B淋巴细胞在抗CD45RB抗体诱导的移植免疫耐受中的作用

目的:探讨B淋巴细胞在抗CD45RB抗体诱导的移植免疫耐受中的作用。方法:抗CD45RB抗体对BALB/c裸鼠进行预处理后制备脾脏单细胞悬液,与BALB/c小鼠T淋巴细胞和C57BL/6小鼠脾细胞混合培养,流式细胞术分析Th1、Th2、Treg和Tm淋巴细胞。以B6.μMT^(-/-)小鼠为受体、BALB/c小鼠为供体建立皮肤移植模型,移植后向受体鼠腹腔注射抗CD45RB单抗,监测脾淋巴细胞CD3^+CD45RB^(hi)细胞比例。在混合淋巴培养过程中加入抗CD45RB单抗,分离B细胞,建立以BALB/c小鼠为供体、B6.μMT^(-/-)小鼠为受体的心脏移植模型,通过尾静脉注射B细胞给B6.μMT^(-/-)小鼠,观察受体鼠生存期和B细胞分布。结果:在裸鼠体内用抗CD45RB抗体处理过的B淋巴细胞,与T淋巴细胞混合培养时,可使Treg和Th2淋巴细胞比例明显升高,Th1淋巴细胞的比例明显下降,Tm细胞无明显变化。在体内B淋巴细胞缺失的情况下,抗CD45RB抗体依然能够降低T细胞表面CD45RB的表达,与对照组B淋巴细胞存在组相比,抗CD45RB抗体对T淋巴细胞表面CD45RB下调更为快速,但最终CD3^+CD45RB^(hi)T细胞比例无明显变化。体外抗CD45RB抗体处理过的B淋巴细胞可以延长受体鼠的生存时间。B6.μMT^(-/-)鼠在接受抗CD45RB抗体处理的B细胞并进行同种异体心脏移植后,B细胞可向胸腺迁移。结论:在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中,B淋巴细胞可能通过介导各T淋巴细胞亚群比例发挥着重要作用,且在中枢耐受中也起到一定作用,但是仅靠B淋巴细胞无法形成完全耐受。

CD45RB^(high) CD4^+幼稚T细胞诱导严重联合免疫缺陷型小鼠慢性结肠炎模型的建立

目的:建立CD45RBhighCD4+幼稚T细胞诱导严重联合免疫缺陷型(SCID)小鼠慢性结肠炎模型,并探讨该结肠炎模型的免疫病理特征。方法:采用流式细胞仪分离BALB/c小鼠(H-2d基因表型)脾脏CD45RBhighCD4+幼稚T细胞,经尾静脉或腹腔注射植入21只同基因型SCID小鼠体内,观察慢性结肠炎的发生。8周后处死SCID小鼠,分离结肠黏膜固有层内CD4+T淋巴细胞,体外刺激,分别采用ELISA法和RT-PCR法检测炎症结肠黏膜组织内炎症细胞因子(IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、TNF-α)及其mRNA的表达水平。以16只正常BALB/c小鼠作对照。结果:CD45RBhighCD4+幼稚T细胞植入SCID小鼠(4.1±0.3)周后,小鼠体重开始下降,大便变软;(7.4±0.6)周后出现腹泻、体重明显下降、脱肛等慢性结肠炎症状;组织病理检查发现结肠黏膜层、黏膜下层、肌层及浆膜层有大量的淋巴细胞浸润,以黏膜层和黏膜下层明显,并出现肠上皮细胞炎性增生、黏膜溃疡形成。与正常BALB/c小鼠比较,CD45RBhighCD4+幼稚T细胞诱导后,SCID小鼠结肠黏膜固有层CD4+T细胞IFN-γ、IL-2、TNF-α分泌水平增高(P<0.005),结肠黏膜组织内IL-2、IFN-γ、TNF-αmRNA水平亦升高(P<0.005)。结论:CD45RBhighCD4+幼稚T细胞可诱导SCID小鼠发生慢性结肠炎。

