重组SIRPα1的体外表达及其在红细胞CD47-SIRPα信号通路研究中的应用

目的获得野生型信号调节蛋白α1（SIRPα1）功能结构域重组蛋白,以用于研究正常或异常红细胞的吞噬和清除中CD47-SIRPα信号通路的作用。方法全基因合成人源野生型SIRPα1 IgV结构域编码区;将合成片段构建入携带组氨酸（His）标签的pET-21a大肠杆菌载体,获得重组表达载体。使用大肠杆菌BL21 （DE3）细胞体外表达重组SIRPα1,并通过亲和层析法纯化;利用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）鉴定重组SIRPα1;采用基于ELISA的红细胞结合试验评估2名Rh缺失表型献血者与正常Rh表型个体对照在红细胞结合水平的差异;流式细胞术检测红细胞CD47表达;采用单因素方差分析对数据做统计分析。结果成功构建重组表达载体,纯化获得野生型重组SIRPα1。成功建立了基于ELISA的红细胞结合试验方法并应用于评估重组SIRPα1与红细胞的结合。伴随CD47表达量的明显降低,Rh缺失表型个体的红细胞和正常个体相比,其与重组SIRPα1的结合能力下降。结论 CD47-SIRPα信号通路可能在Rh缺失表型红细胞的清除中发挥了作用。

CD47在恶性肿瘤中的表达及相关问题研究现状

CD47是一种广泛表达于细胞膜表面的免疫球蛋白样蛋白质,它与信号调节蛋白α(SIRPα)相结合,逃避巨噬细胞的吞噬。近年发现大部分肿瘤细胞CD47呈高表达状态,使肿瘤细胞得以逃避巨噬细胞的吞噬作用。故本文就CD47的功能、CD47在各系统恶性肿瘤中的研究现状进行综述。

小鼠可溶性信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段蛋白增强巨噬细胞对L1210白血病细胞的吞噬能力

目的克隆小鼠信号调节蛋白α(SIRPα)胞外段基因(mSIRPα)并构建其原核表达载体,实现蛋白的可溶性表达后,研究mSIRPα^(ext)在肿瘤免疫调节中的作用。方法利用小鼠淋巴结来源的cDNA扩增mSIRPαext基因,并进一步构建pET32a-SIRPα^(ext)原核表达载体。在实现含有硫氧还蛋白(Trx)标签的重组Trx-mSIRPα^(ext)融合蛋白可溶性表达后,培养小鼠骨髓来源单核细胞并诱导其向巨噬细胞分化,接着将巨噬细胞与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记的L1210白血病细胞共培养,在共培养体系中添加Trx-mSIRPα^(ext)蛋白及Trx对照蛋白,通过免疫荧光细胞化学染色和共聚焦显微镜观察重组蛋白在巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的作用。结果获得纯化的可溶性Trx-mSIRPα^(ext)蛋白,利用体外吞噬实验证明该蛋白可增强巨噬细胞对小鼠L1210白血病细胞的吞噬作用。结论原核表达的Trx-mSIRPα^(ext)蛋白可有效提高巨噬细胞对白血病细胞的吞噬作用,从而发挥抗肿瘤免疫治疗效果。

靶向CD47抗肿瘤治疗的研究进展

CD47是细胞表面高度糖化的穿膜蛋白,是一种“别吃我”信号,可与信号调节蛋白α(SIRPα)等形成CD47-SIRPα抑制信号复合体,从固有免疫和适应性免疫两方面同时逃避机体的免疫监视。研究发现,CD47在血液肿瘤和多种实体瘤中高表达,通过与巨噬细胞上的SIRPα配体结合,启动一系列抑制性的信号转导而躲避吞噬,其高水平表达既能促进肿瘤细胞的生长又能促进肿瘤细胞的转移。通过抗CD47抗体阻断CD47-SIRPα信号通路,达到抑制肿瘤细胞的免疫逃逸,增强巨噬细胞的吞噬作用和适应性免疫应答,是免疫治疗肿瘤的新途径。目前,国内外开展了越来越多靶向CD47-SIRPα的药物或抗体的基础研究和临床试验,有望从抗体分子设计和重组蛋白等方面解决靶向CD47抗肿瘤治疗时发生的贫血和输液相关不良反应等问题。本文就CD47的分子结构与生理功能、CD47-SIRPα表达调控机制、CD47抗肿瘤治疗研究现状以及靶向CD47导致的相关生物安全性问题和解决方案等方面进行综述,为CD47新靶点的基础研究和临床应用提供参考。

