整合素相关蛋白CD47在乳腺癌中表达临床意义

目的:探讨整合素相关蛋白CD47在乳腺癌中表达的临床意义。方法:应用MaxVinsion免疫组织化学技术对浸润性导管癌患者63例进行CD47表达标记。结果:63例浸润性导管癌患者阳性表达率为80.9%,CD47阳性表达率与患者年龄、肿瘤大小及TNM分期比较,结果有非常显著性差异,CD47阳性表达率与乳腺癌组织学分级和腋窝淋巴结转移情况结果比较,无显著性差异,并且CD47阳性表达率与肿瘤分子表型的雌激素(Estrogen receptor,ER)、孕激素(Progestcrone receptor,PR)、细胞表皮生长因子2(Cell epidermal growth factor,CerBb-2)的阳性结果比较,结果比较有显著性差异,CDK2阳性表达与肿瘤分子分型增殖指数ki67结果比较无显著性差异。结论:CD47是浸润性导管癌乳腺患者有效的预后因子。

抗CD47单克隆抗体制备及其促巨噬细胞吞噬作用鉴定

目的:制备可识别肿瘤细胞表达CD47蛋白的抗CD47单克隆抗体,并鉴定其抗肿瘤作用。方法:利用BL21(DE3)原核表达系统表达CD47胞外段蛋白,利用Ni-NTA层析纯化表达蛋白。免疫BALB/c小鼠,制备并筛选分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株。利用正辛酸-硫酸铵沉淀方法纯化抗CD47单抗。利用流式细胞术检测纯化抗体的活性。利用巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验,检测抗CD47单抗的抗肿瘤作用。结果:表达并纯化了CD47胞外段蛋白,筛选到了分泌抗CD47单克隆抗体的杂交瘤细胞株-7D4,流式细胞术检测结果显示,抗体具有结合肿瘤细胞的活性,但是对不同肿瘤类型细胞的结合效率存在差异。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养试验发现,利用抗体封闭肿瘤细胞CD47信号后,可以增强巨噬细胞对肿瘤细胞的吞噬作用。结论:抗CD47单抗-7D4可以促进巨噬细胞的吞噬作用,具有潜在应用价值。

过表达CD47重组慢病毒的制备及表达

目的 构建hCD47基因重组慢病毒并观察其在人胶质瘤U87细胞中的表达。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增目的基因hCD47,采用双酶切实验鉴定重组慢病毒载体pLVX-hCD47-3flag-ZsGreen-Puro,接着进行慢病毒的包装,将质粒载体导入293T细胞观察转染效率。进一步获取慢病毒转染效率,将慢病毒干预HEK293观察转染效率,最后采用逐孔稀释梯度法检测病毒滴度。采用稳转细胞系的方法将构建好的hCD47重组慢病毒转入胶质瘤U87细胞中,倒置荧光显微镜下观察荧光强度及范围,Western blot检测CD47蛋白表达情况。结果 PCR以及酶切鉴定表明重组慢病毒载体克隆为阳性,病毒包装以及检测转染效率实验结果均显示较高的荧光强度,表明慢病毒被成功构建。病毒滴度检测结果显示为1×10^(8)TU·mL^(-1)。Western blot结果显示,目的基因CD47在稳转hCD47重组慢病毒U87细胞中(hCD47)相比对照组(NC)表达升高。结论 成功构建能够体外有效转染U87细胞的hCD47慢病毒。

监测免疫细胞新方法

为防止被体内免疫系统的杀伤,正常细胞带有一种白色标示物--表面蛋白.有了表面蛋白,免疫系统就把它们识别为自身的成份.到目前为止,研究人员仅仅证明了一种类型的标识物,即所谓的Ⅰ型主要组织兼容性复合MHC蛋白--也称作转移抗原,主要分布于大多数健康细胞表面.但是新的发现打破了MHC蛋白在自我标识物方面的独有性.