CD4^+CD25^+CD127^-T细胞在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中的作用

目的:研究CD4+CD25+CD127-T细胞在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中所发挥的作用,从而阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受作用的机制。方法:体内实验建立小鼠异位心脏移植模型,观察抗CD45RB抗体对移植物生存期的影响。体外实验观察抗CD45RB抗体对T细胞增殖抑制能力和对CD4+CD25+CD127-T细胞生成的影响。流式细胞术检测外周血和混合细胞中CD4+CD25+CD127-T细胞百分率,ELISA法检测血清和培养液中IL-2和IL-10含量,Real-TimePCR法检测脾脏和混合细胞中Foxp3基因的表达,移植心脏病理学观察。结果:抗CD45RB抗体显著延长移植物存活时间(P<0.01),对ConA刺激引起的T淋巴细胞增殖具有明显的抑制能力(P<0.05)。与对照组相比,实验组CD4+CD25+CD127-T细胞百分率和Foxp3 mRNA表达量均明显增加(P<0.05),实验组IL-2水平较对照组明显降低(P<0.05),但IL-10含量较对照组明显升高(P<0.05)。病理结果显示对照组移植心脏出现典型细胞免疫性损伤病理改变,而实验组中几乎无炎性细胞浸润现象。结论:抗CD45RB抗体能显著延长移植物存活时间,其诱导免疫耐受机制与上调CD4+CD25+CD127-T细胞百分率和增加Foxp3 mRNA表达量有关。

体外DCs在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中的作用机制

目的:探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)在抗CD45RB抗体诱导的免疫耐受中所发挥的作用,从而阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的机制。方法:采用DCs的常规诱导方法(rmGM-CSF、IL-4和LPS),在诱导过程中加入不同剂量的抗CD45RB抗体,成熟后利用流式细胞仪检测细胞表型、周期和吞噬能力,ELISA法检测IL-12分泌量,混合淋巴细胞培养检测DCs对T细胞增殖能力的影响。结果:DCs经抗CD45RB抗体处理后,CD11C和CD83表达升高,CD86表达下降,自身增殖和吞噬能力增强,但分泌IL-12和刺激T细胞增殖的能力明显下降。结论:耐受性树突状细胞(tolerogenic dendritic cells,tDCs)能显著抑制T细胞的增殖,它的产生是抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的主要机制之一。

IL-2协同抗CD45RB抗体调节Treg/Th17细胞的比例并延长小鼠移植皮肤存活时间

目的:研究IL-2在抗CD45RB抗体诱导免疫耐受中对Treg/Th17细胞分化的影响,进一步阐明抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的机制。方法:用免疫磁珠分选C57BL/6小鼠脾脏中的CD4+T细胞,在抗CD45RB抗体与IL-2的作用下培养72小时后,流式检测Treg/Th17细胞的变化。以BALB/c小鼠为供体,C57BL/6小鼠为受体建立同种异基因皮肤移植模型,分别给予抗CD45RB抗体及IL-2等治疗,术后1、3、5、7、9天取受体鼠脾细胞,动态检测Treg/Th17细胞的变化;术后第9天取移植皮肤HE染色观察炎性细胞的浸润情况;观察并记录移植皮肤的存活时间。结果:CD4+T细胞在IL-2联合抗CD45RB抗体的作用下培养72小时后,Treg比例升高,Th17细胞比例下降;IL-2联合抗CD45RB抗体治疗后明显延长小鼠移植皮肤的存活时间。结论:IL-2可以明显增强抗CD45RB抗体诱导免疫耐受的形成,使Treg细胞上调,下调Th17细胞,有利于免疫耐受的形成。

