结直肠癌中自然杀伤细胞表型及功能初探

目的·初步探究结直肠癌(colorectal cancer,CRC)患者肿瘤组织中免疫微环境的组成,分析自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)在CRC中的比例、表型及功能特征。方法·收集CRC患者肿瘤组织及配对的癌旁组织和匹配的CRC患者外周血样本,消化组织制备成单细胞悬液,使用流式细胞术检测各类免疫细胞比例,通过t-SNE(t-distributed stochastic neighbor embedding)降维与统计学分析,描述CRC肿瘤免疫微环境的特征。运用流式细胞术检测肿瘤组织和癌旁组织中NK细胞表面活化分子的表达情况,包括CD16、CD27、CD69、晚期活化标志人类白细胞抗原-DR(human leukocyte antigen-DR,HLA-DR)、细胞耗竭标志T细胞免疫球蛋白与黏蛋白结构域3(T cell immunoglobulin domain and mucin domain-3,TIM-3)。运用流式细胞术探究CD38分子在NK细胞上的表达水平,描述CD38highNK细胞的表型特征。利用细胞刺激试剂盒激活NK细胞,通过流式细胞术胞内染色检测NK细胞的功能,包括细胞因子γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF)的表达水平。结果·收集25例CRC患者肿瘤组织及配对的癌旁组织和15例匹配的CRC患者外周血样本。CRC肿瘤组织中包含T淋巴细胞、B淋巴细胞、NK细胞及髓系细胞等免疫细胞。与癌旁组织相比,肿瘤组织中T淋巴细胞(P=0.000)和髓系细胞(P=0.026)的比例显著升高,NK细胞(P=0.007)的比例显著降低,B淋巴细胞比例差异无统计学意义。与癌旁组织相比,肿瘤组织中NK细胞表面CD27(P=0.000)、CD69(P=0.001)表达水平显著降低,同时CD16(P=0.008)、HLA-DR(P=0.000)和TIM-3(P=0.024)的表达水平显著升高,呈现晚期活化和耗竭表型。NK细胞按CD38的表达水平可分为CD38highNK和CD38lowNK 2个亚群。与癌旁组织相比,肿瘤组织CD38highNK(P=0.003)比例显著降低,CD38lowNK比例差异无统计学意义。相比CD38lowNK,CD38highNK的CD27高表达,CD16、NKp46、CD57、CD94、HLA-DR和CD158a低表达(均P=0.000),处于早期分化和未活化的状态。肿瘤浸润的NK细胞与癌旁组织相比,分泌细胞因子IFN-γ(P=0.032)、TNF-α(P=0.042)和GM-CSF(P=0.019)的水平显著降低,表明NK细胞杀伤功能受损。结论·CRC患者肿瘤组织中NK细胞浸润减少,早期分化状态的CD38highNK细胞亚群下降,分泌细胞因子的能力下降并呈现耗竭表型。这些结果提示NK细胞在CRC中功能受损,介导的抗肿瘤免疫应答下降。

膀胱癌细胞高表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)通过上调CD24抑制NK细胞的杀伤

目的 探讨膀胱癌细胞过表达E2因子转录因子家族成员3a(E2F3a)后是否影响自然杀伤(NK)细胞的活化及杀伤并探讨其具体机制。方法 利用慢病毒载体构建E2F3a稳定过表达的人及小鼠膀胱癌细胞株并将其与NK细胞共孵育,乳酸脱氢酶释放实验及流式细胞术检测NK细胞活化及杀伤能力的变化。转录组测序分析膀胱癌细胞E2F3a过表达组与对照组之间的基因表达差异,免疫组织化学染色法检测膀胱癌组织中E2F3a与差异基因在蛋白水平上表达的相关性。进一步利用染色质免疫沉淀(ChIP)、实时定量PCR、 Western blot法及小干扰RNA(siRNA)等方法探索膀胱癌细胞过表达E2F3a后对NK细胞活化及杀伤影响的具体机制。结果 在膀胱癌细胞中过表达E2F3a能显著抑制NK细胞的活化及杀伤。膀胱癌细胞过表达E2F3a可显著上调CD24基因的表达,膀胱癌组织中E2F3a和CD24蛋白的表达呈显著正相关。CHIP结果显示,E2F3a能够结合CD24的启动子区并促进CD24基因的转录。干涉E2F3a过表达膀胱癌细胞中的CD24表达后,发现膀胱癌细胞E2F3a过表达所介导的NK细胞活化及杀伤抑制被显著缓解。结论 在膀胱癌细胞中E2F3a可结合CD24的启动子区促进CD24基因的转录及CD24蛋白的表达。膀胱癌细胞E2F3a通过上调CD24表达来抑制NK细胞的活化及杀伤。

