不同细胞因子组合对人脐血单个核细胞体外扩增及CD49d和CXCR4表达的影响

为了探讨不同的细胞因子组合对脐血单个核细胞体外的扩增作用及扩增后CD49d和CXCR4的变化,将新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7天,在0天,7天检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位(CFU)数.根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组;SF组(SCF+FL);SFT组(SCF+FL+TPO)和SFT6组(SCF+FL+TPO+IL-6)。结果表明,和对照组相比,SF组合仅能低水平支持脐血造血细胞扩增,加入TPO后即SCF/FL/TPO组合能有效的扩增脐血细胞,但SFT和SFT6两组之间差异却无明显发生(P>0.05);SF,SFT和SFT63组的细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞CD49d,CXCR4的表达,但3组之间差异无显著性(P>0.05)。结论:SF组合可协同扩增人造血细胞,但协同作用较弱;TPO在脐血造血干/祖细胞体外扩增中起重要调节作用,而IL-6作用不显著;SCF/FL/TPO3种因子组合不仅可促进脐血造血祖细胞的扩增,而且可上调脐血造血细胞CD49d,CXCR4表达。

蝎毒多肽提取物对白血病小鼠E-钙黏蛋白、CD49d和CXCR4表达的影响

目的探讨蝎毒多肽提取物(PESV)对E-钙黏蛋白、CD49d和CXCR4表达的影响,探究PESV对白血病细胞髓外浸润的影响与机制。方法NOD-SCID小鼠50只,建立人白血病NOD-SCID小鼠髓外浸润模型,随机分为5组,每组10只,分别为PESV高、中、低剂量组,模型组和空白组。PESV高、中、低剂量组小鼠分别尾静脉注射PESV1.2,0.6,0.3 mg/kg,模型组和空白组均注射0.9%的生理盐水0.3 ml,治疗28 d后,用流式细胞术检测小鼠外周血中CD49d和CXCR4的表达,35 d处死小鼠后用免疫组化法检测其肝脏中E-钙黏蛋白表达。结果治疗组CD49d和CXCR4的表达均低于模型组(P<0.01),各治疗组E-钙黏蛋白表达均高于模型组(P<0.01)。结论PESV可以有效地提高白血病小鼠E-钙黏蛋白的表达,降低CD49d和CXCR4的表达,具有较好的阻抑白血病细胞髓外浸润的作用。

慢性再生障碍性贫血患者治疗前后细胞粘附分子CD11a、CD49d表达的变化

为探讨细胞粘附分子 (CAMs)CD11a、CD4 9d在慢性再生障碍性贫血 (CAA)患者的表达及与临床的关系 ,采用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶法 (APAAP法 )测定 2 0例慢性再生障碍性贫血患者在SSL/C方案治疗前后骨髓及外周血单个核细胞 (MNC)粘附分子CD11a和CD4 9d表达的阳性细胞百分率。结果发现 ,慢性再生障碍性贫血患者治疗后骨髓及外周血MNC的CD11a及骨髓MNC的CD4 9d表达的阳性细胞百分率较治疗前升高 ,外周血MNC的CD4 9d表达治疗前后无显著差异。结论 :细胞粘附分子表达降低在慢性再生障碍性贫血的发病中发挥了一定作用 ,随着病情的缓解粘附分子表达增强 ,纠正再生障碍性贫血患者粘附分子的异常表达 ,可以改善其骨髓造血功能。

抗CD49d单克隆抗体与rhG CSF动员的外周血干细胞移植重建小鼠造血功能的比较研究

为比较研究抗CD49d单克隆抗体和重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的外周血干细胞对造血功能重建的影响 ,经放、化疗预处理的BALB/c小鼠分别接受经生理盐水(对照组 )、rhG CSF(实验 1组 )、抗CD49d单克隆抗体 (实验 2组 )动员的同系小鼠的外周血干细胞移植 ,观察受体小鼠的 4周存活率、外周血白细胞 (WBC)、骨髓有核细胞 (BMNC)、粒细胞巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM)及脾集落形成单位 (CFU S)等指标。结果显示 ,实验 1、2组小鼠的 4周存活率、WBC、BMNC ,CFU GM和CFU S均明显高于对照组(P <0 0 1) ,实验 1、2组之间比较差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。提示抗CD49d单克隆抗体或rhG CSF均能动员小鼠外周血干细胞 ,并能重建同系小鼠的造血功能。

