AECOPD合并肺炎患者外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞及IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达水平及意义分析

目的探究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并肺炎患者外周血CD16^(+)/56^(+)自然杀伤(NK)细胞、白介素-12p70(IL-12p70)、白介素-10(IL-10)、白介素-4(IL-4)、干扰素-γ(IFN-γ)表达及临床意义。方法选取274例AECOPD患者,根据是否合并肺炎分为单纯AECOPD组89例、AECOPD合并肺炎组185例(根据肺炎严重程度分为重症组85例、非重症组100例),检测患者入院时外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞及IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达水平。结果AECOPD合并肺炎组血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ水平均高于单纯AECOPD组,且重症组均高于非重症组(P<0.05),但不同组外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞比较均差异无统计学意义(P>0.05);Spearman秩相关显示,AECOPD患者血清IL-12p70与IL-10、IL-4、IFN-γ表达呈正相关(P<0.05),但外周血CD16^(+)/56^(+)NK细胞与血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达均无显著相关性(P>0.05);血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ及四者联合预测AECOPD合并肺炎的AUC分别为0.677、0.778、0.618、0.717、0.789,预测AECOPD合并重症肺炎的AUC分别为0.600、0.682、0.611、0.598、0.687。结论AECOPD合并肺炎患者血清IL-12p70、IL-10、IL-4、IFN-γ表达均明显升高,且在重症肺炎中表达更高,其中以IL-10、IFN-γ对AECOPD合并肺炎预测价值较高,而联合检测预测价值更高。

脐血中CD56^(bright)CD16^(dim)/^-NK细胞亚群的检测

目的了解新生儿脐血NK细胞和CD56bright CD16dim/-NK细胞亚群的比率,探讨CD56bright CD16dim/-NK细胞在脐血低免疫应答中的作用。方法使用血细胞分析仪计数淋巴细胞;采用流式细胞术检测脐血、母亲及对照组中NK细胞和CD56bright CD16dim/-NK细胞亚群的比率。结果脐血中淋巴细胞计数显著高于母亲及对照组;NK细胞比率无显著性差异;CD56bright CD16dim/-NK细胞高于母亲及对照组;母亲组CD56bright CD16dim/-NK细胞高于对照组。结论脐血中丰富的CD56bright CD16dim/-NK细胞是脐血低免疫应答的原因之一。

高纯度CD3^-CD56^+CD16^+NK细胞体外扩增技术的研究

本研究探索高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞体外扩增技术。应用免疫磁珠分选法(MACS)分离出高纯度的CD3-CD56+CD16+NK细胞,置于含10%人AB血清的造血干细胞培养基(SCGM)中,加入细胞因子IL-2、IL-15、SCF组成不同培养体系进行体外扩增。采用细胞计数法、流式细胞术免疫表型分析和CCK-8试剂盒检测对K562细胞的杀伤率等方法比较不同培养体系对NK细胞增殖前后的数量、纯度及杀伤活性的影响;并采取相同方法对IL-2的浓度与NK细胞增殖效率及杀伤活性之间的关系进行探讨。结果发现,经免疫磁珠分选法所得的高纯度CD3-CD56+CD16+NK细胞扩增18天后,IL-2/IL-15/SCF组扩增倍数显著高于其他组(p<0.05);含细胞因子组的NK细胞对K562细胞的杀伤活性显著提高,尤其是IL-2/IL-15组和IL-2/IL-15/SCF组在效靶比10∶1时杀伤活性均高达90%以上。低、中、高浓度IL-2组扩增倍数之间比较差异无显著性(p>0.05),而在对K562细胞杀伤率的比较上,高浓度组明显高于低、中浓度组(p<0.05)。结论:在10%人AB血清的SCGM中加入IL-2/SCF/IL-15细胞因子组合,可使经MACS纯化的NK细胞在体外高效地活化及增殖;本培养体系中IL-2浓度较低(<1 000U/ml)时,NK细胞的扩增效率及对K562细胞的杀伤率与IL-2的浓度高低无相关性;而高浓度的IL-2(≥1 000U/ml)可进一步激活纯化后NK细胞的体外杀伤活性。

