CD47抗体对低氧/复氧大鼠心肌细胞的保护作用

目的观察CD47抗体对大鼠原代心肌细胞低氧/复氧(H/R)损伤的保护作用,并探讨其可能的作用机制。方法利用原代培养的Wistar乳鼠心肌细胞建立模拟心肌缺血再灌注模型。实验分为正常对照组、模型组(H/R组)、CD47+H/R组。测定培养细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量;使用Annexin-V与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率; DHE染色检测心肌细胞活性氧(ROS)水平; Western blot检测心肌细胞CD47、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和磷酸化一氧化氮合酶(p-eNOS)的表达。结果与对照组比较,模型组心肌细胞的凋亡率明显升高(P <0. 01);与模型组比较,CD47抗体可显著降低细胞凋亡率(P <0. 01)。与对照组比较,模型组LDH、CK、MDA和ROS水平显著升高(P <0. 01),SOD和NO含量水平显著降低(P <0. 01);与模型组比较,CD47抗体SOD和NO水平显著提高(P <0. 01),LDH、CK、MDA以及ROS水平显著降低(P <0. 01)。Western blot结果显示,与对照组比较,模型组CD47表达显著升高(P <0. 01),p-eNOS表达显著降低(P <0. 01);与模型组比较,CD47+H/R组CD47表达明显降低(P <0. 01),p-eNOS表达明显升高(P <0. 05)。结论封闭CD47对大鼠原代心肌细胞低氧/复氧损伤具有保护作用,其机制可能与激活eNOS/NO通路使心肌细胞NO表达上调有关。

动脉粥样硬化靶向CD47抗体-壳聚糖-透明质酸纳米聚电解质复合物的合成及理化特性检测

目的利用壳聚糖(chitosan,CS)、透明质酸(hyaluronic acid,HA)有效吸附CD47抗体,合成针对动脉粥样硬化的靶向纳米给药载体。方法在水和PBS溶液中,以壳聚糖作为聚阳离子,透明质酸作为聚阴离子,二者发生电荷中和,合成壳聚糖-透明质酸聚电解质复合物纳米颗粒(chitosan-hyaluronic acid polyelectrolyte complex nanoparticles,CSHA-PECS)。以扫描电镜、动态光散射及迁移率电泳验证合成的CS-HA-PECS的表观特征及理化特性。将CD47抗体吸附于CS-HA-PECS表面形成稳定的CD47/CS-HA-PECS靶向纳米颗粒。结果成功合成CS-HA-PECS,其在水和PBS溶液中均具有长期的稳定性;CS-HA-PECS的聚合过程及其物理化学性质受到电荷混合比和聚合物浓度等参数的影响;CD47抗体可稳定高效地吸附于CS-HA-PECS的表面,形成稳定的CD47/CS-HA-PECS纳米颗粒复合物,其平均粒径在375～620nm之间,Zeta电位为正。结论成功合成了CD47/CS-HA-PECS靶向纳米颗粒,为动脉粥样硬化靶向纳米给药奠定了基础。

CD47抗体对异丙肾上腺素诱导的大鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的观察CD47抗体对异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠原代心肌细胞损伤的保护作用。方法分离培养40只1~3日龄的SD大鼠心肌细胞,使用ISO诱导原代大鼠心肌细胞损伤模型。采用随机数字表法将大鼠心肌细胞分为正常对照组(Control组)、模型组(ISO组)、治疗组(Anti-CD47+ISO组)。Control组,心肌细胞常规培养基培养;ISO组,常规培养基培养,加入ISO(10^(-5) mol/L)继续培养48 h;Anti-CD47+ISO组,常规培养基加入CD47抗体(7μg/m L)培养12 h后,加入ISO(10^(-5)mol/L)继续培养48 h。测定培养细胞上清液乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)含量;使用Annexin-V与PI双染法及流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;超氧化物阴离子荧光探针(DHE)染色检测心肌细胞活性氧(ROS)水平;Western blot检测心肌细胞CD47、Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果与Control组比较,ISO组心肌细胞的凋亡率明显升高(P<0.01);与ISO组比较,Anti-CD47+ISO组可显著降低细胞凋亡率(P<0.01)。与Control组比较,ISO组LDH、CK、MDA和ROS水平显著升高(P<0.01),SOD和NO水平显著降低(P<0.01);与ISO组比较,Anti-CD47+ISO组SOD和NO水平显著提高(P<0.01),LDH、CK、MDA以及ROS水平显著降低(P<0.01)。Western blot结果显示,与Control组比较,ISO组CD47和Bax表达显著升高(P<0.05、P<0.01),Bcl-2表达显著降低(P<0.01);相比于ISO组,Anti-CD47+ISO组CD47和Bax表达明显降低(P<0.01),Bcl-2表达明显升高(P<0.05)。结论 CD47抗体可能通过抑制ROS的产生、调节Bcl-2/Bax蛋白表达比例来抑制心肌凋亡,从而对ISO诱导的大鼠原代心肌细胞损伤产生保护作用。