CD49d在白血病中的表达及预后意义

目的探讨CD49d在各型白血病中的表达及其预后意义。方法采用流式细胞术对60例白血病患者进行免疫分型及CD49d表达检测,分析白血病患者的无病生存期与CD49d表达的相关性。结果 (1)CD49d在各型白血病中均有表达,在慢性白血病中的表达高于急性白血病,在慢性淋巴细胞白血病的表达率高于慢性粒细胞白血病,其表达率分别为100%和75%。(2)在急性粒细胞白血病(Acute myeloid leukemia,AML)各型中,AML-M4和AML-M5的表达略高于其他各型。(3)CD49d表达与提示预后不良的CD7、CD64等表达正相关。结论 CD49d的表达与白血病的分化程度有关,可能与白血病的预后关系密切。

卡维地络对心绞痛患者白细胞表面CD11b及CD49d表达的影响

目的 :研究卡维地络对心绞痛患者外周血白细胞表面 CD11b及 CD49d表达的影响。方法 :住院冠心病患者共48(男 3 7,女 11)例 ,其中稳定型心绞痛 (SAP) 2 2例 ,不稳定型心绞痛 (UAP) 2 6例 ,随机将 SAP,U AP 2组患者 ,各分为治疗组 (给予卡维地络 10 m g口服 ,2 / d,术前 7d起使用 )及对照组 (给予美托洛尔 12 .5 m g口服 ,2 / d,术前 7d起使用 ) ,分别于服药前及手术前采集股动脉血样 ,用 FCM直接免疫荧光法检测股动脉血中性粒细胞 (Neu)、单核细胞 (Mon)表面黏附分子 CD11b及 CD49d表达水平。结果 :服药前两组 CD11b及 CD49d表达均无显著差异 ,UAP患者卡维地络组与美托洛尔组 Neu与 Mon CD11b及 CD49d均高于 SAP患者组 (P <0 .0 5 ) ,服药 7d后UAP组 Neu CD11b卡维地络组明显低于美托洛尔组。结论 :不稳定心绞痛 Mon及 Neu CD11b及 CD49d表达均显著高于 SAP。卡维地络降低 Neu表面 CD11b及 CD49d表达 ,对

脓毒症患儿外周血淋巴细胞CD11a、CD54、CD49d及CD106的表达

目的探讨脓毒症患儿外周血淋巴细胞CD11a、CD54、CD106及CD49d的表达意义。方法分别于急危重期、恢复期采集脓毒症患儿外周血,用流式细胞术检测CD11a、CD54、CD106及CD49d水平。结果观察组在急危重期淋巴细胞CD11a、CD54、CD106及CD49d阳性率与对照组比较明显升高;恢复期脓毒症组外周血淋巴细胞CD54、CD49d较对照组高,CD11a、CD106与对照组比较差异无统计学意义,严重脓毒症组、脓毒症休克组CD11a、CD54、CD106及CD49d与对照组比较,差异均有统计学意义。结论脓毒症患儿外周血淋巴细胞黏附分子CD11a、CD54、CD106及CD49d在急危重期及恢复期均有升高,在脓毒症过程中发挥了一定的作用,CD11a、CD54、CD106及CD49d表达明显升高可能是病情危重的信号。