自然杀伤细胞表面杀伤免疫球蛋白样受体和CD57分子的表达及其功能

目的:通过研究自然杀伤细胞(natural killer cells,NK)表面表达杀伤免疫球蛋白样受体(killer immunologublin receptor,KIR,包括CD158a,CD158b,CD158e)及CD57分子的NK细胞亚群功能的异同,探讨具有不同功能状态的NK细胞亚群。方法:收集于北京大学血液病研究所行造血干细胞移植的健康供者10例,基于CD107a表达及细胞内因子干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)的分泌,采用6色流式细胞学检测技术,检测不同NK细胞亚群NK细胞毒性及胞内细胞因子IFN-γ分泌功能的异同。结果:(1)表达CD57分子的NK细胞亚群占NK细胞的比例明显高于表达KIR分子的NK细胞亚群[(60.71%±5.71%)vs.(24.47%±3.95%),P<0.001)],进一步用KIR分子及CD57分子将NK细胞亚群区分为KIR+CD57-,KIR+CD57+,KIR-CD57+,KIR-CD57-四群NK细胞亚群,KIR-CD57+(43.03%±5.70%)及KIR-CD57-(32.45%±5.50%)所占比例相近(P=0.189),占NK比例最高,其次为KIR+CD57+(17.67%±3.39%)及KIR+CD57-(6.69%±0.95%);(2)进一步功能试验提示:表达CD57分子的NK细胞亚群与表达KIR分子的NK细胞亚群的杀伤活性及细胞因子IFN-γ分泌能力相近,二者差异无统计学意义,但明显低于CD56briNK细胞(P=0.046,P=0.035),但与CD56dimNK细胞亚群杀伤活性及IFN-γ分泌能力相近;无论从NK亚群杀伤活性还是从NK亚群IFN-γ分泌活性排列,KIR-CD57-细胞最高(46.22%±9.24%和23.41%±5.82%),其杀伤活性与细胞因子分泌功能与CD56briNK细胞亚群相近(49.60%±9.26%和30.67%±8.0%),其次依次为KIR+CD57-细胞,KIR-CD57+细胞和KIR+CD57+细胞,后二者功能上差异无统计学意义。结论:CD57分子及KIR受体均与NK细胞功能密切相关,提示KIR-CD57-为早期NK细胞,CD57阳性细胞可能为终末分化NK细胞,而KIR+CD57-细胞为中间型NK细胞。

