乙型肝炎患者外周血B淋巴细胞CD5mRNA表达水平的研究

目的 建立CD5mRNA的逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)测定法 ,探讨外周血B淋巴细胞CD5mRNA水平与乙型肝炎慢性化和严重化的关系。方法 运用RT PCR技术 ,建立了B淋巴细胞中CD5基因mRNA表达水平的半定量测定方法 ,对急、慢性乙型肝炎和肝炎后肝硬化患者进行了研究。结果 急性乙型肝炎患者组外周血B淋巴细胞中CD5mRNA的水平与正常对照组无显著性差别 ,其余各乙型肝炎患者组均显著高于对照组。且肝炎后肝硬化组 >慢性乙型肝炎组 >急性肝炎组(P <0 0 1)。结论 外周血B淋巴细胞CD5mRNA水平与乙型肝炎的发病和慢性化发展密切相关。

乙型肝炎患者自身抗体与外周血CD5^+B细胞、CD5mRNA变化的关系

目的 探讨乙型肝炎 (乙肝 )患者产生的各种自身抗体与外周血CD5 + B细胞百分率和B细胞CD5mRNA水平之间的关系。方法 用ELISA测定乙肝患者类风湿因子 (RF)、抗核抗体 (ANA)、抗心磷脂抗体 (ACA)、抗肝细胞膜特异性脂蛋白抗体(抗LSP)、抗亲环素A抗体 (抗CyPA)、抗钙调素抗体 (抗CaM) ;用免疫组化法检测CD5 + B细胞、RT PCR法检测CD5mRNA。结果 慢性乙肝 (慢肝 )、慢性重症乙肝 (慢重肝 )、肝炎后肝硬化 (肝硬化 )患者ACA、抗CyPA、抗CaM水平与CD5 + B细胞百分率和CD5mRNA水平呈正相关。结论 CD5 + B细胞参与乙肝的慢性化和严重化病程 。

利用mRNA技术制备人CD5蛋白多克隆抗体

[目的]体外合成人CD5(human CD5,hCD5)mRNA,以包封后的hCD5 mRNA作为免疫原,制备并鉴定兔抗hCD5多克隆抗体。[方法]用RT-PCR从Jurkat细胞中扩增出hCD5基因胞外域序列,构建重组质粒pT7kan hCD5,经体外转录和脂质体包封获得LNP-hCD5 mRNA,免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用间接ELISA、Western Blot、流式细胞术等方法检测抗体的生物学活性。[结果]成功构建重组质粒pT7kan hCD5,动物免疫LNP-hCD5 mRNA后产生的多克隆抗体具有良好的生物学活性。血清抗体效价可达到1∶625000,Western Blot结果显示纯化后的抗体能特异性识别hCD5蛋白,流式鉴定显示纯化后的抗体能特异性识别天然形式的hCD5蛋白。[结论]用mRNA技术所制备的羊抗hCD5多克隆抗体具有高效价和特异性,为检测天然形式的hCD5蛋白奠定了基础。