新型外周血CD34^+细胞动员剂——抗CD49d单克隆抗体的实验研究

为了探讨外周血干细胞动员的新途径 ,用抗CD4 9d单克隆抗体和rhG CSF及二者联合给小鼠皮下注射 ,动态观察小鼠外周血的白细胞总数和CD34+ 细胞数的变化 ,并将各种动员方法所获得的干细胞分别进行干细胞移植。结果发现 ,给予动员剂后小鼠的外周血白细胞总数和CD34+ 细胞比例明显升高 ,以rhG CSF和抗CD4 9d单克隆抗体联合给药效果最佳。移植后各组小鼠均获造血重建 ,以联合动员组造血恢复速度最快。结论 :抗CD4 9d单克隆抗体能有效动员小鼠外周血干细胞 ,与rhG CSF具有协同作用。

CD49d单抗加rhG-CSF动员外周血干细胞对造血重建的影响

目的探讨抗CD49d单克隆抗体穴McAb雪联用重组人粒细胞集落刺激因子穴rhG-CSF雪动员的外周血干细胞对造血重建的影响。方法经放、化疗预处理的BALB/c小鼠,分别接受经rhG-CSF(实验1组)、抗CD49dMcAb(实验2组)、抗CD49dMcAb联合rhG-CSF(实验3组)动员的同系小鼠的外周血干细胞移植,观察受体小鼠的4周存活率及外周血白细胞(WBC)、骨髓单核细胞(BMNC),粒细胞巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)及脾集落形成单位(CFU-S)等指标。结果实验3组小鼠的4周存活率、WBC、BMNC,CFU-GM、CFU-S数均明显高于实验1和2组,具有显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论抗CD49dMcAb联合rhG-CSF应用能协同动员小鼠外周血干细胞,并能成功重建同系小鼠的造血功能。

CD49d在白血病患者诊断中的应用

目的:观察探讨CD49d在白血病患者诊断中的应用,总结其临床意义。方法:选取40例白血病患者,分别对免疫分型和采用流式细胞术CD49d的表达进行检测,观察分析其检测结果。结果:CD49d在各类型白血病患者中皆有分布,以AML-M4型和CLL型分布率最高,皆为100%,高于其它类型的表达,差异显著(P<0.05);CD49d阳性的患者与阴性患者的中位无病生存期(DFS)比较无显著性差异(P>0.05);CD49d阳性率与CR率间存在明显的相关性(P<0.05)。结论:CD49d与白血病的分化程度有一定的相关性,在白细胞患者诊断中对CD49d的表达进行检测,对预测其预后具有重要的临床意义。

白细胞介素6、可溶性白细胞介素6受体和白细胞介素3对人脐血单个核细胞扩增后CD49d和CXCR4表达的影响

由于单份脐血所含造血干／祖细胞的数量难以满足成年人及较大体重患者的需要，而且脐血移植后造血细胞恢复时间延迟，限制了其在临床上的应用，体外扩增脐血造血细胞有望解决这一问题。体外扩增的脐血造血细胞移植后能否存活，并重建受者的造血功能，首先需要造血细胞能够归巢到受者的造血微环境，而这和脐血体外扩增时细胞因子的选择密切相关。有研究认为，以白细胞介素6（IL-6）及其可溶性受体（sIL-6R）、干细胞因子（SCF）、酪氨酸激酶受体3类配基（FL）及促巨核细胞生成因子（TPO）组合扩增的脐血CD34＋细胞能够植人NOD／SCID小鼠，而白细胞介素3（IL-3）可减弱扩增后脐血细胞的植人能力。

抗CD49d McAb联合rhG-CSF动员的PBSC救治放射损伤小鼠

目的 观察抗CD4 9d单克隆抗体 (McAb)联用重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的外周血干细胞 (PBSC)救治放射损伤小鼠的效果。方法 8 5Gy6 0 Coγ射线照射的BALB c小鼠 ,分别接受经rhG CSF(1组 )、抗CD4 9dMcAb(2组 )、rhG CSF联合抗CD4 9dMcAb(3组 )动员的PBSC移植。并以生理盐水组为对照 ,观察受体小鼠的 4周存活率、外周血白细胞 (WBC)、骨髓有核细胞(BMNC) ,粒细胞巨噬细胞集落形成单位 (CFU GM)及脾集落形成单位 (CFU S)等指标。结果 实验 3组小鼠的 4周存活率、WBC、BMNC ,CFU GM、CFU S数均明显高于对照组、1组和 2组 ,差异具有显著性或非常显著性 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论 抗CD4 9dMcAb联合rhG CSF使用能协同动员小鼠PBSC ,并能成功救治放射损伤小鼠。