幼年特发性关节炎患儿外周血自然杀伤细胞CD^(16+56+)的随访意义

目的:探讨幼年特发性关节炎全身型(systemic onset juvenile idiopathic arthritis,SOJIA)患儿治疗过程自然杀伤细胞(natural killer cells,NKcells)CD16+56+比率、骨髓细胞形态学等指标的动态变化在提示病情发展、改善预后方面的意义。方法:对我院2006年6月至2008年6月收治的30例SOJIA病例,分析治疗早期及联合治疗后多项炎症指标、外周血NK cells CD16+56+比率、骨髓细胞形态学动态变化与临床表现之间的关系。结果:所有患儿中10例病情反复难治者,均出现非特异性炎症指标升高,9例外周血NK cells CD16+56+比率降低,8例骨髓细胞形态学发生变化(4例发现异形淋巴细胞,4例有吞噬现象)。及时采用强联合治疗方案后,8例病情得到控制,2例进展为巨噬细胞活化综合征。结论:SOJIA临床表现多样,实验室指标非特异性指向,治疗中同时警惕NK cells CD16+56+比率和骨髓细胞形态学等变化,及早采用个体化强联合治疗方案,是阻止病情发展,改善预后的关键。

CD4^+、CD25^+、CD127 low调节T细胞及CD16^+、CD56NK细胞在脑梗死急性期患者外周血中的表达及其关系

目的探讨脑梗死(CI)患者外周血中CD4+、CD25+、CD127 low调节T细胞及CD16+、CD56NK细胞的百分比变化及两者在CI患者免疫反应中的相互作用机制。方法采用流式细胞术检测50例急性CI患者(发病2d)外周血中CD4+、CD25+、CD127 low调节T细胞及CD16+、CD56NK细胞的表达水平,并与健康对照组进行比较。结果急性CI患者(发病2d)外周血中的CD4+、CD25+、CD127 low调节T细胞的表达水平低于健康对照组,而CD16+、CD56NK细胞的数量则明显高于健康对照组(p<0.05)。结论急性CI患者发病2d,CD16+、CD56NK细胞表达水平上升,而CD4+、CD25+、CD127 low调节性T细胞表达明显低于健康对照组,说明CD4+、CD25+、CD127 low调节性T细胞和CD16+、CD56NK细胞是促进CI发生的原因之一。

肝脏患者外周血CD4＋、CD8＋和CD16＋56＋细胞亚群变化

目的：观察肝病患者PBMC中CD3+、CD4+、CD8+、CDl6+56+细胞亚群变化研究其在肝脏损伤中的意义。方法：流式细胞仪检测肝病患者PBMC中CD3+、CD4+、CD8+、CDl6+56广卜细胞亚群变化。结果：肝病患者除重型肝炎CD3+下降外，其他急慢性肝病组CD3+稍有上升。重型肝炎、慢乙肝活动期和急性肝炎CD4+下降而慢乙肝静止期、失代偿期肝硬化、恶性肿瘤CD4+下降不明显，而代偿期肝硬化CD4+反而上升。除肝硬化CD8+下降外，其他肝病组则上升。肝病CD4+／CD8+变化与CD4+相类似。除重型肝炎和慢乙肝CDl6+56+变化不明显，失代偿期肝硬化、急性肝炎、代偿期肝硬化和恶性肿瘤CDl6广卜56+下降。相关分析发现，肝病患者CDl6+56+与CD3+和CD4+／CD8+负相关，仅CD8+与急、慢性肝损伤指标有关。结论：PBMC中CD3+、CD4+、CD8+、CDl6+56+细胞亚群的检测在肝病的诊治应用意义有限，不宜仅单凭CD4+、CDl6+56+和CD4+／CD8+上升与否和CD8+下降与否来评判疾病和治疗效果，进一步结合其他亚群标志物可能更有利于疾病机制研制了解和疾病的诊断及治疗效果的评定。

