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牛病毒性腹泻病毒感染对CD46基因修饰树突状细胞表型及其细胞因子分泌的影响 被引量:1
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作者 刘建华 木哈买提江.铁格斯 +7 位作者 王思云 张慧敏 胡月 苏丹丹 加尔肯 苏战强 翟少华 冉多良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期230-236,共7页
为研究CD46分子在BVDV感染树突状细胞(DC)介导的免疫应答中的作用,本研究根据牛CD46基因保守序列设计3对短发卡RNA(shRNA)的正义、反义寡核苷酸链,以及3对乱序列作为阴性对照,将其退火后分别克隆至p LL3.7质粒载体中,获得CD46基因shRNA... 为研究CD46分子在BVDV感染树突状细胞(DC)介导的免疫应答中的作用,本研究根据牛CD46基因保守序列设计3对短发卡RNA(shRNA)的正义、反义寡核苷酸链,以及3对乱序列作为阴性对照,将其退火后分别克隆至p LL3.7质粒载体中,获得CD46基因shRNA重组质粒后将其转染MDBK细胞。采用荧光定量PCR和western blot技术筛选最佳沉默CD46基因的shRNA重组质粒,将其和表达载体p VAX1-CD46转染新疆褐牛DC(MDDCs)后利用BVDV感染MDDCs,通过荧光定量PCR检测DC表型及其细胞因子mRNA转录水平。结果显示,与未转染细胞组相比,CD46基因过表达的MDDCs中CD40、CD80、CD86和MHC-II的mRNA转录水平均明显升高(p<0.05);而CD46基因沉默的MDDCs中CD40 mRNA转录水平也明显升高(p<0.05),CD86 mRNA转录水平变化不明显(p>0.05),CD80和MHC-II的mRNA转录水平均明显下降(p<0.05)。与未转染细胞组相比,CD46基因过表达组IL-10和IL-12 mRNA转录水平变化不明显(p>0.05),而CD46基因沉默的MDDCs中IL-10和IL-12 mRNA的表达均明显下降(p<0.05)。本研究从新的角度初步揭示了CD46分子对BVDV感染DC成熟、初始T细胞增殖和分化的影响,为解决DCs对BVDV的免疫抑制作用提供新的思路。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒 cd46受体 树突状细胞 细胞表型 细胞因子
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非小细胞肺癌中CAR和CD46的表达及临床意义 被引量:1
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作者 马玲娣 刘乾 +5 位作者 王勇 王仕忠 鲍永仪 关乃富 倪诚 樊小龙 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期1268-1271,共4页
目的研究柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)及B组腺病毒受体CD46分子在人非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)组织中的表达水平及临床意义。方法免疫组织化学方法检测144例NSCLC组织中CAR、CD4... 目的研究柯萨奇-腺病毒受体(Coxsackie and adenovirus receptor,CAR)及B组腺病毒受体CD46分子在人非小细胞肺癌(Non-small cell lung carcinoma,NSCLC)组织中的表达水平及临床意义。方法免疫组织化学方法检测144例NSCLC组织中CAR、CD46的表达,对两者的表达水平与腺病毒的转染效率以及肺癌发生、发展之间的关系进行分析。结果 144例NSCLC组织中,CAR在肺鳞癌和肺腺癌中CAR的阳性表达率分别为77.5%(31/40)和36.8%(14/38);CD46则分别为58.3%(14/24)和88.1%(37/42);不同病理类型NSCLC组织中,CAR和CD46的表达模式明显不同(P<0.05)。此外,CAR表达与NSCLC临床TNM分期密切相关。30例TNMⅠ期患者中,13例CAR表达阳性(43.3%),48例Ⅱ~Ⅲ期患者中,32例CAR表达阳性(66.7%),Ⅱ~Ⅲ期患者的CAR阳性表达率明显高于Ⅰ期患者(P<0.05)。结论 CAR及CD46在NSCLC中的表达水平明显不同,鳞癌普遍高表达CAR,腺癌则有CD46的高表达,提示依赖不同受体的腺病毒对NSCLC的基因转移效率也有所不同;CAR表达水平可能是判断NSCLC预后的有用指标。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 柯萨奇-腺病毒受体 cd46 基因治疗
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CD46和雌激素受体在乳腺癌组织中的表达及临床意义
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作者 李杰 李静 +3 位作者 杨猛 孙凤莉 张博 戴殿禄 《浙江临床医学》 2014年第2期185-188,共4页