自然杀伤细胞及CD8^(+)T细胞缺失对泡球蚴感染小鼠肝功能的影响

目的观察自然杀伤(NK)细胞、CD8^(+)T细胞的缺失对泡球蚴感染小鼠肝功能的影响。方法选取6~8周龄,体重为18~20 g的SPF级雌性C57BL/6小鼠共30只,按随机数字表法将其分为对照组、泡球蚴感染组、NK细胞清除组、NK细胞清除对照组、CD8^(+)T细胞清除组、CD8^(+)T细胞清除对照组,每组5只。泡球蚴感染组、NK细胞清除组、NK细胞清除对照组、CD8^(+)T细胞清除组、CD8^(+)T细胞清除对照组均经门静脉注射多房棘球绦虫头节(10个头节/μl,200μl),对照组经门静脉注射等量生理盐水。实验第4周,NK细胞清除组腹腔注射NK细胞清除抗体,100μg/次,1次/周,同时NK细胞清除对照组腹腔注射等量IgG2a同型对照抗体;CD8^(+)T细胞清除组腹腔注射CD8^(+)T细胞清除抗体200μg/次,1次/周,同时CD8^(+)T细胞清除对照组腹腔注射等量IgG2b同型对照抗体。实验第12周采集六组外周血分离血浆并检测小鼠肝肾功能指标总蛋白(TP)、碱性磷酸酶、谷丙转氨酶(GPT)、谷草转氨酶(GOT)、血清白蛋白(ALB)、乳酸脱氢酶、尿酸、尿素、肌酐。结果泡球蚴感染组外周血GPT、GOT高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。NK细胞清除组外周血GPT、GOT高于NK细胞清除对照组,TP、ALB低于NK细胞清除对照组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CD8^(+)T细胞清除组外周血TP低于CD8^(+)T细胞清除对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论泡球蚴感染会导致一定程度的肝功能损伤,尤其在NK细胞耗竭状态下肝功能损伤会进一步加重。

自然杀伤细胞CD57表达降低可增强原发性硬化性胆管炎患者的细胞毒性

原发性硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis,PSC)是一种损伤肝内外胆管的慢性自身免疫性疾病,常常与炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)相关,但其免疫病理学基础仍然是个谜[1]。自然杀伤(natural killer,NK)细胞包括CD56^(bright)CD16^(dim/-)(CD56^(bright))和CD56^(dim)CD16^(bright/+)(CD56^(dim))两种类型。

益气补肾颗粒治疗对微小残留白血病患者CD4^+CD8^(high) T淋巴细胞和自然杀伤细胞的影响

目的探讨益气补肾颗粒治疗后CD4+CD8highT淋巴细胞的变化及其对微小残留白血病(mini-mal residual leukemia,MRL)预后的意义。方法用多参数流式细胞技术比较分析36例MRL患者应用益气补肾颗粒治疗前后CD4+CD8 highT淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK细胞)改变。结果 (1)MRL患者3年持续完全缓解率、生存率分别为75.0%、80.5%,5年持续完全缓解率、生存率分别为63.9%、72.2%。(2)与治疗前比较,治疗后的MRL的CD4+CD8highT淋巴细胞百分率(%)和绝对值显著上升(P<0.01);(3)与治疗前比较,治疗后MRL的NK细胞百分率(%)和绝对值均显著上升(P<0.05,P<0.01)。结论益气补肾颗粒可能通过调节机体自身免疫功能,提高CD4+CD8highT和NK细胞的绝对数量,杀伤或抑制体内残存白血病细胞,延长MRL患者的无病生存期。

慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后自然杀伤细胞CD100表达水平变化

目的观察慢性丙型病毒性肝炎患者抗病毒治疗前后外周血中NK细胞、NK细胞亚群百分率及活化因子CD100表达水平变化。方法流式细胞术检测慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血中NK细胞、NK细胞亚群频率及膜型CD100表达水平;ELISA检测血清中可溶性CD100水平;采用Spearman相关检验分析CD100与谷丙转氨酶(ALT)、HCV-RNA之间的相关性。结果与健康对照组相比,慢性HCV感染患者CD56dimNK亚群百分率降低,而CD56neg亚群比率升高(P<0.05);抗病毒治疗后获得早期病毒学应答(EVR)者,CD56bright亚群百分率升高,CD56neg亚群比率显著降低(P<0.05);停药后获得持续性病毒学应答(SVR)者,总NK细胞及亚群频率恢复正常。与健康对照组相比,慢性HCV感染患者血清中sCD100水平显著降低(P<0.05);膜型CD100表达轻度降低,但无统计学差异;经抗病毒治疗获得EVR者,sCD100及膜型CD100水平均显著升高(P<0.05),获得SVR者又降至正常水平。Spearman相关性分析发现,NK细胞CD100表达与ALT水平呈正相关,与HCV-RNA滴度呈负相关(P<0.05)。结论 CD100表达降低与HCV持续感染有一定关系,并参与NK细胞对HCV清除。