急性髓细胞白血病伴有CD16＋/CD56＋的临床特征及预后分析

目的：探讨急性髓细胞白血病（Acute myeloid leukemia，AML）伴有CD16＋/CD56＋的临床特征、LDH的变化、免疫学表型及染色体核型特征及预后。方法：2009年1月至2011年6月在我院确诊的119例非M3型AML患者，进行了细胞形态学、免疫细胞学、染色体，及基因学的检查。对诊断为急性髓性白血病伴有CD16＋/CD56＋的38例患者，分析了临床特征、LDH的变化，染色体核型表达、诱导缓解率及对其预后进行了评判，并与AMLCD56－CD16－进行了比较。结果：38例AMLCD16＋/CD56＋多分布于M2、M5，分别占55.26%、23.68%。M6中未见到CD16、CD56抗原表达。22例AMLCD56＋/CD16＋伴有肝/脾/淋巴结肿大，30例AMLCD56－CD16－伴肝/脾/淋巴结肿大。AMLCD16＋/CD56＋LDH均值为956.68＆#177;842.75，AMLCD56－CD16－LDH均值为498.83＆#177;455.77，有统计学差异。AMLCD56＋/CD16＋中有22例出现了核型异常，主要为t（8,21）、＋4、＋8、＋21；23例AMLCD56－CD16－存在核型异常。两组化疗缓解率分别为44.7％、73％，存在明显差别。且AMLCD56＋/CD16＋缓解时间短，生存期短，与CD56－CD16－AML相比较，P值分别为0.032、0.047，有统计学差异。结论：AMLCD56＋/CD16＋多伴有肝/脾/淋巴结肿大、LDH水平升高、染色体核型异常较常见，缓解率较低，复发率较高，预后较AMLCD56-CD16-差。在巩固治疗中给予大剂量的化疗和尽早行异基因造血干细胞移植，以提高临床治愈率。

CD16+CD56+NK细胞在重症肌无力发病机制中的作用

目的:研究重症肌无力(MG)患者外周血CD16+CD56+ NK细胞的水平,及其在MG发病机制中的作用。方法:应用流式细胞仪检测16例MG患者与20名正常对照外周血CD16+CD56+NK细胞的百分率。结果:MG组外周血CD16+CD56+NK细胞百分率(13.81±5.59)%明显高于对照组的(7.23±1.95)%,P<0.05。结论:NK细胞在MG发病中起重要作用,既可通过分泌IFN2γ等细胞因子途径促进MG的发病,也可通过细胞毒作用发挥免疫效应。

CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化在急性胰腺炎严重程度预测中的作用

目的分析急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)发病早期CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数在AP严重程度预测中的作用。方法采用流式细胞仪荧光抗体标记法分别对164例AP患者的外周血单核细胞进行CD3、CD16、CD56荧光抗体标记,分析比较AP患者CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数情况,及其与AP严重程度的关系。用ROC曲线和AUC评价CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和计数对SAP的诊断价值。结果与正常对照组相比,MAP组、MSAP组和SAP组的CD3^-CD16^+CD56^+百分比和计数均显著下降,各组间差异有统计学意义(P<0.05)。CD3^-CD16^+CD56^+细胞百分比的AUC为0.86(95%CI:0.745~0.973),取值≤5.27%时,特异性为0.92,敏感性为0.79;CD3^-CD16^+CD56^+细胞计数的AUC为0.89(95%CI:0.808~0.961),取值≤0.056×109/L时特异性为0.90,敏感性为0.79。结论 CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞在外周血单核细胞中的百分比和细胞计数对SAP早期诊断有一定的价值。

系统性红斑狼疮患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化的临床意义

分析系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞水平变化。94例SLE患者作为研究对象,另选取同期健康体检者50例为对照组。结果显示SLE组CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数和百分率均明显低于对照组(P<0.05);Pearson积差分析显示CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数与SLEDAI评分和24 h尿蛋白定量呈明显负相关性(P<0.05);以8.04%为临界值,CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞计数判断SLE活动性的灵敏度为57.78%,特异度为78.57%,AUC为0.677。实验表明SLE患者外周血CD3^-CD16^+CD56^+NK细胞表达明显减少,观察其表达水平变化可为判断病情活动度和肾功能损害提供参考依据。

