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突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化
被引量:
1
1
作者
任书荣
高美华
《中国动脉硬化杂志》
CAS
CSCD
2006年第1期9-12,共4页
目的探讨2种突变CD59分子(HM3、HM4)糖基化前后抗补体活性的变化,为糖尿病血管增殖的发生机制提供理论基础。方法采用重组聚合酶链反应定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点“41位赖氨酸—44位组氨酸”将44位的组氨酸基因位置改变,构建2...
目的探讨2种突变CD59分子(HM3、HM4)糖基化前后抗补体活性的变化,为糖尿病血管增殖的发生机制提供理论基础。方法采用重组聚合酶链反应定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点“41位赖氨酸—44位组氨酸”将44位的组氨酸基因位置改变,构建2种不同的CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞。G418筛选稳定转染细胞克隆,免疫标记技术检测筛选突变CD59基因蛋白高表达株。染料释放实验检测突变CD59分子糖基化前后抗补体活性。结果序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-突变CD59重组真核表达载体系统。经酶免疫组织化学、荧光免疫组织化学和流式细胞术鉴定出较高表达突变CD59分子的阳性细胞克隆。免疫印迹技术检测出阳性细胞克隆裂解液中有1条相对分子质量约20 000的CD59蛋白表达带。染料释放实验初步证实突变CD59分子具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低。结论2种突变CD59分子均具有抗补体活性,高糖环境下易被糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖的发生机制提供了线索。
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关键词
分子生物学
突变人
cd
59
抗补体
活性
的变化
真核表达
基因定点突变
CHO细胞
染料释放试验
糖基化
下载PDF
职称材料
血液透析对转化生长因子β1及补体调节蛋白CD59基因表达的影响
被引量:
1
2
作者
孟建中
李丹丹
+3 位作者
彭侃夫
张永寿
徐悦
肖鹏云
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期460-463,共4页
目的 研究不同透析膜对维持性血液透析 (MHD)患者外周血转化生长因子 β1及补体调节蛋白CD5 9活性表达的影响。方法 通过流式细胞术和酶联免疫吸附法测定长期采用铜仿膜 (CU)与聚砜膜 (PSU)透析患者外周血TGF β1水平及CD5 9活性表达...
目的 研究不同透析膜对维持性血液透析 (MHD)患者外周血转化生长因子 β1及补体调节蛋白CD5 9活性表达的影响。方法 通过流式细胞术和酶联免疫吸附法测定长期采用铜仿膜 (CU)与聚砜膜 (PSU)透析患者外周血TGF β1水平及CD5 9活性表达。结果 MHD患者血浆TGF β1水平明显增加 (P <0 .0 5 ) ,其中CU组为 (81.7± 8.7)ng mL ;PSU组为 (6 4 .3±8.3)ng mL ,与正常对照组 (49.3± 6 .1)ng mL相比均有显著差异 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;而PSU组与CU组相比 ,外周血TGF β1水平明显下降 (P <0 .0 5 )。CD5 9在正常人外周血单个核细胞中无表达 ,而在尿毒症未透析组及血透组均有表达 ,其中未透析组表达较低 ,而血透组表达较高 ,CU膜血透组较PSU血透组表达要高 (P <0 .0 5 )。经相关分析结果显示 :CU组与PSU组内TGF β1水平与CD5 9表达均呈现良好的相关性 (r=0 .6 4 0 9与 0 .5 83,P <0 .0 5 )。 结论 血液透析通过血液 透析膜间相互反应可活化补体 ,诱导外周血单个核细胞 (PBMC)合成TGF β1增多 ,而增高的TGF β1水平可上调CD5 9基因表达 ,抑制补体异常活化造成的细胞破坏 ,对机体具有代偿性保护意义。然而不同透析膜如CU和PSU对MHD患者TGF β1与CD5 9的影响有所不同 。
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关键词
血液透析
转化生长因子Β1
补体调节蛋白
基因表达
cd59活性
尿毒症
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职称材料
题名