目的探讨CD46、雌激素受体(ER)在浸润性乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织中的表达水平及其对乳腺癌患者预后的临床意义。方法采用免疫组化的方法检测60例浸润性乳腺癌、60例乳腺良性肿瘤及30例正常乳腺组织标本CD46、ER的表达,并... 目的探讨CD46、雌激素受体(ER)在浸润性乳腺癌、乳腺良性肿瘤及正常乳腺组织中的表达水平及其对乳腺癌患者预后的临床意义。方法采用免疫组化的方法检测60例浸润性乳腺癌、60例乳腺良性肿瘤及30例正常乳腺组织标本CD46、ER的表达,并分析该表达与不同临床病理特征之间的关联性,以及采用生存分析CD46、ER的表达对患者预后的临床意义。结果乳腺癌组织CD拍阳性率(81.67%)明显高于乳腺良性肿瘤(58.33%)和正常乳腺组织(46.67%);ER阳性率(50.00%)明显高于乳腺良性肿瘤(33.33%)和正常乳腺组织(26.67%),差别均有统计学意义(P〈0.05);CD46表达阳性率与临床分级、肿瘤直径、有无淋巴结转移、血管浸润、TNM分期等呈正相关(P〈0.05);ER表达阳性率与患者年龄、临床分级、肿瘤直径等呈正相关(P〈0.05);CD46、ER阳性表达均可致患者的生存预后变差,浸润程度、有无淋巴结转移、临床分期、CD46、ER的表达是乳腺癌5年生存率独立的危险因素(P〈0.05)。结论CD46、ER阳性表达与更严重的乳腺癌病理特征相关,并对较差的预后具有提示作用。 展开更多
关键词 乳腺癌 cd46 雌激素受体(ER) 预后
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改良腺病毒AdF35-eGFP转染人及大鼠骨髓间充质干细胞的效率对比研究 被引量:3
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作者 胡硕 熊玲静 +3 位作者 余剑英 雷萌 赵敏 张永学 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期983-989,共7页
目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(humanbone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs,rBMSCs)的效率。方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导... 目的:比较改良腺病毒AdF35-增强绿荧光蛋白(eGFP)转染人骨髓间充质干细胞(humanbone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)和大鼠骨髓间充质干细胞(rat BMSCs,rBMSCs)的效率。方法:分别从人体、大鼠骨髓中分离出BMSCs,成骨、成脂诱导培养以鉴定BMSCs。构建含eGFP的AdF35重组腺病毒载体AdF35-eGFP,以不同感染复数(multiplicity of infection,MOI)分别转染BMSCs后,MTT检测AdF35-eGFP对2种BMSCs的毒性作用,荧光显微镜观察eGFP的表达,流式细胞仪检测转染效率,实时定量PCR检测2种BMSCs表达柯萨奇腺病毒受体(CAR)和CD46mRNA的水平。结果:hBMSCs和rBMSCs从骨髓中分离出来后,分别成功诱导分化成骨和成脂。当MOI为1 000 PFU/mL时,AdF35-EGFP对2种BMSCs的活性均有明显抑制作用(P<0.001)。AdF35-eGFP感染hBMSCs 48 h后,荧光显微镜下可见发强烈绿色荧光的细胞,流式细胞仪检测其转染效率可达(84.8±7.1)%;Ad5-eGFP感染rBMSCs后,荧光显微镜下仅见少量发绿色荧光的细胞,48 h转染效率为(3.1±1.1)%。hBMSCs高表达CD46mRNA,低表达CARmRNA;而rBMSCs则高表达CARmRNA,低表达CD46mRNA,2种基因的表达差异有统计学意义(P<0.01)。结论:AdF35可作为理想载体携带目的基因转染hBMSCs,但不适合作为转染rBMSCs的载体。 展开更多
关键词 35型腺病毒 骨髓间充质干细胞 转染 cd46 柯萨奇腺病毒受体
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重组腺病毒Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系感染效率的比较研究 被引量:1
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作者 曹晓培 肖凤君 +5 位作者 高瞻 杨月峰 张群伟 王立生 王恒湘 王华 《中国医药生物技术》 2015年第2期102-108,共7页
目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,... 目的以Ad5-GFP及Ad5/F35-GFP为对照,评价Ad5/F11p-GFP对不同肿瘤细胞系的感染效率。方法制备并纯化Ad5-GFP、Ad5/F11p-GFP及Ad5/F35-GFP三种重组腺病毒,以不同的感染复数(MOI)感染乳腺癌细胞系SKBR-3、MCF-7及肾癌细胞系786O。48 h后,荧光显微镜观察GFP的表达,流式细胞仪检测感染效率及不同细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)、CD46和桥粒芯糖蛋白质2的表达。结果 Ad5/F35-GFP对SKBR-3、MCF-7及786O均具有很高的感染效率,且其在较低的MOI时就具有较高的感染效率;Ad5/F11p-GFP对CD46高表达的MCF-7及786O具有较高的感染效率,5 MOI感染即可达到60%以上的感染效率;而Ad5-GFP仅对CAR高表达的细胞系786O具有较高的感染效率,且感染效率随着MOI的增加而升高。Ad5/F11p-GFP和Ad5/F35-GFP对三种肿瘤细胞系的感染效率明显高于Ad5-GFP。结论对5型腺病毒进行纤维顶球的改造,可增强对肿瘤细胞的感染效率。 展开更多
关键词 5型腺病毒 纤维顶球 感染效率 柯萨奇病毒-腺病毒受体 抗原 cd46 桥粒芯糖蛋白质2
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受体依赖性TRAIL重组腺病毒对人肺癌细胞凋亡的诱导作用