金龙胶囊对晚期非小细胞肺癌患者CD4/CD8和自然杀伤细胞活性的影响

目的:观察金龙胶囊对晚期非小细胞肺癌(advancedNon-SmallCellLungCancer,ANSCLC)患者的CD4/CD8、自然杀伤细胞(NaturalKillercell,NK细胞)活性的影响。方法:89例非小细胞肺癌患者分治疗组49例和对照组40例,两组以顺铂、依托泊苷(EP)方案或紫杉醇、顺铂(TP)方案化学药物治疗(化疗)至少2个疗程。治疗组在化疗开始同时给予金龙胶囊4粒,每日3次口服,连服8周为1个疗程。所有病例在化疗前及第2个疗程结束后第15日检查CD4/CD8、NK细胞的活性。结果:治疗组治疗前后CD4/CD8分别为(1.2±0.3)和(1.5±0.4)(P<0.05),NK细胞活性分别为(27±9)和(32±10)(P<0.05);对照组相应为(1.2±0.3)和(1.2±0.2),(25±8)和(24±8)(均为P>0.05)。结论:金龙胶囊能增强晚期非小细胞肺癌患者的免疫水平。

细胞因子诱导杀伤细胞/自然杀伤细胞培养过程中CD16及CD11a的表达变化

背景:由于细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上表达的CD16和CD11a均与其介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用和直接接触杀伤的抗肿瘤效应密切相关,因此了解两种细胞扩增过程中这两种分子表达的强弱,对根据免疫效应细胞的最终用途决定两种细胞的最佳收获时机具有重要意义。目的:了解细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞在培养过程中的CD16和CD11a表达的变化规律。设计、时间及地点:细胞移植免疫学动态观察,于2006-09/2008-03在中山大学附属第二医院完成。材料:脐血来自本院健康足月妊娠产妇。方法:采用Ficoll-Hypaque法分离脐血单个核细胞,接种于含体积分数为0.15胎牛血清的IMDM,双抗生素青、链霉素各1×105U/L24孔培养板中,在培养体系中加入白细胞介素2、白细胞介素7、白细胞介素15、干细胞因子及FLT3L制备细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞,每隔3天半量换液及全量补充上述细胞因子。主要观察指标:流式细胞仪检测CD3+CD56+细胞因子诱导杀伤细胞以及CD3-CD56+自然杀伤细胞在4周培养过程中CD16和CD11a表达的变化。结果:CD16在细胞因子诱导杀伤细胞、自然杀伤细胞上的表达随着培养时间的延长逐渐增加,在两类细胞上均在培养的第4周达到最高峰,分别为(55.99±3.90)%和(7.86±1.66)%,但CD16在自然杀伤细胞上表达比例较低,整个培养过程中自然杀伤细胞上CD16的均数表达没有超过8%。CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞培养的第3周,自然杀伤细胞培养的第2周达到最高峰,分别为(49.32±6.32)%和(82.31±11.33)%,之后逐渐出现下降,到培养第4周几乎消失。结论:CD16和CD11a在细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞上的表达随培养时间呈动态变化,使用单克隆抗体联合细胞因子诱导杀伤细胞介导的抗体依赖性细胞介导的细胞毒作用效应时,细胞的收获期可在细胞培养的第4周,利用细胞因子诱导杀伤细胞和自然杀伤细胞的直接杀伤效应进行细胞过继免疫,那么收获细胞的时间以细胞培养的第3周为宜。