突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化
被引量:
1
1
作者
任书荣
高美华
机构
青岛大学医学院免疫学教研室
出处
《中国动脉硬化杂志》
CAS
CSCD
2006年第1期9-12,共4页
基金
国家自然科学基金资助(30170893)
文摘
目的探讨2种突变CD59分子(HM3、HM4)糖基化前后抗补体活性的变化,为糖尿病血管增殖的发生机制提供理论基础。方法采用重组聚合酶链反应定点诱变技术在CD59易于糖基化的位点“41位赖氨酸—44位组氨酸”将44位的组氨酸基因位置改变,构建2种不同的CD59突变基因,克隆入真核表达质粒pALTER-MAX。利用阳离子脂质体将重组质粒和pcDNA3共转染中国仓鼠卵巢细胞。G418筛选稳定转染细胞克隆,免疫标记技术检测筛选突变CD59基因蛋白高表达株。染料释放实验检测突变CD59分子糖基化前后抗补体活性。结果序列测定及酶切鉴定均证实成功构建了pALTER-突变CD59重组真核表达载体系统。经酶免疫组织化学、荧光免疫组织化学和流式细胞术鉴定出较高表达突变CD59分子的阳性细胞克隆。免疫印迹技术检测出阳性细胞克隆裂解液中有1条相对分子质量约20 000的CD59蛋白表达带。染料释放实验初步证实突变CD59分子具有抗补体活性,糖基化后抗补体活性明显降低。结论2种突变CD59分子均具有抗补体活性,高糖环境下易被糖基化,糖基化后抗补体活性明显降低,为进一步研究糖尿病血管增殖的发生机制提供了线索。
关键词
分子生物学
突变人
cd
59
抗补体
活性
的变化
真核表达
基因定点突变
CHO细胞
染料释放试验
糖基化
Keywords
cd
59
Eukaryotie Expression System
Site-Directed Mutagenesis
CHO
Dye Release Tests
Functional Assays
Glycation
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
血液透析对转化生长因子β1及补体调节蛋白CD59基因表达的影响
被引量:
1
2
作者
孟建中
李丹丹
彭侃夫
张永寿
徐悦
肖鹏云
机构
济南军区总医院肾脏治疗中心
出处
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003年第6期460-463,共4页
基金
军队回国留学人员启动基金资助项目 (98H0 4 8)
文摘
目的 研究不同透析膜对维持性血液透析 (MHD)患者外周血转化生长因子 β1及补体调节蛋白CD5 9活性表达的影响。方法 通过流式细胞术和酶联免疫吸附法测定长期采用铜仿膜 (CU)与聚砜膜 (PSU)透析患者外周血TGF β1水平及CD5 9活性表达。结果 MHD患者血浆TGF β1水平明显增加 (P <0 .0 5 ) ,其中CU组为 (81.7± 8.7)ng mL ;PSU组为 (6 4 .3±8.3)ng mL ,与正常对照组 (49.3± 6 .1)ng mL相比均有显著差异 (P <0 .0 1,P <0 .0 5 ) ;而PSU组与CU组相比 ,外周血TGF β1水平明显下降 (P <0 .0 5 )。CD5 9在正常人外周血单个核细胞中无表达 ,而在尿毒症未透析组及血透组均有表达 ,其中未透析组表达较低 ,而血透组表达较高 ,CU膜血透组较PSU血透组表达要高 (P <0 .0 5 )。经相关分析结果显示 :CU组与PSU组内TGF β1水平与CD5 9表达均呈现良好的相关性 (r=0 .6 4 0 9与 0 .5 83,P <0 .0 5 )。 结论 血液透析通过血液 透析膜间相互反应可活化补体 ,诱导外周血单个核细胞 (PBMC)合成TGF β1增多 ,而增高的TGF β1水平可上调CD5 9基因表达 ,抑制补体异常活化造成的细胞破坏 ,对机体具有代偿性保护意义。然而不同透析膜如CU和PSU对MHD患者TGF β1与CD5 9的影响有所不同 。
关键词
血液透析
转化生长因子Β1
补体调节蛋白
基因表达
cd59活性
尿毒症
Keywords
Hemodialysis
Transforming growth factor-β1
Biocompatibility
cd
59
分类号
R459.5 [医药卫生—治疗学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
突变人CD59分子糖基化前后抗补体活性的变化
任书荣
高美华
《中国动脉硬化杂志》
CAS
CSCD
2006
1
下载PDF
职称材料
2
血液透析对转化生长因子β1及补体调节蛋白CD59基因表达的影响
孟建中
李丹丹
彭侃夫
张永寿
徐悦
肖鹏云
《免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2003
1
下载PDF
职称材料
已选择
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