痢疾杆菌口服免疫小鼠肠道相关淋巴组织中CD45R^+和CD45RB^+细胞动态变化的观察

为了解肠道相关淋巴组织（GALT）对痢疾杆菌口服免疫的应答状况,分离了Shigella fiexneri四次免疫后Balb/c 小鼠牌（SP）、肠系膜淋巴结（MLN）、Peyer’s结（PP）、固有膜（LP）和上皮内（IE）淋巴细胞,对末次免疫后1～13d内免疫组与对照组GALT中的CD45R^+和CD45RB^+细胞群作了FACS分析。结果免疫后起初7d IE和LPCD45R^+细胞增加而MLN和PP CD45R^+细胞减少。CD45RB^+LPL在起初4d增加,而CD45RB^+IEL总是低于对照。CD45RB^(lo)/CD45RB^(hi)比例在SP和MLN中几乎无变化,但在PP中先降至最低后上升并超过对照。LP中主要为CD45RBD^(lo),IE中主要为CD45RB^(hi)。这些结果在一定程度上反映了粘膜淋巴细胞CD45表达的组织特异性及在痢疾杆菌免疫后B细胞、记忆细胞和辅助细胞的功能状态和变化趋势。

CD_(45)RB在大鼠短暂局灶性脑缺血时神经元的表达

目的探讨细胞共同抗原ＣＤ４５ＲＢ在缺血性脑损伤中作用。方法选用ＳＤ成年大鼠阻塞大脑中动脉２ｈ，再灌流０．５～４８ｈ制成短暂局灶性脑缺血，用ＣＤ４５ＲＢ对缺血性脑组织进行免疫组化染色。结果正常组及假性手术组的脑组织有散在的神经元弱表达ＣＤ４５ＳＲＢ。缺血脑组织，皮质层锥体细胞、纹状体及下丘脑区的神经元ＣＤ４５ＲＢ强阳性，其胞核形态及对苏木素着色均正常；轻度变性的神经元弱表达ＣＤ４５ＲＢ：细胞核固缩死亡的神经元ＣＤ４５ＲＢ阴性。结论本实验证实ＣＤ４５ＲＢ在缺血时形态正常的神经元呈强表达，其重要意义尚需进一步研究。

采用优化家兔阴道刺激模型评价乙酸阴道热敏凝胶剂的阴道免疫炎症毒性研究

目的采用优化家兔阴道刺激模型评价乙酸阴道热敏凝胶剂(acetic acid vaginal thermosensitive in situ gel,Acid-TISG)对家兔阴道黏膜的免疫炎症毒性。方法将24只♀家兔随机分为空白凝胶组、Acid-TISG组(12.11 mg·m L^(-1))、壬苯醇醚(nonoxynol-9,N-9)凝胶组(5.6 mg·m L^(-1)),阴道给予3 m L凝胶,每天1次,连续10 d,给药前和给药后24 h收集家兔阴道灌洗液(cervicovaginal lavages,CVLs),检测CVL中白介素6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)的含量。家兔处死后取阴道组织做病理学检查,HE染色观察家兔阴道黏膜组织损伤并进行评分。运用免疫组化技术检测阴道黏膜内白细胞共同抗原-CD45RB和核增殖抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果与空白凝胶组相比,Acid-TISG组黏膜上皮完整,无明显炎症浸润、充血和水肿,N-9凝胶组黏膜上皮出现脱落,固有层炎性细胞明显增多(P<0.05);空白凝胶组和Acid-TISG组阴道黏膜无明显CD45RB阳性表达,N-9凝胶组阴道黏膜固有层出现较多的CD45RB阳性表达细胞。与空白凝胶组相比,Acid-TISG组的阴道黏膜PCNA表达增多,但无显著性差异,N-9凝胶组的阴道黏膜PCNA阳性表达细胞明显增多(P<0.05)。与给药前相比,给药后24 h时CVL中IL-6和TNF-α含量在空白凝胶组和Acid-TISG组无明显改变,N-9凝胶组明显升高(P<0.05)。结论 Acid-TISG对家兔阴道黏膜无明显免疫炎症毒性,优化的家兔阴道刺激模型可用来评价生殖道外用药物对阴道黏膜的免疫炎症毒性。