有丝分裂原体外活化成人外周血自然杀伤细胞CD69表达的研究

目的 :利用自然杀伤细胞 (NK)的早期活化标记CD69的表达探讨NK细胞体外活化的规律 ,促进这类细胞的临床应用 方法 :用Ficoll-Hypaque梯度离心法分离出正常成人外周血单个核细胞 (PBMC) ,分别在两种不同的有丝分裂原 ,植物血凝素 (PHA ,2 0 μg/mL)和佛波醇酯 (PDB ,10 - 7mol/L)存在的条件下进行培养 ,于 0、2、12、2 4h收获细胞后进行双色免疫荧光标记 ,以流式细胞术对NK细胞的CD69分子表达情况进行分析 结果 :NK细胞在PHA、PDB刺激 2h后CD69的表达明显上升 ,而且随时间的延长CD69的表达率逐渐增加 ,2 4h分别达到 ( 84 .96± 9.2 4 ) %、( 91 85± 2 .94 ) % ;PDB刺激组CD69的表达率在不同的时间点均比PHA组高 结论 :体外条件下 ,PHA、PDB均能快速上调NK细胞CD69表达 ,而且PDB( 10 - 7mol/L)作用明显强于PHA( 2 0 μg/mL)

幼年特发性关节炎患儿外周血自然杀伤细胞CD^(16+56+)的随访意义

目的:探讨幼年特发性关节炎全身型(systemic onset juvenile idiopathic arthritis,SOJIA)患儿治疗过程自然杀伤细胞(natural killer cells,NKcells)CD16+56+比率、骨髓细胞形态学等指标的动态变化在提示病情发展、改善预后方面的意义。方法:对我院2006年6月至2008年6月收治的30例SOJIA病例,分析治疗早期及联合治疗后多项炎症指标、外周血NK cells CD16+56+比率、骨髓细胞形态学动态变化与临床表现之间的关系。结果:所有患儿中10例病情反复难治者,均出现非特异性炎症指标升高,9例外周血NK cells CD16+56+比率降低,8例骨髓细胞形态学发生变化(4例发现异形淋巴细胞,4例有吞噬现象)。及时采用强联合治疗方案后,8例病情得到控制,2例进展为巨噬细胞活化综合征。结论:SOJIA临床表现多样,实验室指标非特异性指向,治疗中同时警惕NK cells CD16+56+比率和骨髓细胞形态学等变化,及早采用个体化强联合治疗方案,是阻止病情发展,改善预后的关键。

非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞中CD8^+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平及其对化疗疗效及预后影响

目的探讨非小细胞肺癌患者外周血单个核细胞中CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平,分析其对非小细胞肺癌患者化疗疗效及预后的影响。方法选取自2017年1月至2018年4月唐山市人民医院收治的60例非小细胞肺癌患者为观察组,并根据患者治疗后临床疗效分为缓解组(n=33)与未缓解组(n=27);选取同期进行体检的50例健康者为健康组。观察组分别于治疗前、后检测外周血单个核细胞中CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平;健康组体检当天检测上述指标。记录并比较健康组与观察组治疗前的上述指标。治疗后,评估观察组患者临床疗效,并比较不同疗效患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平,分析其对临床疗效影响;分析CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平对患者预后的影响。结果观察组治疗前CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平均高于健康组,差异有统计学意义(P<0.05)。未缓解组患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平明显高于缓解组,差异有统计学意义(P<0.05)。CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平是影响非小细胞肺癌患者临床疗效的独立危险因素(P<0.05)。绘制对数生存曲线显示,CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞高表达患者存活率低于低表达患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论非小细胞肺癌患者CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平较健康者明显增高,CD8+T细胞、调节性T细胞、自然杀伤细胞水平是影响患者临床疗效的独立危险因素。