抗独特型抗体在CD47单抗治疗患者抗体筛查和配血中的应用

目的 对接受CD47单克隆抗体治疗的受试组患者使用CD47抗独特型抗体(CD47 anti-idiotypic antibody, CD47 AID)中和法(方法1)与缺乏抗IgG4抗人球蛋白法(方法2)进行输血前抗体筛查和主侧配血,比较经此两种方法配血后的输注效果,以评估CD47 AID中和法的可行性。方法 对本院接受CD47单克隆抗体治疗的18位临床受试者用药物后标本,使用方法1与方法2进行抗体筛查和主侧配血,比较输血后血红蛋白差值ΔHb(输血后Hb-输血前Hb)是否有差异;比较使用方法1进行配血的受试组患者与对照组患者(使用普通微柱凝胶法配血且未使用CD47单抗)输血后ΔHb是否有差异。结果 使用方法1与使用方法2进行配血的患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 7.36±0.94,P>0.05);使用方法1进行配血的受试组患者与未使用CD47单抗的对照组患者输血后ΔHb比较,两者之间无统计学差异(8.40±0.71 vs 6.59±0.77,P>0.05)。结论 受试组患者采用方法1配血具有与方法2配血相同的输注效果,且具有操作简单、结果客观准确的特点,推荐使用方法1对使用CD47单抗的患者进行输血前抗体筛查及主侧配血。

壳聚糖和透明质酸纳米聚电解质复合物吸附动脉粥样硬化特异抗体CD47的合成及体内外靶向实验

目的研究壳聚糖和透明质酸聚电解质复合物(PEC)纳米颗粒在生理盐水中的稳定浓度和物理化学参数对靶向抗体CD47有效吸附的影响以及合成的纳米载体对于血管内皮细胞的体外靶向性。方法壳聚糖(CS)作为聚阳离子与透明质酸(HA)(作为聚阴离子)发生电荷中和,合成壳聚糖和透明质酸聚电解质复合物纳米粒子。一模型抗体——动脉粥样硬化靶向抗体CD47在水或PBS溶液中,与纳米颗粒作用4 h后,定量吸附在CS-HA纳米颗粒表面。将合成的纳米载体体内外与血管内皮细胞及动脉粥样斑块相互作用,研究其靶向吸附作用。结果络合过程和胶体的物理化学性质受到外部因素的影响,如电荷混合比和聚合物浓度等参数。通过上述原理合成了非化学计量的CS-HA纳米胶体,在水或PBS(pH 7.4)溶液中保持稳定1个多月。扫描电镜检测其形貌特征。CS-HA/CD47抗体纳米颗粒平均粒径在375～620 nm之间,Zeta电位为正。CD47抗体靶向的纳米载体可在体外有效吸附到血管内皮细胞及动脉粥样斑块的表面。结论成功合成了CS-HA/CD47抗体纳米颗粒,该靶向纳米载体在体外可有效吸附到血管内皮细胞株及动脉粥样斑块的表面,是对动脉粥样硬化靶向给药具有应用前景的有效纳米载体。

抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21(DE3)原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株-7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗-7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。

CD47单克隆抗体对输血相容性检测的干扰及配血策略

目的探讨CD47单克隆抗体药物对输血相容性检测的干扰及配血策略。方法以2021年8—12月在河南省人民医院血液科接受CD47单克隆抗体药物治疗、有输血需求的骨髓增生异常综合征患者为研究对象,采用中和试剂对患者血浆进行处理,对比中和试剂处理前后输血相容性试验的差别,观察中和试剂去除血液中CD47单克隆抗体的有效性。结果药物浓度为30 mg·kg^(-1)时,有3例接受药物治疗的患者出现血型正反定型不一致、直接抗人球蛋白阳性、不规则抗体筛查阳性、交叉配血主侧不相合,使用中和试剂处理过的血浆再次进行常规检测及交叉配血,输注配血相合的红细胞,患者血红蛋白水平提升,总胆红素和间接胆红素水平改变。结论高浓度CD47单克隆抗体对输血相容性检测有干扰,针对CD47单克隆抗体药物(IBI188)使用中和试剂处理过的血浆进行不规则抗体筛查和交叉配血,发放配血相合的血液,监测血红蛋白的溶血项的改变,确保临床输血安全。