慢性淋巴细胞白血病CD49d表达模式与分子遗传学和热点突变基因的相关性

目的探索慢性淋巴细胞白血病患者CD49d表达模式与分子遗传学和热点突变基因的相关性。方法流式细胞术检测CD49d表达模式, 以单峰与双峰、阴性与阳性为分组依据。采用组合探针荧光原位杂交(FISH)进行分子遗传学分析, 二代测序(NGS)进行基因突变检测。结果 CD49d阳性患者43例(23.89%), CD49d阴性患者137例(76.11%), CD49d单峰表达患者96例(53.33%), CD49d双峰表达患者84例(46.67%)。与CD49d阴性组患者相比, CD49d阳性组患者Rai分期高(P=0.048), 脾脏增大比例高(P=0.030)。与CD49d单峰患者相比, CD49d双峰患者脾脏增大比例高(P=0.009)。CD49d双峰阴性组11q22-发生率显著高于单峰阴性组(24.29%对10.45%, P=0.043)。CD49d单峰组+12发生率高于双峰组(16.67%对5.95%, P=0.035), 单峰阳性组+12发生率高于双峰阴性组(17.24%对4.29%, P=0.045), 单峰阴性组+12发生率高于双峰阴性组(16.42%对4.29%, P=0.024)。CD49d阳性组BIRC3突变率高于CD49d阴性组(11.63%对2.92%, P=0.037)。结论 CD49d与11q22-、+12和BIRC3基因突变有显著的相关性, CD49d呈双峰表达与预后较差指标相关。

当归多糖照射前后给药对放射损伤小鼠造血功能恢复的比较研究

目的:研究和比较当归多糖(Adhesion molecule,APS)2种不同给药方式对放射损伤小鼠造血功能的修复作用。方法:外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数;流式细胞术检测APS对放射损伤小鼠Sca-1+BMNC粘附分子CD44和CD49d表达、BMNC细胞周期的影响;MTT法测定APS对放射损伤小鼠骨髓细胞增殖活性的影响。结果:与正常组比较,各NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少,Sca-1+BMNCCD44、CD49d表达、骨髓细胞增殖活性明显下降,BMNCG0/G1期细胞比例显著增加。各APS预处理组能在更早期促进外周血各系和BMNC数目恢复、更早促进Sca-1+BMNC表面CD44和CD49d的表达下降使放射损伤小鼠造血功能较同时间点、同等剂量APS治疗组恢复快。各APS预处理组骨髓细胞增殖活性、BMNCG0/G1期细胞比例较同时间点、同等剂量APS治疗组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:APS对放射损伤小鼠造血功能具有修复作用,初步观察APS预处理组优于APS治疗组。

当归多糖对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞黏附分子表达及细胞周期的影响

目的探讨当归多糖(APS)对放射损伤小鼠骨髓单个核细胞(BMNC)黏附分子表达及细胞周期的影响,旨在阐明APS防护辐射性造血损伤的分子机制。方法建立小鼠放射损伤模型后连续给予不同剂量APS 13d,在不同时间点进行外周血白细胞、红细胞、血小板及BMNC计数;流式细胞术检测小鼠Sca-1+BMNC黏附分子CD44和CD49d表达及BMNC细胞周期的变化;Western blot和RT-PCR方法分别检测小鼠BMNC细胞周期蛋白(Cyclin)D2 mRNA和蛋白表达水平的改变。结果与正常组比较,NS组外周血WBC、RBC、PLT及BMNC计数明显减少,Sca-1+BMNC CD44、CD49d表达明显下降,G0/G1期细胞比例显著增加,CyclinD2 mRNA和蛋白表达水平明显降低。2 mg/kgAPS组和8 mg/kgAPS组能增加外周血各指标及BMNC计数,第7d明显提高Sca-1+BMNC黏附分子CD44、CD49d的表达水平,第14d能降低Sca-1+BMNC黏附分子CD44、CD49d的表达水平,降低G0/G1期细胞比例,提高CyclinD2mRNA和蛋白表达水平。结论当归多糖能通过调节放射损伤小鼠Sca-1+BMNC黏附分子的表达水平、上调BMNC的CyclinD2 mRNA和蛋白表达水平来加速BMNC G1期向S期的转换,促进造血恢复。

