相比,Ⅳ型胶原酶对肾脏组织的消化效果好,有利于减少细胞碎片的产生,经磁珠分离所得CD45^(+)肾脏单细胞悬液各项指标均符合单细胞测序要求且纯度高,有利于后续测序结果分析的准确性。

人CD4^+CD25^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞诱导获得iTreg细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞和CD4^+CD25^-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成iTreg细胞的效率,并对比各组iTreg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA ^+和CD25 ^-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导iTreg生成,3、6 d通过流式观察各组iTreg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4 +CD25^-CD45RA ^+T细胞诱导的iTreg组、CD4^+CD25 ^-T细胞诱导的iTreg组和空白对照组,通过观察iTreg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果: CD4^+CD25 -CD45RA +T细胞组和CD4 +CD25 -T细胞组普通条件下iTreg产率分别为(96.00±0.21)%和(60.23±0.50)%,炎性环境下为(81.97±1.29)%和(56.80±0.43)%,前者都显著高于后者( P <0.001)。各组iTreg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者( P <0.001),前者IFN-γ也低于后者( P <0.05)。体内实验表明iTreg均具有免疫调节能力,但CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组诱导的iTreg能力强于后者。结论: CD4^+CD25 ^-CD45RA^+T细胞组和CD4^+CD25^-T细胞组都可以成功诱导iTreg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。