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作者 马玲娣 王勇 +6 位作者 倪诚 王仕忠 鲍永仪 关乃富 张科 Leif G. Salford 樊小龙 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期577-582,共6页
目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z79... 目的:观察重组TRAIL腺病毒(Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL)对人非小细胞肺癌(nonsmall-cell lung cancer,NSCLC)原代培养细胞和细胞株的凋亡诱导作用,探讨两种Ad-TRAIL用于肺癌基因治疗的价值。方法:采用流式细胞术检测人肺癌细胞系A549、Z793、QG56和NCI-H520及10例原代培养肺癌细胞中CAR和CD46的表达水平;分别以Ad5-TRAIL及Ad5F35-TRAIL重组腺病毒按MOI 10和50感染上述细胞,48 h后Annexin V-FITC双标法流式细胞术检测细胞的早期凋亡。结果:A549、Z793、QG56和NCI-H520 4株肺癌细胞中,CD46的表达均明显高于CAR表达。Z793、QG56细胞对Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL的作用较敏感,MOI=10感染后凋亡率分别为(11.76±2.10)%、(15.96±2.89)%和(6.05±1.58)%、(10.11±1.26)%,显著高于对照组[(2.33±0.37)%和(5.95±1.89)%,P<0.05];MOI=50感染时NCI-H520细胞凋亡率分别为(12.89±3.2)%和(9.08±1.35)%,与对照组(7.04±2.17)%相比差异无统计学意义(P>0.05);Ad5-TRAIL和Ad5F35-TRAIL均不能诱导A549细胞凋亡。10例原代肺癌细胞CD46表达也明显较CAR高;Ad5-TRAIL或Ad5F35-TRAIL感染后,5例的原代肺癌细胞检测到凋亡;与Ad5-TRAIL相比,Ad5F35-TRAIL诱导的凋亡率更高。结论:两种TRAIL重组腺病毒对非小细胞肺癌细胞均有凋亡诱导作用,Ad5F35-TRAIL的作用强于Ad5-TRAIL,更适合于非小细胞肺癌的基因治疗。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 肿瘤坏死因子受体相关凋亡诱导配体 腺病毒 凋亡 柯萨奇腺病毒受体(CAR) cd46
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Important amino acid in the hemagglutinin glycoprotein of measles virus(MV)that governs hemadsorption
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作者 Michiko Watanabe Shigeharu Ueda 《Chinese Science Bulletin》 SCIE EI CAS 1999年第7期612-617,共6页
Two strains of measles virus IMA and SMD that were isolated using B95a cell line show hemadsorption negative. After adaptation to Vero cells, these strains gain the ability to agglutinate AGM-RBC and show hemadsorptio... Two strains of measles virus IMA and SMD that were isolated using B95a cell line show hemadsorption negative. After adaptation to Vero cells, these strains gain the ability to agglutinate AGM-RBC and show hemadsorption positive. Sequence analysis of these two kinds of virus reveals that the two strains all have a Ser (HAD negative) to Gly (HAD positive) mutation at position 546 in the H protein. Site-directed mutagenesis and expression in COS cells were used to confirm that the mutation Ser→Gly is responsible for hemadsorption alteration. Then the monoclonal antibody against CD46 was used to identify that this mutation also governs the binding function of MV H protein to CD46 receptor. The data provide a new important amino acid of MV H protein that governs the hemadsorption and binding to CD46 receptor. 展开更多
关键词 H protein cd46 receptor HEMADSORPTION SITE-DIRECTED mutagenesis.
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