乙型肝炎病毒导致慢性乙型肝炎患者血中CD56^(dim)NK细胞亚群数量下降

目的观察乙型肝炎病毒对慢性乙型肝炎患者NK细胞亚群的影响。方法利用流式细胞术检测20例正常人及62例慢性乙型肝炎患者人外周血淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD56、CD16的表达;同时观察NK细胞亚群改变与乙型肝炎病毒携带量的相关性。结果①人类NK细胞根据CD56分子的表面密度可分为两个截然不同的群体,绝大多数(约90%)的NK细胞低水平表达CD56(CD56dim)且高表达CD16,少数NK细胞(10%)高水平表达CD56(CD56bright)且缺乏或低水平表达CD16;②慢性乙型肝炎患者CD56brightNK细胞的表达及绝对数量较正常对照组无明显的改变,CD3-CD56+、CD3-CD56dimNK细胞的绝对数量较正常对照组显著减少(P<0.05);③慢性乙型肝炎患者NK细胞亚群改变与患者的病毒携带量无关;④慢性乙型肝炎患者CD3+、CD3+CD4+比例及绝对数量较正常对照组显著减少(P<0.05)。结论机体感染乙型肝炎病毒后,导致CD56dim增殖的关键因子IL-2、IL-21活性下降,使CD56dim数量选择性减少,减弱NK细胞介导机体ADCC的功能。

2型糖尿病脾气虚证与CD16+CD56、CD25关系的初步探讨

目的 :探讨 2型糖尿病辨证分型的客观指标。方法 :用流式细胞技术测定 2型糖尿病脾气虚患者CD16+CD56、CD2 5的水平 ,并观察黄芪注射液治疗前后的变化。结果 :2型糖尿病脾气虚患者CD 16+CD56水平明显低于正常组 (P <0 .0 1) ,CD2 5水平明显高于正常组 (P <0 .0 1) ,黄芪注射液治疗前后虽有变化 ,但差异无统计学意义 (P >0 .0 5)。结论 :2型糖尿病脾气虚证患者存在着不同程度的CD16+CD56、CD2 5水平紊乱 ,且两者有一定的内在联系 ,但要作为特异性较强的客观指标 ,有待今后更深入的研究。

CD16+56+、CD19+、NKT水平表达在原因不明复发性流产中的影响

目的探讨CD16+56+、CD19+、自然杀伤T细胞(NKT)在原因不明复发性流产(URSA)中的表达情况。方法 30例URSA患者作为观察组,30例正常女性作为对照A组,30例正常妊娠孕妇作为对照B组,对比三组研究对象外周血液中淋巴细胞的表达情况。结果观察组CD16+56+、CD19+、NKT水平均明显高于对照A组和对照B组(P<0.05)。结论 CD16+56+、CD19+、NKT的高表达在URSA中有着重要意义,为孕妇的诊断和治疗提供依据。

IVF-ET术后妊娠早期绒毛膜下血肿与NK细胞及其表面分子CD49d、CD11b的关系

目的:探讨辅助生殖(IVF^-ET)术后患者妊娠早期绒毛膜下血肿(SCH)与两种NK细胞亚型CD56^+CD16^+NK细胞、CD56^+16^-NK细胞及其表面整合素αm4(CD49d)、整合素αm (CD11b)的关系。方法:选取2019年2月^-2019年12月于本院生殖中心行IVF^-ET术助孕后临床妊娠患者41例,其中伴有绒毛膜下血肿20例为观察组,未合并绒毛膜下血肿21例为对照组。比较两组外周血中CD56^+CD16^+NK细胞、CD56^+16^-NK细胞及其表面整合素分子CD49d、CD11b的表达量。结果:CD56^+CD16^+NK细胞在观察组和对照组外周血淋巴细胞中的占比分别为9.73(6.32~15.18)%、9.96(6.50~12.68)%,CD56^+16^-NK细胞在观察组和对照组外周血淋巴细胞中占比分别为4.61(3.54~8.39)%、5.71(4.35~8.86)%,两组间均无差别(P>0.05)。CD11b在观察组和对照组CD56^+CD16^+NK细胞表面占比分别为98.59(97.20~99.33)%、100.00(99.80~100.00)%,CD11b在观察组和对照组CD56^+16^-NK细胞表面占比分别为78.09(60.64~86.24)%、87.09(80.36~91.33)%,观察组均低于对照组(均P<0.05)。CD49d在观察组和对照组CD56^+CD16^+NK细胞表面占比100.00(99.97~100.00)%、100.00(100.00~100.00)%,CD49d在观察组和对照组CD56^+16^-NK细胞表面占比99.52(97.93~100.00)%、99.44(98.28~100.00)%,观察组与对照组无差异(P>0.05)。结论:IVF^-ET术后妊娠早期合并绒毛膜下血肿患者外周血中CD56^+CD16^+NK细胞、CD56^+16^-NK细胞表面CD11b的表达低于IVF^-ET术后妊娠早期未合并绒毛膜下血肿患者,CD49d在两种细胞亚型表面的表达无差异。