CD47-SIRPα阻断剂在实体癌和血液癌中的研究现状

CD47属于免疫球蛋白家族成员之一,广泛存在于细胞膜表面,特别是在肿瘤细胞中高表达。肿瘤细胞表面的CD47可与巨噬细胞表面的抑制性免疫受体--信号调节蛋白α(SIRPα)相结合,形成CD47-SIRPα信号复合体,该复合体能抑制巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬,使肿瘤细胞逃避免疫监视,从而促进肿瘤的发展。目前免疫治疗主要是通过抗CD47抗体抑制CD47-SIRPα信号通路,激活先天性免疫反应和适应性免疫反应,提高巨噬细胞靶向杀伤肿瘤细胞的能力。CD47-SIRPα正逐渐成为肿瘤免疫治疗的新型有效免疫治疗靶标,论文对CD47-SIRPα阻断剂在实体癌和血液癌的研究现进行以综述,以期为实体癌和血液癌的研究提供参考。

鼠源抗CD47单克隆抗体的筛选及活性评价

通过杂交瘤技术筛选得到了一株鼠源抗白细胞分化抗原47(CD47)单克隆抗体。采用聚乙二醇融合法,将小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法筛选抗CD47的杂交瘤细胞,通过Protein G亲和柱纯化抗体,利用十二烷基磺酸钠(SDS)-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法检测目的蛋白的相对分子质量,通过生物分子相互作用分析仪检测目的抗体的亲和力,并通过ELISA法测定抗CD47抗体的信号调节蛋白α(SIRPα)的阻断效力。用藻红蛋白(PE)标记的Raji细胞与不同浓度的抗CD47单抗共同孵育,检测抗CD47抗体促进巨噬细胞吞噬的作用。采用血凝试验对抗CD47单抗导致红细胞凝集的能力进行了分析,并进一步通过小鼠实体瘤模型,考察抗CD47单抗的抑制肿瘤生长作用。结果显示,筛选得到的一株杂交瘤细胞,即抗CD47单克隆抗体3D8,其亲和力常数值为1.29×10^(-11)mol/L,ELISA法测得其半数有效浓度(EC_(50))值为0.17 nmol/L,可有效阻断CD47与SIRPα的相互作用,增强巨噬细胞吞噬肿瘤细胞的能力,吞噬率达85%。该抗体在亲和力、阻断力、吞噬率等方面均优于在售抗体,同时不会导致红细胞凝集。在小鼠实体瘤模型中,肿瘤生长抑制率为95.44%,可明显抑制肿瘤生长。本研究为后期抗CD47抗体的人源化和抗CD47抗体的临床前研究提供了参考。

靶向CD47在多发性骨髓瘤治疗中的研究现状

CD47是一种跨膜蛋白,可以在多种正常细胞上表达。CD47与信号调节蛋白α相互作用向巨噬细胞发出“不要吃我”的信号,阻碍其吞噬作用和免疫反应。肿瘤细胞过度表达CD47以逃避免疫监视。CD47在多发性骨髓瘤细胞上高表达,且随着疾病的进展而增加,其过度表达与不良临床结果相关。目前,通过阻断CD47“不要吃我”信号的巨噬细胞检查点的免疫疗法是治疗血液肿瘤的一种潜在疗法,并且正在临床前和临床试验中进行研究,以证明其在治疗血液肿瘤方面的安全性和有效性。本文重点关注靶向CD47单克隆抗体在多发性骨髓瘤中的应用,以期为其治疗提供参考。

靶向CD47治疗髓系肿瘤的相关进展

CD47作为“don’t eat me”信号在髓系肿瘤表面表达上调,可与巨噬细胞上信号调节蛋白α相结合抑制巨噬细胞吞噬功能,在肿瘤细胞的免疫逃避中起作用。有研究表明,CD47高表达与骨髓增生异常综合征的进展及急性髓系白血病的不良预后相关。CD47作为固有免疫中备受瞩目的免疫检查点,靶向CD47治疗髓系肿瘤的多种药物目前已经进入临床试验阶段,有望成为治疗髓系肿瘤的强有力手段。