老年慢性心衰患者外周血T淋巴细胞亚群和CD_(19)^+细胞及自然杀伤细胞水平分析

目的探讨老年冠心病慢性心力衰竭(CHF)患者外周血CD_3^+,CD_4^+,CD_8^+,CD_4^+/CD_8^+,B淋巴细胞CD^+_(19)和NK细胞CD^+_(16+56)的水平及意义。方法采用流式细胞仪检测16例冠心病慢性心力衰竭患者(心力衰竭组)、18例冠心病非慢性心力衰竭患者(非心力衰竭组)和16例正常对照组(对照组),检测外周血CD_3^+,CD_4^+,CD_8^+,CD_4^+/CD_8^+,B淋巴细胞CD^+_(19)和NK细胞CD^+_(16+56)绝对计数,比较三组间的差异。结果心力衰竭组CD_4^+低于正常对照组和非心力衰竭组(P<0.05),CD_8^+心力衰竭组高于非心力衰竭组(P<0.05),CD_4^+/CD_8^+心力衰竭组低于非心力衰竭组(P<0.05)。NK细胞CD^+_(16+56)心力衰竭组高于正常对照组和非心力衰竭组(P<0.05)。B淋巴细胞CD^+_(19)心力衰竭组低于正常对照组和非心力衰竭组(P<0.05)。结论心力衰竭组患者外周血CD_4^+、CD_8^+、CD_4^+/CD_8^+、CD^+_(16+56),CD^+_(19)有明显改变,提示心力衰竭组患者存在免疫调节功能受损。

不明原因早期自然流产患者蜕膜淋巴细胞表面CD57的表达

以１０ 例正常妊早期行人工流产的健康孕妇作为对照组，采用间接免疫荧光标记及流式细胞计数的方法，对１０ 例不明原因早期自然流产患者蜕膜组织中淋巴细胞表面分化抗原ＣＤ５７ 的表达进行了检测。实验组与对照组相比，蜕膜淋巴细胞表面ＣＤ５７ 的表达显著升高，分别为２２ ．３８ ％ ±１ ．９８ ％ 、１８ ．９９％ ±１ ．８３ ％ （ Ｐ＜ ０ ．０００５） 。上述结果表明，患者蜕膜淋巴细胞表面ＣＤ５７ 的表达发生了改变，这为此种疾病的免疫学发病因素的探讨提供了一定的实验室参考依据。

反复种植失败患者黄体中期自然杀伤细胞的表达研究

目的比较反复种植失败(RIF)患者和经产妇黄体中期外周血和子宫内膜组织CD56^(+)自然杀伤(NK)细胞和CD16+NK细胞的差异,探讨RIF患者全身和局部免疫的特点。方法选取2018年1月至12月在广西壮族自治区妇幼保健院行体外受精(IVF)助孕的RIF患者作为RIF组(20例),经IVF助孕成功分娩1年以上的患者作为对照组(20例),取两组患者黄体中期的外周血和子宫内膜组织,使用流式细胞术测定两组外周血CD56^(+)NK细胞的比率,并使用免疫组织化学方法检测两组子宫内膜CD56^(+)NK细胞和CD16+NK细胞的表达。比较两组患者的外周血CD56^(+)NK细胞的比率和子宫内膜CD56^(+)NK细胞和CD16+NK细胞的表达。结果RIF患者黄体中期外周血CD56^(+)NK细胞比率高于正常组,子宫内膜CD56^(+)NK细胞比率低于正常组,CD16+NK细胞比率高于正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论外周血检测NK细胞比率可能反映子宫内膜局部的免疫状态。

干扰素-γ、CD47和淋巴细胞亚群在脓毒症患者中的表达及其与预后的关系

目的探讨脓毒症患者血清干扰素-γ(IFN-γ)、CD47和淋巴细胞亚群水平及其与预后的关系。方法选取180例脓毒症患者为观察组,选择同期180例健康体检志愿者为对照组。根据患者入院28 d的生存情况,将患者分为生存组120例和死亡组60例。采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测脓毒症患者血清IFN-γ、CD47水平,流式细胞术检测血清淋巴细胞亚群水平,并对影响脓毒症患者的预后因素进行Logistic回归分析。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IFN-γ、CD47、淋巴细胞亚群水平预测脓毒症患者预后的价值。结果与对照组比较,观察组血清IFN-γ、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞水平降低,CD47水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与生存组比较,死亡组血清IFN-γ、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞水平降低,急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ(APACHEⅡ)评分、序贯器官衰竭(SOFA)评分、C反应蛋白、降钙素原、内毒素、CD47水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。SOFA评分与血清IFN-γ、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞水平呈负相关(r=-0.469、-0.572、-0.521、-0.505,P<0.05),与血清CD47水平呈正相关(r=0.539,P<0.05)。APACHEⅡ评分、SOFA评分、C反应蛋白、降钙素原、内毒素和CD47水平升高是脓毒症患者预后的危险因素,IFN-γ水平、T淋巴细胞、B淋巴细胞和自然杀伤细胞增高是患者预后的保护因素(P<0.05)。IFN-γ、CD47、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞单独检测和联合检测预测脓毒症患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.805、0.808、0.888、0.846、0.854、0.984,联合检测的AUC优于单独检测(P<0.001)。结论脓毒症患者血清IFN-γ、T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤细胞水平降低,CD47水平升高,其水平变化对预测脓毒症患者的预后具有一定价值。