自然杀伤细胞CD57表达降低可增强原发性硬化性胆管炎患者的细胞毒性

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种损伤肝内外胆管的慢性自身免疫性疾病,常常与炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)相关,但其免疫病理学基础仍然是个谜[1]。自然杀伤(natural killer,NK)细胞包括CD56^(bright)CD16^(dim/-)(CD56^(bright))和CD56^(dim)CD16^(bright/+)(CD56^(dim))两种类型。

反复种植失败患者黄体中期自然杀伤细胞的表达研究

目的比较反复种植失败(RIF)患者和经产妇黄体中期外周血和子宫内膜组织CD56^(+)自然杀伤(NK)细胞和CD16+NK细胞的差异,探讨RIF患者全身和局部免疫的特点。方法选取2018年1月至12月在广西壮族自治区妇幼保健院行体外受精(IVF)助孕的RIF患者作为RIF组(20例),经IVF助孕成功分娩1年以上的患者作为对照组(20例),取两组患者黄体中期的外周血和子宫内膜组织,使用流式细胞术测定两组外周血CD56^(+)NK细胞的比率,并使用免疫组织化学方法检测两组子宫内膜CD56^(+)NK细胞和CD16+NK细胞的表达。比较两组患者的外周血CD56^(+)NK细胞的比率和子宫内膜CD56^(+)NK细胞和CD16+NK细胞的表达。结果RIF患者黄体中期外周血CD56^(+)NK细胞比率高于正常组,子宫内膜CD56^(+)NK细胞比率低于正常组,CD16+NK细胞比率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血检测NK细胞比率可能反映子宫内膜局部的免疫状态。

流式细胞技术监测恶性肿瘤患者免疫机能的动态变化

目的 通过对数据的组内和组间比较分析,初步评估免疫细胞监测在恶性肿瘤患者辅助个性化诊疗和预后判断方面的临床可用性。方法 选取我院38例志愿者,建立恶性肿瘤患者(n=19)、健康人群(n=19)两个小组,分别在3个时间点取外周血,检测恶性肿瘤患者T细胞亚群、NK细胞水平以及IL-6、TNF-α含量的动态变化。结果 与健康人群相比,恶性肿瘤患者的细胞毒性T淋巴细胞(CD8^(+))极显著增高(P<0.01),而辅助性T淋巴细胞(CD4^(+))、CD4^(+)/CD8^(+)、免疫总淋巴细胞极显著降低(P<0.01),T淋巴细胞(CD3^(+))两组间差异无统计学意义(P>0.05);肿瘤人群的NK细胞(CD16^(+)和CD56^(+))活性显著增加(P<0.05)。炎症因子方面,肿瘤患者的IL-6极显著高于健康人群(P<0.01),而TNF-α差异无统计学意义(P>0.05)。此外,恶性肿瘤患者的免疫力呈现出明显的个体差异。结论 利用流式细胞技术监测免疫细胞水平,跟踪评估患者免疫机能的变化情况,可以帮助医生更清晰地了解患者的免疫状态,进而为其采取更个性化的诊疗手段提供科学依据。

人外周血NK细胞亚群、表型和生物学特征

目的:探讨人外周血NK细胞的异质性和生物学特征。方法:利用多种标记抗体进行细胞表面和细胞内细胞毒效应分子染色,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上分析NK细胞亚群的多样性和生物学特征。结果:NK细胞可分为CD56+、CD56+CD16+和CD16+三个亚群。所有CD56+NK细胞均表达CD95,但表达水平的高(CD95bright)和低(CD95dim)不同。在CD95bright和CD8+细胞亚群中有43.5%的细胞同时表达颗粒酶B和穿孔素。而CD56+CD16+和CD16+细胞表达CD95均为CD95bright,同时表达颗粒酶B(83.6%)和穿孔素(89.8%)。结论:NK细胞乃异质性群体,随着CD56表达减少和CD16表达增加,其生物效应功能逐渐成熟。