当归多糖对小鼠骨髓和外周血单个核细胞黏附分子表达及黏附功能的影响

目的:研究当归多糖(APS)对小鼠骨髓和外周血单个核细胞(MNC)黏附分子表达及黏附功能的影响,旨在为APS在造血调控和动员方面的机制提供实验依据.方法:流式细胞术检测APS对小鼠骨髓和外周血MNC CD49d和CD44的表达影响;MTT法检测APS体内外作用对小鼠骨髓和外周血MNC黏附功能的影响.结果:APS(4 mg/kg)体内作用后骨髓和外周血MNC表面CD49d表达的阳性率均明显下降(P<0.01);骨髓MNC表面CD44也有所下降(P<0.05),外周血MNC表面CD44无明显变化(P>0.05).APS(4 mg/kg)体内作用后,小鼠骨髓和外周血MNC对纤维连接蛋白(FN)的黏附率明显低于NS组(P<0.01),且APS组与rhG-CSF组比较无显著性差异(P>0.05);除50 mg/L APS组以外各浓度实验组均能使小鼠骨髓和外周血MNC对FN的黏附率减弱(P<0.05),同一APS浓度体外作用后各作用时间点的骨髓和外周血MNC黏附率均无明显差异(P>0.05).结论:APS能降低骨髓的CD49d和CD44及外周血的CD49d的表达,且体内外作用均能降低骨髓和外周血MNC对FN的黏附率.

白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞扩增及归巢能力的影响

目的:体外扩增脐血造血细胞的目的是促进脐血造血细胞的植入能力,并重建受体的造血功能,而这和脐血造血干/祖细胞的细胞数和体外扩增后细胞的归巢能力密切相关。实验拟观察白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体对人脐血单个核细胞体外扩增及扩增后对归巢有关的CD49d和CXCR4表达的影响。方法:实验于2005-06/2006-03在广州医学院附属广州市第一人民医院血液实验室完成。①实验材料:10份足月顺产健康新生儿脐血标本由广州市第一人民医院妇产科提供,产妇对实验知情同意,实验经医院伦理委员会批准。②实验方法:将由新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7d。根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组(简称SFT组)、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子+白细胞介素6组(简称SFT6组)、干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子+白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体组(简称SFT6s组)。SFT6s组根据可溶性白细胞介素6受体浓度又分为50,100,500,1000μg/L组。③实验评估:在0,7d检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD49d+的细胞数。结果:①培养7d后,SFT、SFT6、SFT6s组有核细胞数及CD34+细胞数扩增效果优于对照组(P<0.05),SFT、SFT6、SFT6s3组间差异不显著(P>0.05)。②与对照组比较,SFT、SFT6、SFT6s组细胞因子组合均可提高脐血CD34+细胞上CD49d,CXCR4表达,3组间差异不显著(P>0.05)。③500,1000μg/LSFT6s组脐血单个核细胞扩增效果和CD49d和CXCR4表达均优于SFT,SFT6s组和100μg/LSFT6s组(P<0.05),500,1000μg/LSFT6s组比较差异不显著(P>0.05)。结论:在干细胞因子+FLT3配基+促聚核细胞生成因子组合的基础上,加入白细胞介素6/可溶性白细胞介素6受体后可有效地扩增脐血细胞,并促进CD49d和CXCR4表达,对可溶性白细胞介素6受体浓度有一定的依赖性。