TSP-1/CD47信号轴在肝再生中的作用机制

随着对肝脏解剖学和肝脏生理功能认识的加深,肝脏早已不是普罗米修斯时代的神秘器官,治疗肝脏疾病的方式也越来越多样。目前,手术切除已经成为肝脏肿瘤的主要治疗方式。解剖性肝切除、联合门静脉栓塞的肝切除、分期肝切除和联合肝脏离断和门静脉结扎的分阶段肝切除术(ALPPS)等创新技术的应用极大提高了根治性切除率,但肝切除术后肝衰竭(post-hepatectomy liver failure,PHLF)仍是最主要的死亡原因。PHLF与肝再生能力不足、缺血-再灌注损伤(IRI)、肝功能代谢不足和免疫损伤等诸多因素相关。研究表明,凝血酶敏感蛋白-1(thrombin sensitive protein-1,TSP-1)/簇分化抗原-47(cluster differentiated antigen-47,CDA-47)信号轴积极调控肝再生过程并在PHLF中扮演着重要角色,TSP-1可能成为预测肝衰竭的灵敏指标[1]。

CD47相关信号通路及其与相关疾病关系的研究进展

CD47是一种在细胞表面普遍表达的糖蛋白,能与多种胞内外蛋白如凝血栓蛋白1(TSP1)和信号调节蛋白α(SIRPα)发生相互作用,参与多种信号通路的调控,这些信号通路在多种疾病如肿瘤、心血管疾病和自身免疫性疾病的发生和发展过程中起着重要的作用。通过重点阐述CD47的结构、表达、与其他蛋白的相互作用、相关的信号通路以及其与疾病的关系,以期为靶向CD47的治疗策略的开发提供帮助。

抗人SIRPα抗体制备及抗肿瘤活性研究

目的:制备抗人信号调节蛋白α(signal regulatory protein alpha,SIRPα)抗体并进行抗肿瘤活性评价。方法:通过杂交瘤技术获得高亲和力鼠抗人SIRPα抗体。采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)和毛细管凝胶电泳检测抗体纯度;采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)及荧光激活细胞分选法(fluorescence activated cell sorting,FACS)检测抗体抗原结合活性及抗体依赖性细胞介导的吞噬(antibody-dependent cell-mediated phagocytosis,ADCP)活性;采用生物干涉膜技术(bio-layer interferometry,BLI)检测嵌合抗体与人SIRPα结合动力学;利用转基因Balb/c小鼠皮下移植CT26-hCD47/hPD-L1肿瘤细胞的模型进行候选抗体药效学评价。结果:制备出纯度高于90%的3种抗体14C4、59G5及4C10。3种抗体都能特异性地与人源不同水平的多基因型SIRPα结合,同时能协同增强Rituximab或IMM40H(CD70抗体)的ADCP活性。体内药效实验显示,抗体14C4与PD-L1抗体联合用药具有显著抑制实体瘤生长的效果。结论:该研究获得了具有高亲和力和特异性结合不同SIRPα并阻断CD47/SIRPα结合的3株抗肿瘤候选抗体。

CD47及其单克隆抗体研究进展

目前CD47单抗类药物在实体瘤及血液系统肿瘤的靶向治疗方面取得了很大进展,本研究系统复习了CD47的生物学特性、CD47单抗类药物的作用机制、目前应用于临床试验的单抗类药物种类及CD47单抗类药物所面临的问题,总结了近年来国内外CD47单抗类药物临床试验情况,新一代单抗类药物在临床试验中取得了一定的进展,有望给患者带来新的希望。