CD38在不同组织和自然杀伤细胞/T细胞淋巴瘤中的表达

目的探讨CD38在不同组织和自然杀伤细胞/T细胞淋巴瘤(NKTCL)中的表达。方法采用标准免疫组化技术检测169例正常组织、20例NKTCL组织和20例增生淋巴结组织中CD38蛋白表达。采用流式细胞术检测NKTCL不同细胞系中CD38蛋白表达。结果169例不同解剖部位的正常组织中,CD38在脾、精囊腺、扁桃体、输卵管和乳腺组织中呈现广泛的强阳性表达,在前列腺、肺、膀胱、肾和直肠组织中显示不同程度的阳性表达,其余组织中CD38阴性表达。NKTCL组织中CD38表达高于增生淋巴结组织(Z=2.394,P=0.017)。NKTCL细胞系中CD38也显示高表达,其中NKL和YT细胞系中阳性表达,NKYS细胞系中部分表达,而KHYG-1细胞系中阴性表达。结论CD38在各组织中表达有限,在NKTCL中高表达,可以作为免疫治疗靶标。靶向CD38治疗时,临床医生应考虑到对高表达CD38非靶器官造成的可能损害。

原发性肝癌患者外周血CD39^+,CD73^+调节性T细胞和自然杀伤(NK)细胞的表达及其与肝损伤的相关性

目的分析原发性肝癌(HCC)患者CD39^+和CD73^+调节性T细胞(Treg)表达水平,及其与肝损伤的相关性。方法采用流式细胞术检测220例HCC患者(HCC组)、100例慢性乙肝患者(CHB组)和100例健康体检者(C组)外周血CD4^+Treg细胞中CD39^+,CD73^+,自然杀伤(NK)细胞的表达,比较分析其与丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等肝损伤指标的关系。结果与C组比较,CHB组、HCC组外周血CD4^+Treg细胞中CD39^+[(11.21±1.57),(15.44±2.42)vs(8.14±1.25)]%,CD73^+[(13.86±3.61),(19.52±4.57)vs(10.31±2.56)]%细胞比例明显升高,而NK[(20.13±2.77),(17.05±2.40)vs(24.15±3.65)]%细胞比例明显下降(F=663.61,255.18,182.26,均P<0.001)。与CHB组比较,HCC组外周血CD4^+Treg细胞中CD39^+,CD73^+细胞比例明显升高,而NK细胞比例明显下降(P<0.001)。并发肝损伤的肝癌患者外周血CD4^+Treg细胞中CD39^+[(17.16±2.54)vs(14.23±2.30)]%,CD73^+[(20.21±4.78)vs(18.04±3.29)]%细胞比例明显高于无肝损伤的肝癌患者,而NK[(15.57±2.31)vs (19.13±2.73)]%细胞比例则明显降低,差异均有统计学意义(F=8.89,3.99,10.09,均P<0.001)。CD39^+,CD73^+与NK细胞呈显著负相关(r=-0.452,-0.424,均P<0.05)。AST,ALT与CD39^+,CD73^+细胞比例呈显著正相关(r=0.342,0.377,P<0.05),与NK细胞比例呈显著负相关(r=-0.352,P<0.05)。结论 HCC患者外周血CD39^+,CD73^+Treg表达水平明显升高,且与肝损伤密切相关。阻断CD39^+,CD73^+的表达可能有望成为抗肿瘤免疫治疗的一种安全有效的途径。

CD34^+CD38^-KG1a白血病干细胞对同种异体自然杀伤细胞的抵抗作用及其机制

目的探讨CD34^+CD38^-KG1a白血病干细胞抵抗同种异体自然杀伤(NK)细胞杀伤作用的机制。方法采用免疫磁珠法(MACS)分选CD34^+CD38^-KG1a细胞和4例健康个体外周血中NK细胞,并采用流式细胞术检测纯度;乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测NK细胞在不同效靶比(5∶1,10∶1,20∶1)下对K562和CD34^+CD38^-KG1a细胞的杀伤作用;聚合酶链式反应-序列特异性引物法分析NK细胞KIR和CD34^+CD38^-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因分型;流式细胞术检测K562和CD34^+CD38^-KG1a细胞表面主要组织相容性复合体(MHC)-I类链相关分子A/B、人巨细胞病毒UL16结合蛋白(ULBP)1~3和人类白细胞抗原(HLA)-Ⅰ类分子的表达。结果分选的CD34^+CD38^--KG1a细胞和NK细胞纯度分别为(94.25±2.16)%、(91.70±2.05)%。NK细胞在各效靶比下对CD34^+CD38^-KG1a细胞的杀伤率均低于K562细胞(P<0.05)。4例健康个体NK细胞KIR基因型为KIR2DL1、KIR2DL3、KIR3DL1和KIR3DL2,CD34^+CD38^-KG1a细胞HLA-Ⅰ基因型为A30、30,B51、78,Cw4、16。K562细胞高表达NKG2D配体,CD34^+CD38^-KG1a细胞几乎不表达NKG2D配体,CD34^+CD38^-KG1a细胞中NKG2D配体表达率显著低于K562细胞(P<0.05);K562细胞中几乎不表达HLA-Ⅰ,CD34^+CD38^-KG1a细胞高表达HLA-Ⅰ,CD34^+CD38^-KG1a细胞中HLA-Ⅰ的表达率显著高于K562细胞(P<0.05)。结论CD34^+CD38^-KG1a细胞明显抵抗同种异体NK细胞的杀伤作用,其机制可能与高表达HLA-Ⅰ分子和低表达NK2D配体有关。

中国南方单中心622例成熟T细胞和自然杀伤细胞淋巴瘤患者中CD30在结外鼻型自然杀伤/T细胞淋巴瘤组织中的表达

背景与目的成熟T细胞和自然杀伤细胞(natural killer,NK)淋巴瘤为非霍奇金淋巴瘤中的一类异质性肿瘤,其中结外鼻型NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T?cell lymphoma,nasal type,ENKTL)为一个侵袭性的亚型,伴有散发性CD30表达。但是CD30表达在ENKTL中的意义仍存有争议。本研究的目的是根据2016年世界卫生组织(World Health Organization,WHO)的分类指南,对大样本成熟T细胞和NK细胞淋巴瘤患者进行分类,并研究CD30表达与ENKTL患者预后之间的关系。方法我们选择了2009年9月1日到2013年8月31日之间,来我中心治疗的所有成熟T细胞和NK细胞淋巴瘤的患者。根据WHO 2016年淋巴瘤分类指南进行了分类,分析了CD30表达与ENKTL患者临床病理因素的相关性,并评价了CD30表达对ENKTL患者预后的影响。结果我们共鉴定了622例成熟T细胞和NK细胞淋巴瘤的患者,其中317例(51.0%)为ENKTL患者。我们在其中的91例ENKTL患者标本中检测了CD30的表达,其中43例(47.3%)表达阳性。在这91例ENKTL患者中,CD30表达与临床病理因素无相关性,CD30表达阳性对患者预后无影响。结论在本中心确诊的成熟T细胞和NK细胞淋巴瘤中,ENKTL是最常见的一个亚型。CD30在ENKTL中高频表达,可作为一个治疗靶点;然而它可能不是ENKTL的预后标志物。